Summary
הפגינו וידאו זו הן טכניקות פלאש מקפיא חתך ברקמת המוח העובריים של העכבר. טיפים שימושיים לשימוש cryostat מקבלים, כולל שיטות לפתרון בעיות שניתן להשתמש בהם בעת חיתוך על מנת להבטיח כי הסעיפים רקמות כתוצאה חופשיים של סדקים ועיוותים אחרים.
Protocol
- תיקון רקמות paraformaldehyde 4% PBS בפעם הרצוי.
- להשרות סוכרוז רקמות (cryoprotection)
- בצע פתרון סוכרוז 30% PBS w / v בצינור 2059.
- יש לשטוף את רקמת 3x ב PBS (~ 5 דקות עם נדנדה).
- מקום הרקמה בתמיסה סוכרוז 30%. רקמות לא תטבע.
- מניחים את הרקמה 4 ° C במשך הלילה, או עד שהוא שקע.
- גודל התווית המתאימה cryomold עם מידע והתמצאות.
- מלאו cryomold עם אוקטובר (למנוע בועות).
- העברת רקמות אמבטיה אוקטובר ומעיל עם אוקטובר
- העברת רקמות אוקטובר ב cryomold.
- המזרח הרקמה תחת מיקרוסקופ.
- יוצקים חנקן נוזלי לתוך צלחת פטרי מפלסטיק.
- במהירות ובזהירות להוריד את הרקמה cryomold בחנקן. (לא להטביע את החלק העליון של cryomold).
- אוקטובר כאשר הוא מוצק לבן, במקום הרקמה הקפואה אל תוך -80 ° C במקפיא לאחסון.
- לאזן רקמות ~ 20 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפחות. לפני חתך.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tissue-Tek Cryomold | Ted Pella, Inc. | 27181 | |
O.C.T. | Ted Pella, Inc. | 27050 | |
Sucrose solution | 30% sucrose solution in PBS w/v | ||
paraformaldehyde | 4% paraformaldehyde in PBS |