L'examen des télomères G-structure en porte à faux Trypanosoma brucei</em
Summary
Les télomères sont essentiels pour la stabilité des chromosomes et le G-télomères surplombent la structure est essentielle pour la télomérase médiée par le maintien des télomères. Nous avons récemment adopté deux méthodes pour détecter les télomères G-faux structure dans<em> Trypanosoma brucei</em>, Qui sont natifs en gel d'hybridation et la ligature médiée par extension d'amorce, qui seront décrits.
Abstract
Le G-télomères surplombent structure a été identifiée chez les eucaryotes, y compris de nombreuses levures, les vertébrés, et Trypanosoma brucei. Elle sert de substrat pour la télomérase pour la synthèse de novo d'ADN des télomères et est donc important pour le maintien des télomères. T. brucei est un parasite protozoaire qui provoque la maladie du sommeil chez les humains et le nagana chez les bovins. Une fois infecté hôte mammifère, T. cellulaire brucei commutateurs régulièrement ses antigènes de surface pour échapper à l'attaque immunitaire de l'hôte. Nous avons récemment démontré que le T. brucei télomères structure joue un rôle essentiel dans la régulation de l'expression du gène antigène de surface, ce qui est essentiel pour T. pathogenèse brucei. Toutefois, T. brucei télomères structure n'a pas été étudiée en raison de la limitation des méthodes d'analyse de cette structure spécialisée. Nous avons maintenant adopté avec succès le natif de gel-hybridation et ligation médiée par des méthodes d'extension d'amorces pour l'examen des télomères G-faux structure et une méthode de ligature adaptateur pour la détermination de la borne télomères nucléotides dans T. cellules brucei. Ici, nous allons décrire les protocoles en détail et comparer leurs avantages et leurs limites.
Protocol
Discussion
Trypanosoma brucei provoque la maladie du sommeil chez les humains. Cette maladie, si elle n'est pas traitée, est inévitablement mortelle. T. cellules brucei chez des hôtes mammifères subissent une variation antigénique régulièrement afin d'échapper à l'attaque immunitaire de l'hôte 7. C'est pourquoi il est très difficile d'éliminer T. cellules brucei fois l'infection est établie. Nous avons récemment démontré que les té…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous tenons à remercier le Dr Carolyn Prix pour les discussions scientifiques et suggestions judicieuses. Ce travail est soutenu par le NIH octroi AI066095 (PI: Bibo Li).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
References
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