Overview
このビデオでは、自由に歩くハエを追跡して一般的な移動能力を評価する方法について説明します。注目のプロトコルは、ビデオトラッキングソフトウェアを使用したアッセイのセットアップとデータ分析を実証しています。
Protocol
このプロトコルは、ショ ウジョウバエ 、J.Vis.Exp.(2017) の慢性外傷性脳症をモデル化する新しい方法であるSunとChenからの抜粋です。
1. ビデオ支援運動追跡
- 6cmの直径のペトリ皿に透明なシリコンエラストマーを入して、追跡アリーナを作ります。シリコンと皿の蓋の間に3mmのスペースを残して、ハエが自由に歩くようにしますが、飛ばないようにします。
- 毎回シャムまたは治療されたグループから4つのハエを麻酔し、アリーナに置きます。ハエを22°Cで1時間放置します。
- アリーナの上に充電結合デバイス(CCD)カメラを配置し、5分間の記録を行います。
- Ctraxソフトウェアを使用して記録された移動軌道を分析します(カルテックから自由に入手できます)。トラッキングされたデータをプログラミング言語(Matlabなど)互換フォーマットでエクスポートし、フレームあたりの移動距離に基づいてデータを分析します。各フライの平均歩行距離を計算し、記録された他のすべてのハエ/グループと組み合わせて、同じグループ内のファイルの母集団が移動した平均累積距離を取得します。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 60 mm Petri Dishes | Fisher Scientific | FB0875713A | Used as a tracking arenas |
| Flow Regulator | Genesee Scientific | 59-122WC | |
| Fine Brush | Genesee Scientific | 59-204 | |
| Flypad | Genesee Scientific | 59-114 | |
| Sylgard Silicone Elastomer | Dow Corning | 4019862 | |
| CCD Camera | Microsoft | HD-5000 | |
| Ctrax Walking Fly Tracker | Caltech | Ctrax 0.2.11 | |
| MATLAB Image Processing Toolbox | MATLAB | R2015b |
