闪存冻结和Cryosectioning E12.5小鼠脑

Summary

这个视频展示了闪光冻结和从小鼠胚胎脑组织切片技术。使用低温恒温器的有用提示，其中包括排除故障的方法，可以用来切割，以确保由此产生的组织部分无裂缝和其他扭曲。

Protocol

1. 修复所需的时间为4％多聚甲醛的PBS组织。
2. 蔗糖注入组织（cryoprotection）
   1. 请在PBS W / V在2059管30％的蔗糖溶液。
   2. 在PBS冲洗组织的3倍（与摇摆〜5分钟）。
   3. 将组织30％的蔗糖溶液中。组织不会下沉。
   4. 组织放置在4℃过夜，或直至它已经沉没。
3. 标签适当大小cryomold信息和导向。
4. 填写cryomold与华侨城（避免气泡）。
5. 转移组织华侨城浴和大衣与华侨城
6. 组织转移至十月在cryomold。
7. 东方的组织在显微镜下。
8. 塑料培养皿中倒入液氮。
9. 快速，细致地降低入氮气cryomold组织。 （不淹没cryomold顶部。）
10. 当华侨城是白色固体，放入-80℃，储存冷冻的冷冻组织。
11. 平衡〜20 ° C的组织至少30分钟。前切片。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tissue-Tek Cryomold	Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T.	Ted Pella, Inc.	27050
Sucrose solution			30% sucrose solution in PBS w/v
paraformaldehyde			4% paraformaldehyde in PBS