Injektion av vuxna drosophilaflugor: En metod för sammansatt eller etikettleverans

Abstract

Källa: Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. Bedömning av fruktflugaens cellulära immunsvar, Drosophila melanogaster, Med hjälp av en In Vivo Phagocytosis Assay. J. Vis. Exp. (2019).

Denna video beskriver hur man utför en injektion av levande vuxna flugor och innehåller ett exempelprotokoll där märkta partiklar och trypanblått injiceras i flug abdomens för att analysera fagocytos.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Nazario-Toole och Wu, Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay, J. Vis. Exp. (2019). 1. Förbered fluoresceinpartiklar för injektion Reconstitute 10 mg kommersiellt tillgängliga, värmedr dödade bakteriepartiklar märkta med fluorescein (se Materialförteckning)till en lagerkoncentration på 10 mg/ml genom att tillsätta 990 …

Materials

5430-10 PicoNozzle Kit	World Precision Instruments	5430-10	Holder for 1.0mm pipette
E. coli (K-12 Strain) BioParticles, Fluorescein conjugate	Invitrogen	E2861	Killed E. coli labeled with FITC (Fluorescein). Use to test phagocyte recogntion and uptake of gram-negative bacteria. (~494/~518 nm)
Needle Pipette Puller	David Kopf Instruments	Model 725
Pneumatic PicoPump PV820	World Precision Instruments	SYS-PV820	The World Precision Instruments Pneumatic PicoPump PV820 uses differential pressures to hold liquid in the glass needle between injections. The user manually controls short bursts of gas pressure to expel the liquid – allowing delivery of sub-nanoliter volumes. The amount of liquid delivered depends on two main variables – the size of the glass needle opening and the amount of time injection pressure is applied. set the instrument to 100 ms "TIMED" mode.
Thin Wall Glass Capillaries	World Precision Instruments	TW100F-3	Needles for injection. OD = 1.0 mm
Trypan Blue Solution (0.4%)	Sigma	T8154	Used to quench extracellular fluorescence of Fluorescein, Alexa Fluor, or Texas Red labeled particles.