Æglægningsanalyse: En metode til at kvantificere æglægningsadfærden hos C. elegans

Overview

C. elegans æglægning adfærd kan give vigtige oplysninger i udviklingsmæssige, reproduktive og anatomiske undersøgelser.  Denne video introducerer de vigtige trin i et æg om analyse og viser en prøve eksperiment, hvor et lægemiddel er testet for reproduktiv toksicitet.

Protocol

Lee og Kang, Måling af virkningen af kemikalier på vækst og reproduktion af Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).

1.C. elegans Æglægning Assay

1. De alderssynkronerede æg på NGM-pladen, der indeholder DMSO eller etoposide, inkuberes i 64 timer (før første fødsel), indtil den unge voksne fase er på 20 °C.
   BEMÆRK: Det er valgfrit at bruge ormene fra vækstmålingseksperimenter. Det er praktisk at gøre vækstmålingen og æglægningsanalysen sammen.
2. Der overføres 5 voksne orme til de nye NGM-plader uden kemikalier (betingelse 1, kemisk behandling inden for en vis periode, fra æg til ung voksenstadie) eller ny NGM-plade, der indeholder den samme kemiske forbehandling (betingelse 2, kontinuerlig eksponering af kemikalier gennem den samlede forsøgsperiode) og derefter inkubere dem i 24 timer.
   BEMÆRK: Det anbefales at lave replikater ved hjælp af 3-5 NGM plader til hver behandling; disse replikater kan bruges til statistisk analyse.
3. Overfør til den nye NGM plade som beskrevet ovenfor og tælle antallet af æg hver dag. Tæl ormene, der kravlede af, døde og blev udklækket internt.
4. Gentag disse trin, indtil ormene ikke lægger flere æg, normalt om 5 dage.
5. Beregn antallet af æg lagt pr. orm fra hver plade, og summer disse værdier hver dag i 5 dage for at bestemme det samlede antal æg, der lægges.
   BEMÆRK: Udelad antallet af orme, der er gennemsøgt og udklækket internt, fra beregningen.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Dimethyl sulfoxide	Sigma, USA	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Etoposide	Sigma, USA	E1383
35 × 10 mm Petri dish	SPL Life Sciences, South Korea	10035
Stereo microscope	Nikon, Japan	SMZ800N