Overview
Denne videoen beskriver in vivo elektroporasjon, som er en teknikk for DNA-levering i ependymogliale celler i voksen sebrafisk.
Protocol
1. Elektroporasjon
- Fjern fisken fra injeksjonsoppsettet mens du fortsatt holder den i svampen.
- Senk innsiden av elektrodens spiss ned i ultralydgelen.
- Dekk fisken telencephalon med en liten mengde ultralydgel.
- Plasser fiskehodet mellom elektrodene, plasser den positive elektroden på ventralsiden av fiskens hode og den negative elektroden på dorsalsiden (figur 1C), mens du fortsatt holder fiskens kropp i svampen. Dette setter retningen på strømmen av strømmen som er nødvendig for å elektroporate ependymoglia plassert i subventrikulær sone.
- Trykk elektrodene forsiktig og presist mot telencephalon (Figur 1 C). Administrer strømmen med fotpedalen. Hold elektrodene på plass til alle de fem pulsene er ferdige.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1: Skjematisk fremstilling av koronaldelen av den everted sebrafisk telencephalon. (A) Ordning av en koronal del av sebrafisk telencephalon, fremhever posisjonen til ependymogliale celler, som fôrer ventrikkeloverflate og bygger den ventrale ventrikkelveggen. Dorsal ependymal lag bygger bro mellom de to halvkule og dekker ventrikelen (V), som ligger mellom to cellelag: ependymoglial og ependymal. (B) Til venstre, et bilde av sebrafiskhodet tatt ovenfra, og fremhever posisjonen til telencephalon med en hvit stiplet linje. En glasskapillær er avbildet i rødt, sammen med målstedet for kapillærinnsetting. Avbildet til høyre er et skjematisk av sebrafiskhjerne som viser posisjonen til plasmidinjeksjon i rødt. Det skal bemerkes at glasskapillæren ikke berører telencephalon og at plasmid injiseres like over telencephalon i ventrikelen. T = telencephalon, OT = optisk tectum. (C) Avbildet til venstre er et fotografi av sebrafiskhodet (sidevisning), og til høyre er en skildring av hodet (sidevisning) som viser elektrodenes posisjon for å målrette telencephalon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ultrasound gel | SignaGel, Parker laboratories INC | 15-60 | Electrode Gel |
| BTX Tweezertrodes Electrodes | Platinum Tweezertrode, BTX Harvard Apparatus | 45-0486 | 1mm diameter |
| Electroporation device | BTX ECM830 Square Wave Electroporation System, BTX Harvard Apparatus | 45-0662 |
