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Medicine

Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

doi: 10.3791/1989 Published: December 4, 2010

Summary

이 동영상은 쥐에 이식 vasculopathy (TVP)의 개발을 연구하기위한 간단한 모델로 orthotopic 대동맥 이식 모델을 보여줍니다.

Abstract

만성 거부 연구 모델은 이식 vasculopathy (TVP)의 개발 기간 동안 pathobiological 및 pathophysiological 프로세스를 조사하기 위해 필수적입니다.

심장 혈관 만성 거부 연구에 대한 일반적으로 사용되는 동물 모델은 실험실 설치류에서 수행한 heterotopic 심장 이식 모델입니다. 오노와 린지 (3) 자신의 기술을 출판 이후이 모델은 실험에 널리 사용됩니다. 혈관의 연구 결과를 분석하기 위해 심장은 sectioned되어야 모든 선박 측정해야합니다.

심혈관 questionings에서 만성 거부를 조사하기 위해 또 다른 방법은 대동맥 이식 모델 (1, 2)입니다. orthotopic 대동맥 이식 모델에서 대동맥 쉽게 histologically (2) 평가하실 수 있습니다. 급성 혈관 거절 우리가 임상 설정에서 찾을 것과 유사한 CAV의 개발을 방지하지 않는 주요 혼란함을 주죠 요인과 시클 로스 포린 A (CSA) 치료 (4 아니므로 PVG - 투 - ACI 모델, CAV 연구에 특히 유용합니다 ). CSA의 A7 일 기간은 급성 거부를 방지하고 TVP​​의 개발과 함께 장기적인 생존을 달성하기 위해이 모델이 필요합니다.

이 모델은 또한 xenogeneic 모델 (5)에서 급성 세포 거부와 미디어 괴사를 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

Protocol

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약 250-300그램 무게 쥐 찰스 리버 (Sandhofer 웨그 7 D - 97633 Sulzfeld)에서 구입할 수 있습니다.
이식은 기증자 PVG로 쥐, 그리고 수신자가 같은 ACI의 쥐를 사용하여 수행됩니다.

쥐는 일반 조건, 공급 표준 쥐 차우와 물 광고 libidum 아래에 위치해 있습니다.

모든 수술기구는 사용하기 전에 소독을하고 있습니다.

기증자 준비 :

유도 챔버를 사용하여 isoflurane와 쥐 (2,5-3 %)를 마취.

  1. 복부와 흉부 머리를 면도하고 그 뒷면에있는 쥐 장소 및 마취를 유지하기 위해 코와 입을 통해 안면을 넣으십시오.
  2. 널리 프로보 - 요오드, 다음 사용하는 80 % 에탄올을이 단계를 세 번 반복을 사용하여 복부 및 흉부 영역을 소독.
  3. 뒷다리가 쥐를 충분 anesthesized되어 있는지 확인하는 곤란 반사를 확인합니다.
  4. 복부를 열고 복부 대동맥에 구멍을 절단하여 쥐 ...에게서 피를 뽑다.
  5. 조심스럽게 하강 흉부 대동맥을 찾으려면 흉부를 엽니다.
  6. 지방, 신경 및 식도와 같은 주변 조직에서 흉부 대동맥을 절개하다.
  7. 대동맥의 조직 손상없이 couter를 사용하여 대동맥의 1.5cm 조각을 철회.
  8. 감기 무균 식염수에 철저하게 대동맥 이식을 Perfuse 4에서 그래프트를 저장 ° C.

받는 사람 :

유도 챔버를 사용하여 isoflurane와 쥐 (2,5-3 %)를 마취. 체온은 수술하는 동안 유지됩니다.

  1. 복부 영역을 면도하고 마취 동안 건조에서 눈을 방지하기 위해 눈 연고를 적용합니다.
  2. 의 뒷면에있는 쥐를 삽입하고 마취를 유지하기 위해 코와 입을 통해 안면을 넣으십시오.
  3. 프로보 - 요오드, 다음 사용하는 80 % 에탄올을이 단계를 세 번 반복을 사용하여 복부 지역을 소독.
  4. 뒷다리가 쥐를 충분 anesthesized되어 있는지 확인하는 곤란 반사를 확인합니다.
  5. 복부를 열려면 두 단계의 피부와 근육을 분리 정중선 복부 절개를 수행합니다.
  6. 예열 생리 moisturized 분말 무료로 글러브에 장내를 놓습니다. 수분의 손실을 방지하기 위해 내장 주변의 장갑을 접으십시오.
  7. 복부 대동맥을 덮고있는 지방 조직을 제거합니다.
  8. 대동맥은 혈관의 가지에 대한 손상을하지 않도록주의, 분기점에 infrarenal 지역을 형성 해부하다.
  9. 경우 대동맥의 필요 ligate 지점.
  10. 먼저 혈액 흐름을 막을 수있는 해부하는 대동맥의 infrarenal 부분에 microsurgical 클램프를 사용합니다.
  11. 다음 대동맥의 분기점에 가까운 두 번째 클램프를 놓으십시오.
  12. 혈액의 흐름이 중지 이제, 대동맥의 짧은 세그먼트를 제거합니다.
  13. 적절한 길이로 단축하고 간격에 위치, 얼음 0,9 % 멸균 식염수에 보관되고있는 기증자의 대동맥 이식을 가져가라.
  14. 8-0 prolene 봉합사를 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여 실행 봉합을 수행하는받는 사람 대동맥에 기증자의 대동맥을 연결합니다. 두개골 엔드 - 투 - 엔드 문합와 함께 시작합니다.
  15. 말초 엔드 - 투 - 엔드 문합가 완료되면 조심스럽게 말초 클램프를 엽니다.
  16. 아무 출혈은 말초 클램프를 열 후가없는 경우, 신중하게 두개골 겸자를 엽니다. 봉합에서 출혈의 경우에는, 다시 클램프를 닫습니다 출혈을 찾아 하나의 바늘을 사용하여 출혈을 중지합니다.
  17. 대동맥의 말초 끝에 보이는 펄스가 있어야합니다.
  18. 다음 복부에 다시​​ 장내를 이동합니다.
  19. prewarmed 무균 식염수에 복부를 플러쉬.
  20. 6-0 prolene 실행 봉합 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여 복벽의 근육 레이어를 닫습니다.
  21. 피부를 닫습니다 봉합을 실행 5-0 prolene을 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용합니다.
  22. 쥐가 마취 여전히 있지만, subcutaneously Carprofen을 4-5mg/kg 주입.
  23. 절차의이 유형에 대한 충분한 진통제를 제공하기 위해 metamizol 3 일 게시물 이식을위한 진통제에 대한 식수 (100ml 당 50mg Metamizol)에 추가됩니다.

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Discussion

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여러 가지 이유로 우리는 orthotopic 대동맥 이식 모델에게 heterotopic 심장 이식 모델에 비해 TVP의 발전을 조사하는 더 정확한 방법을 발견 :
heterotopic 심장 이식 모델은 외과 의사의 능력을 좀 더 복잡하고 오류가 발생하기 쉬운 도전적일 수있는 반면, 수술 기법에 대해서, 대동맥 이식 모델은 엔드 - 투 - 엔드 - 문합의 단독 달성을 필요로하는, 쉽게 가능한 방법을 구체화 두 주요 혈관에 대한 엔드 - 투 - 사이드 문합을 필요로하는.

histological 표본의 분석 및 측정 크게 이식 vasculopathy 대신 목표를 확보에서 탐정을 핸디캡 수있는 크기와 헌법에 거대한 다양성을 보여주는 다수의 작은 심장 혈관의 탐험의 단독 정의된 직경 하나의 용기에 심사 수 있기 때문에 용이 있으며 신뢰할 수있는 결과입니다. heterotopic 심장 이식 모델에서 좋은 interindividual 다양성을 기본 페리 또는 심근 혈관을 비교하기 어려운 반면받는 사람의 흉부 대동맥은 직경 형태학의 모습에 비교 간편하고 신뢰할 수있는 개체를 제공하는 정상적인 통제 역할을 수 있습니다.

이러한 연구 결과 이​​외에도 대동맥 allografts가 적용되는 수술 절차에서 발생할 수 있습니다 파괴 histological 변경에 대해서 경향이되지 않습니다. 섬유증 또는 infarctions이 발생하고 가능성 평가를 위해 그들이 적합 렌더링, heterotopic 심장 이식 조직 및 임베디드 혈관에 영향을 줄 수 있습니다.

그 크기와 헌법으로 인해 대동맥는 동심 내막 두껍게 정도로 혈관 벽의 세 층,에 myocyte 괴사 각각 이내 형태학의 생화학 및 분자 리모델링의 간단하고 정확한 조사를 위해 이상적인 대상이다 미디어 또는 크린 시토킨 및 성장 요인의 증가 합성.

대동맥 allograft에 의해 생성된 면역 반응이 실제로 이식에서 만성 변경을 실행하기에 충분하지만, 급성 거부 에피소드 (2) 유도 부족 발견되었습니다. 이식이 중급 immunogenicity 덕분에, 아무 이식은 급성 거부 및 CSA와 노 초기 immunosuppressive 치료가 필요합니다에 손실되지 않습니다. 모델 따라서 자주 heterotopic 심장 이식 (2, 4)에서 볼 예방 immunosuppression에 의해 영향이나 위조하지 않고 만성 allograft의 vasculopathy에 마약의 초기 효과를 조사 수 있습니다.

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Disclosures

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

Acknowledgments

저자는 그녀의 histological 일을 크리스티안 Pahrmann 감사합니다.

기금

소냐 Schrepfer는 독일 Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 SCHR992/4-1)에서 연구 부여를 받았습니다.]

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical microscope (magnification 25x)
Isoflurane
shaver
Provo-Iodine
ice cold 0.9% saline
prewarmed 0.9% sterile saleine
eye ointment
glove
microsurgical scissirs
forceps
clamps
8-0 suture (prolene)
6-0 suture (prolene)
5-0 suture (prolene)
Carprofen
Metamizol
Q-tips

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References

  1. Deuse, T., Hoyt, G., Koyanagi, T., Robbins, R. C., Schrepfer, S. Prevention and Inhibition But Not Reversion of Chronic Allograft Vasculopathy by FK778. Transplantation. 85, 870-877 (2008).
  2. Mennander, A., Tiisala, S., Halttunen, J., Yilmaz, S., Paavonen, T., Hayry, P. Chronic rejection in rat allografts. An experimental model for transplant arteriosclerosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 11, 671-680 (1991).
  3. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 57, 225-225 (1969).
  4. Poston, R. S., Billingham, M., Hoyt, E. G. Rapamycin reverses chronic graft vascular disease in a novel cardiac allograft model. Circulation. 100, 67-100 (1999).
  5. Schrepfer, S., Deuse, T., Koch-Nolte, F., Krieger, T., Haddad, M., Schäfer, H., Pelletier, M. P., Robbins, R. C., Reichenspurner, H. FK778 in Experimental Xenotransplantation: A Detailed Analysis of Drug Efficacy. J Heart Lung Transplant. 26, 70-77 (2007).
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Cite this Article

Stubbendorff, M., Deuse, T., Hammel, A., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., Schrepfer, S. Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy. J. Vis. Exp. (46), e1989, doi:10.3791/1989 (2010).More

Stubbendorff, M., Deuse, T., Hammel, A., Robbins, R. C., Reichenspurner, H., Schrepfer, S. Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy. J. Vis. Exp. (46), e1989, doi:10.3791/1989 (2010).

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