Ex vivo mekanisk belastning av senan

Summary

En ny in vitro-system för samtidig laddning fyra senor i kulturen beskrivs.

Abstract

Skador på senor (t.ex. handleden tendinit, epicondyltis) på grund av överanvändning är vanliga i idrottsaktiviteter och på arbetsplatsen. De flesta är förknippade med repetitiva, hög aktivitet kraft handen. Mekanismerna av cellulära och strukturella skador på grund av cykliska belastning är inte kända. Syftet med denna video är att presentera ett nytt system som samtidigt kan lasta fyra senor i vävnadskultur. I videon beskrivs metoderna för sterilt skörd och hur senor lastas på ett fastspänningssystem som sedan doppas i media och hålls vid 37 ° C. En klämma är fast medan den andra flyttas med ett linjärt ställdon. Senan dragkraften övervakas med en lastcell i serie med den mobila klämman. Ställdonen styrs med ett LabView-program. De fyra senor kan upprepade laddas med olika mönster av lastning, repetitionsfrekvens, lastnings-och längd. Fylla kan fortsätta några minuter till 48 timmar. I slutet av lastning, är de senor bort och mitten av substansen utvinns för biokemiska analyser. Detta system möjliggör för undersökning av effekterna av belastning mönster på genuttryck och strukturella förändringar i senan. I slutändan kan mekanismer för skador på grund av överanvändning vara studier med resultaten gäller för behandling och prevention.

Protocol

1. Tillägg media CO _2-oberoende medier med fetalt bovinserum, L-glutamin, antibiotika, och askorbinsyra
2. Alikvotera 40 ml i 50 ml centrifugrör (1 för varje senan)
3. Alikvotera 10 ml i 15 rör ml centrifugrör (1 för varje senan)
4. Sterilisera kirurgiska instrument, lakan autoklav, pincetter och momentnyckel i autoklav
5. Sterilisera klämmor och kraft tips mikrometer genom att blötlägga i 70% etanol över en natt
6. Harvest senor från bakbenen av kaninen. Kanin borde ha dödshjälp inte mer än två timmar sedan.
7. Placera senor i 15 ml centrifugrör fylld med media
8. Lägg ut en steriliserad autoklav blad för att skapa en steril fält
9. Mät tvärsnittsarea av senan
   1. Placera mikrometer tips om mikrometer, rikta rätt
   2. Grip senor från ändarna
   3. Montera tunnaste senor avsnitt i spåret
   4. Har assistent plats 50g vikt
   5. Vänta i 30 sekunder, läs tjocklek (CSA = tjocklek x 1,3)
10. Placera senan tillbaka i 15 ml centrifugrör
11. Upprepa med varje sena som ska läsas
12. Avlägsna ställdonet från bas
13. Klipp två 15mm med 40mm band och en 3mm med 5mm bit från steril gasbinda för varje senor
14. Rulla varje remsa tätt och rum mellan spåren av den distala klämman
15. Ta bort senor från centrifugrör och lägg på klämma, den distala änden av senan på den distala klämman och fibrocartilage regionen av senan på den proximala klämman
16. Placera 3x5 gasväv bit på toppen av den distala änden av senan, och säkra klämman
17. Säkra proximal klämma, se senor förblir i linje mellan klämmorna och med tillräckligt slack att det inte är under spänning när klämmorna är åtdragna. Dra åt klämmorna till 1N-m
18. Placera 50 ml centrifugrör med media i botten
19. Placera manöverdon i botten
20. Upprepa med varje sena som ska läsas
21. Placera basen över vattenbad
22. Laddar Protokoll
    1. Förutsättning senor
    2. Applicera 0,5 N belastning, längd mäter senor (detta är mätlängd)
    3. Applicera cyklisk belastning
23. Avlägsna ställdonet från bas
24. Släpp sena från klämmor
25. Process senor

Discussion

Videon presenterar ett nytt system för samtidig laddning av upp till fyra leva senor i vävnadskultur. Typiska lastning löptider är 2 till 48 timmar. Efter lastning, är de senor bort och behandlas för genuttryck. Systemet gör det möjligt för undersökning av effekten av lastning mönster på förändringar i gener associerade med degenerativa förändringar i senan. Dessa experiment kan ge lite insikt i mekanismer för skador i samband med repetitiva lastning. De ger också insikt i belastning som kan orsaka vävnadsskada. Ytterst kan resultaten användas för att förebygga och behandla överanvändning skador på senor och ligament.