Tracking Free Walking Flies: Eine Methode zur Bewertung der Fortbewegung in Drosophila

Overview

Dieses Video beschreibt, wie man frei gehende Fliegen verfolgt, um ihre allgemeine Fortbewegungsfähigkeit zu beurteilen. Das vorgestellte Protokoll veranschaulicht die Einrichtung und Datenanalyse des Assays mit Video-Tracking-Software.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Sun and Chen, A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila, J. Vis. Exp. (2017).

1. Videounterstütztes Bewegungs-Tracking

1. Füllen Sie eine Petrischale mit 6 cm Durchmesser mit transparentem Siliziumelastomer, um die Tracking-Arena zu gestalten. Lassen Sie einen Abstand von 3 mm zwischen Silizium und Tellerdeckel, damit die Fliegen frei laufen, aber nicht fliegen.
2. Anästhetisieren Sie vier Fliegen entweder von der Schein- oder behandelten Gruppe jedes Mal und legen Sie sie in der Arena. Lassen Sie die Fliegen bei 22 °C für 1 h.
3. Positionieren Sie eine Charge-Coupled Device (CCD) Kamera über den Arenen und nehmen Sie für 5 min auf.
4. Analysieren Sie die aufgezeichneten Bewegungsbahnen mit der Ctrax-Software (frei verfügbar bei Caltech). Exportieren Sie die verfolgten Daten in einem Programmiersprache (z. B. Matlab)-kompatiblen Format und analysieren Sie die Daten basierend auf der zurückgelegten Strecke pro Frame. Berechnen Sie den mittleren Gehabstand für jede Fliege und kombinieren Sie sie mit allen anderen aufgezeichneten Fliegen/Gruppen, um eine mittlere kumulative Entfernung zu erhalten, die von der Grundgesamtheit von Dateien in derselben Gruppe zurückgelegt wird.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
60 mm Petri Dishes	Fisher Scientific	FB0875713A	Used as a tracking arenas
Flow Regulator	Genesee Scientific	59-122WC
Fine Brush	Genesee Scientific	59-204
Flypad	Genesee Scientific	59-114
Sylgard Silicone Elastomer	Dow Corning	4019862
CCD Camera	Microsoft	HD-5000
Ctrax Walking Fly Tracker	Caltech	Ctrax 0.2.11
MATLAB Image Processing Toolbox	MATLAB	R2015b