Overview
Bu videoda, beslenmeyi izlemek için renkli yiyeceklerin kullanıldığı meyve sinekleri için bir besleme tahlili ve eklenen bileşiklerin beslenme aktivitesi üzerindeki etkisi açıklanmaktadır. Örnek protokol, birkaç endokrin bozucu kimyasalın (EDC) etkilerini test eder.
Protocol
Bu protokol, Bovier ve ark., Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019)'da Endokrin Bozulmayı Test Etme Yöntemleri'nden bir alıntıdır.
1. Besleme Tahlili
NOT: Bu testin, seçilen EDC'nin ortamdaki varlığının sineklerin beslenmesini etkileyip etkileyemeyeceğini test etmesi önerilir.
- Seçilen EDC'nin farklı konsantrasyonları ve bir boyama yiyeceği ile desteklenmiş Mısır unu ortamı (CM) içeren şişelere 15 genç sinek koyun. Sineklerin 1 gün boyunca medyadan beslenmesine izin verin.
NOT: Örneğin, 40 numaralı kırmızı boyayı (1 mg/mL) kullanın. - Sadece çözücü ile desteklenmiş CM içeren şişelere 15 genç sinek ve kontrol için bir boyama yemi koyun. Sineklerin 1 gün boyunca medyadan beslenmesine izin verin.
- Her sinek grubunu eter ile ayrı ayrı uyuşturun.
- Her grubun sineklerini, açık uca yerleştirilmiş bir huni ile silindirik bir cam kaba (eterizer) aktarın, şişeyi huni üzerine ters çevirin ve sineklerin eteriye düşmesini sağlamak için iki kabı hafifçe birbirine bağlayın.
NOT: Huni, eterörden çıkmalarını önleyecektir. - Etherizer'a fare altlığı gibi yumuşak bir yüzeye hafifçe dokunarak aşağı uçar ve huniyi hızlı bir şekilde eterle ıslatılmış pamuk ve gazlı bez fişi ile değiştirin.
- Sinekler dibe düşene kadar yaklaşık 1 dakika bekleyin ve hareket etmeyi bırakın.
NOT: Zamanı aşmayın yoksa sinekler ölür.
- Her grubun sineklerini, açık uca yerleştirilmiş bir huni ile silindirik bir cam kaba (eterizer) aktarın, şişeyi huni üzerine ters çevirin ve sineklerin eteriye düşmesini sağlamak için iki kabı hafifçe birbirine bağlayın.
- Hareketsiz sinekleri stereo mikroskop altına koyun ve her tedavi grubunun karın renklendirmesini kontrol grubuna göre karşılaştırın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 17α-Ethinylestradiol | Sigma | E4876-1G | |
| Agar for Drosophila medium | BIOSIGMA | 789148 | |
| Bisphenol A | Sigma | 239658-50G | |
| Bisphenol AF | Sigma | 90477-100MG | |
| Cornmeal | CA' BIANCA | ||
| Diethyl ether | Sigma | ||
| Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789008 | 25 mm x 95 mm |
| Drosophila Vials | BIOSIGMA | 789009 | 29 mm x 95 mm |
| Drosophila Vials | Kaltek | 187 | 22 mm x 63 mm |
| Ethanol | FLUKA | 2860 | |
| Etherizer | Crafts | cylindrical glass container with a cotton plug | |
| Hand blender Pimmy | Ariete | food processor | |
| Instant Success yeast | ESKA | Powdered yeast | |
| Red dye no. 40 | SIGMA | 16035 | |
| Stereomicroscope with LED lights | Leica | S4E |
