我们提供了一个汇合单层培养的人胚胎视网膜色素上皮细胞(hfRPE)细胞重现的方法,表现出形态,生理,极性,和成人自然组织的蛋白质和基因表达模式。这项工作已经延伸到一些眼部疾病的动物模型。
我们已经开发出可以产生大量的初级人类胚胎视网膜色素上皮(hfRPE),母语的人RPE的特点的形态,生理和遗传,文化融合的单层细胞培养过程。这些hfRPE细胞培养表现出沉重的色素沉着,电子显微镜显示广泛的顶膜微绒毛。交界各种紧密连接蛋白的免疫荧光标记复合物。这些容易复制的原代培养的上皮极性和功能酷似以前学过本土的RPE细胞,包括人类的哺乳动物模型。这些结果是延长治疗干预在几个人的眼睛疾病的动物模型的发展。我们把重点放在消除异常液体积聚在视网膜或视网膜下腔的战略。视网膜细胞外空间分隔的感光细胞外段的视网膜色素上皮的顶膜和视网膜附件和维护整个主机的RPE /视网膜之间的相互作用的关键。
在目前的实验中,我们描述了我们先前公布的技术,旨在简化产生一致的hfRPE一个较高的数字每眼细胞的原代培养所需的多个步骤3的其他修改。在多种生理和分子生物学实验中的每个改变原来的程序,经过严格的测试,以确保变更没有引入文物,并不断被许多其他实验室用这些细胞进行测试。最后,进行了实验动物模型,在体外实验结果比较类似的扰动。
The authors have nothing to disclose.
我们感谢实验室的成员,为帮助这些细胞培养特征,蒂娜杰弗里Adijanto班松,李蓉,秦环,从小张,赵菁,康妮志,Awais齐亚,纳塔利娅Strunnikova。特别感谢赵菁,康妮志,他们在帮助维持细胞培养的大量库存和Tina班松。
这项工作是由美国国立卫生院内研究计划研究院的支持。
Instruments needed for dissection protocol