Overview
이 비디오는 내트라토라시 주입을 사용하여 성인 얼룩말 피시의 심장에 화합물을 전달하는 기술을 설명합니다.
Protocol
1. 내트라토라시치 주사를 위한 물고기의 준비
- 그물로 성인 제브라피쉬(Daniorerio)를잡아 마취 용액으로 옮기세요.
- 1-2 분 후, 물고기가 수영을 중지하고 오퍼 쿨럼의 움직임이 감소할 때, 그것은 어떤 접촉에 반응하지 않도록 플라스틱 숟가락으로 물고기를 터치.
- 숟가락으로 물고기를 넣고 젖은 스폰지의 홈으로 빠르고 조심스럽게 옮기고 복부 면을 위로 합니다. 물고기의 머리는 운영자의 지배적 인 손에서 멀리 가리킨다.
2. 페리카르듐에 미세 주입
- 스테레오 현미경에서, 조심스럽게 물고기의 피부 아래 박동 심장의 움직임을 관찰. 복부 장발판 판(도 1D)에의해 정의된 삼각형의 중간과 박동 심혼 위의 주입 점을 시각적으로 결정한다. 모세관의 끝을 체축에 비해 30-45° 각도로 삽입한다(도 1E). 미세 모세관의 끝으로 피부에 부드럽게 침투하여 심낭 (도 1C)에 침투합니다. 최적의 진입점은 머리보다 복부에 더 가깝습니다.
참고: 이 장기에 부상을 일으킬 것입니다으로, 몸과 심장에 너무 깊이 모세관을 삽입하지 마십시오. 심장 구멍의 경우, 바늘은 일반적으로 혈액으로 채웁니다. 이 경우 모세관을 제거하고 실험에서 물고기를 제외합니다. - 바늘이 심낭 내부에 들어가면 마이크로 인젝터 장치의 페달을 눌러 완전한 주입을하십시오.
참고: 흉부 구멍에 공기를 주입하지 않도록주의하십시오. - 주입 후 흉부에서 모세관을 부드럽게 철회하고 즉시 복구를 위해 시스템 물이있는 탱크로 물고기를 옮킵니다.
- 마취에서 완전히 회복 될 때까지 물고기를 모니터링합니다.
- 원하는 시점에서 심장을 수집하고 추가 분석을 위해 준비하십시오.
참고: 물고기가 30 s 이내에 오퍼쿨룸의 움직임을 재개하지 않는 경우, 플라스틱 파이펫으로 아가미에 물을 압박하여 물고기를 다시 보화.
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Representative Results
그림 1: 성인 얼룩말피에서 내트라토라시크 (IT) 주입. (A) 필라멘트(6", 직경 1.0mm)를 이용한 뽑아낸 미세주입 모세관의 사진과 사용되는 바늘 풀러 프로그램의 값. (B) 필라멘트(6", 직경 1.0mm)를 가진 뽑아낸 미세 주입 모세관의 사진은 10% 페놀 레드를 포함하는 용액의 2.5 μL로 채워졌다. 바늘의 당겨진 끝은 최대 7mm 길이입니다. (C) IT 사출 절차의 회로도 표현. (D) IT 사출 절차의 사진. 이 그림은 비스 등에서 수정되었습니다. 패널 C와 D의 숫자는 절차의 동일한 단계에 해당합니다 : (1) 물고기는 가습 된 스폰지에 복부 측면을 배치합니다. 펑크 사이트 (삼각형의 붉은 점)는 아가미 근처의 가슴 중앙에 있습니다. (2) 침낭에 바늘을 침투. 빨간색 점은 펑크 사이트를 나타냅니다. (3) 주사제는 심근 구멍에서 적색 용액의 확산을 관찰하여 모니터링된다. (E) IT 주입 의 계획. 주입 모세관과 바디 축 사이 각도는 심혼 구멍을 피하기 위하여 30° 와 45° 사이에서 이어야 합니다. (F) 표시된 볼륨의 IT 주입 후 1 시간에서 물고기 흉부의 사진. 흰 화살표는 내부 출혈을 나타낼 수있는 재조직을 가리키고 있습니다.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Macroscope (binocular) | M400 | with Apozoom | |
| Micro-injector femtojet | Eppendorf | 5247 0034 77 | |
| Microloaders femtotips | Eppendorf | 5242 956.003 | |
| Micropipette glass needles type C | WPI | TW100F-6 | thin-wall capillary |
| Micropipette puller model P-87 | Flaming/Brown | 20081016 | filament box 2.5 mm x 4.5 mm |
| Sponge | any | any | dim. carved sponge 7cm x 3 cm x 1 cm |
| Tricaine (Anestethic) | Sigma | E10521 |
