卵子の産卵アッセイ:C.エレガンスの産卵行動を定量化する方法

Overview

C.エレガンス の産卵行動は、発達、生殖、解剖学的研究において重要な情報を提供することができる。 このビデオでは、産卵アッセイの重要なステップを紹介し、生殖毒性について薬物を試験するサンプル実験を示す。

Protocol

リーとカン、化学薬品がカエノハブディティス・エレガンスの成長と繁殖に及ぼす影響を測定する、J. Vis. Exp.(2017).

1.C.エレガンス産卵アッセイ

1. 20°Cの若年成人期までDMSOまたはエトポシドを含むNGMプレート上で64時間(初産前)に年齢同期卵をインキュベートする。
   注: 成長測定実験からワームを使用することは任意である。成長測定と産卵アッセイを一緒に行うと便利です。
2. 5つの成虫を化学物質なしで新しいNGMプレートに移し(条件1、一定期間内の化学的処理、卵から若年期までの)、または同じ化学前処理(条件2、全体的な実験期間を通じた化学物質の継続的な暴露)を含む新しいNGMプレートを24時間インキュベートする。
   注: 各処理に3-5 NGMプレートを使用して複製することをお勧めします。これらの反復は統計分析に使用できます。
3. 上述の新しいNGMプレートに移し、毎日卵の数を数えます。這い落とし、死んで、内部的に孵化したワームを数えます。
4. ワームが卵を産まないまで、通常5日でこれらの手順を繰り返します。
5. 各プレートからワームごとに産卵する卵の数を計算し、これらの値を毎日5日間合計して、産卵の総数を決定します。
   注:クロールされたワームの数を除外し、内部的にハッチングしたワームの数を計算から除外します。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Dimethyl sulfoxide	Sigma, USA	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Etoposide	Sigma, USA	E1383
35 × 10 mm Petri dish	SPL Life Sciences, South Korea	10035
Stereo microscope	Nikon, Japan	SMZ800N