Summary
Новое в системе пробирке для одновременной загрузки четыре сухожилия в культуре описывается.
Abstract
Травмы сухожилий (например, запястья тендинит, epicondyltis) из-за чрезмерного распространены в спортивных мероприятиях и на рабочем месте. Большинство из них связаны с повторяющимися, высокой активности стороны силы. Механизмов клеточного и структурные повреждения из-за циклического нагружения не известно. Целью этого видео является презентация новой системы, которые могут одновременно загружать четыре сухожилия в культуре ткани. Видео описываются методы сбора стерильной ткани и как сухожилия загружены на зажимные системы, которая впоследствии погружается в средствах массовой информации и поддерживается на уровне 37 ° C. Один зажим фиксируется, а другой перемещается с линейным приводом. Сухожилия силы растяжения контролируется с датчика последовательно с мобильного зажимом. Приводы контролируются с помощью программы LabView. Четыре сухожилия может быть повторно загружены с различными формами загрузки, частота повторения, скорость загрузки, и продолжительность. Загрузка может продолжаться в течение нескольких минут до 48 часов. В конце погрузки, сухожилий удаляются и середине вещества, экстрагированного для биохимических анализов. Эта система позволяет при исследовании эффектов загрузки узоры на экспрессию генов и структурные изменения в сухожилии. В конечном счете, механизмы повреждения из-за чрезмерного могут быть исследования с выводами применяется для лечения и профилактики.
Protocol
- Дополнение СМИ СО 2-независимые средства массовой информации с эмбриональной телячьей сыворотки, L-глутамина, антибиотиков, и аскорбиновой кислоты
- Алиготе 40 мл в 50 мл пробирки центрифуги (1 для каждого сухожилия)
- Алиготе 10 мл на 15 мл пробирок центрифуг (1 для каждого сухожилия)
- Стерилизовать хирургические инструменты, автоклав листов, пинцет и гаечный ключ в автоклаве
- Стерилизовать зажимы и советы силу микрометра путем замачивания в 70% этанола ночь
- Урожай сухожилия из задней лапы кролика. Кролик должны были быть умерщвлены не более 2 часов назад.
- Место сухожилия в 15 мл центрифужную пробирку заполнены СМИ
- Выложить стерилизовать автоклаве листа создать стерильные поле
- Мера площади поперечного сечения сухожилия
- Место микрометра советы по микрометра, выровнять правильно
- Ручки сухожилия к концам
- Fit тонкий разделе сухожилия в паз
- У помощника место 50g вес
- Подождите 30 секунд, читать толщины (CSA = толщина х 1,3)
- Место сухожилие еще в 15 мл центрифужную пробирку
- Повторите с каждой сухожилие должно быть загружено
- Удалить привод из базы
- Вырежьте два 15 мм на 40 мм полоски и одна 3 мм на 5 мм кусок из стерильных марлевых для каждого сухожилия
- Раскатайте каждый полосы плотно и между канавками дистального зажим
- Удалить сухожилия от центрифуги трубы и место на зажим, дистального конца сухожилия на дистальной зажим и волокнистый хрящ области сухожилия на проксимальных зажим
- Место 3x5 кусок марли поверх дистального конца сухожилия и безопасный зажим
- Безопасные проксимальных зажим, обеспечение сухожилие остается соответствие между зажимами и с достаточно слабый, что он не находится под напряжением, когда зажимы затянуты. Затяните зажимы для 1N-м
- Место 50 мл центрифужную пробирку со средствами массовой информации в базе
- Установить привод в базовой
- Повторите с каждой сухожилие должно быть загружено
- Место базы за водяной бане
- Загрузка протокола
- Условие сухожилий
- Применяют 0,5 N нагрузку, измерять длину сухожилий (это расстояние между метками)
- Применение циклического нагружения
- Удалить привод из базы
- Выпуск сухожилия от зажимов
- Процесс сухожилия
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Видео представляет новую систему для одновременной загрузки до четырех жить сухожилия в культуре ткани. Типичная длительность загрузки от 2 до 48 часов. После загрузки, сухожилий удаляются и обрабатываются для экспрессии генов. Система позволяет для исследования влияния загрузки рисунка на изменения в генах, связанных с дегенеративными изменениями в сухожилие. Эти эксперименты могут обеспечить некоторое представление о механизмах травмы связаны с повторяющимися нагрузки. Они также обеспечивают понимание нагрузок, которые могут привести к повреждению тканей. В конечном итоге, результаты могут быть использованы для профилактики и лечения чрезмерного травмы сухожилий и связок.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
References
- Asundi, K., Kursa, K., Lotz, J. C., Rempel, D. In vitro system for applying cyclic loads to connective tissues under displacement or force control. Ann Biomed Eng. 35, 1188-1195 (2007).
- Asundi, K. R., Rempel, D. M. Cyclic loading inhibits expression of MMP-3 but not MMP-1 in an in vitro rabbit flexor tendon model. Clin Biomech. , In Press Forthcoming.
- Asundi, K. R., Rempel, D. M. MMP-1, IL-1β and COX-2 mRNA Expression is Modulated by Static Load in Rabbit Flexor Tendon. Ann Biomed Eng. , In Press Forthcoming.
