Summary
تظاهر في هذا الفيديو هي تقنيات الفلاش تجميد وsectioning الجنينية أنسجة المخ من الماوس. يتم إعطاء نصائح مفيدة لاستخدام ناظم البرد ، بما في ذلك الطرق لحل المشاكل التي يمكن استخدامها في حين قطع لضمان أن ينجم عنها من الأنسجة المقاطع خالية من الشقوق والتشوهات الأخرى.
Protocol
- إصلاح الأنسجة في بارافورمالدهيد 4 ٪ في برنامج تلفزيوني عن الوقت المطلوب.
- السكروز لبث الأنسجة (cryoprotection)
- جعل 30 ٪ في محلول السكروز ث PBS / V 2059 في الأنبوب.
- شطف الأنسجة 3X في برنامج تلفزيوني (~ 5 دقائق مع هزاز).
- النسيج في محلول السكروز مكان 30 ٪. سوف الأنسجة لا تغرق.
- مكان النسيج في 4 درجات مئوية خلال الليل ، أو حتى قد غرقت.
- cryomold التسمية المناسبة مع حجم المعلومات والتوجيه.
- ملء مع cryomold أكتوبر (تجنب فقاعات).
- نقل الأنسجة لحمام أكتوبر وذلك مع معطف أكتوبر
- نقل الأنسجة لفي أكتوبر cryomold.
- توجيه النسيج تحت المجهر.
- صب النيتروجين السائل في طبق بتري بلاستيكية.
- بسرعة وبدقة أقل من الأنسجة في cryomold في النيتروجين. (لا يغرق في أعلى cryomold).
- عندما أكتوبر صلبة بيضاء ، ضع الأنسجة المجمدة في الثلاجة -80 درجة مئوية للتخزين.
- يوازن الأنسجة ل~ 20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل. قبل sectioning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tissue-Tek Cryomold | Ted Pella, Inc. | 27181 | |
| O.C.T. | Ted Pella, Inc. | 27050 | |
| Sucrose solution | 30% sucrose solution in PBS w/v | ||
| paraformaldehyde | 4% paraformaldehyde in PBS |
