Summary
इस पांडुलिपि को दर्शाता है और चर्चा कीटनाशक संवेदनशीलता सर्वेक्षण और सन्धिपाद कीट में संपर्क प्रतिरोध और प्रणालीगत कीटनाशक का पता लगाने के लिए तकनीक का इस्तेमाल है.
Abstract
कीटनाशकों के कीट प्रतिरोध एक बढ़ती हुई समस्या है क्योंकि कीटनाशकों उच्च उपज उत्पादन कृषि के एक अभिन्न अंग हैं. जब कुछ उत्पादों एक व्यक्ति कीट के लिए एक विशेष प्रकार की फसलों के प्रणाली के भीतर चिह्नित कर रहे हैं, रासायनिक नियंत्रण विकल्प सीमित हैं. इसलिए, एक ही उत्पाद (ओं) को बार - बार उपयोग किया जाता है और निरंतर चयन दबाव लक्ष्य कीट पर रखा गया है. दोनों वित्तीय और पर्यावरण प्रतिरोधी आबादी के विकास के साथ जुड़े लागत रहे हैं. कीटनाशक प्रतिरोध की लागत लगभग 1.5 अरब डॉलर सालाना का अनुमान किया गया है संयुक्त राज्य अमेरिका में. इस कागज प्रोटोकॉल, वर्तमान सन्धिपाद (विशेष रूप से कीड़े) प्रतिरोध के विकास के लिए आबादी पर नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया वर्णन करेंगे. वयस्क शीशी परीक्षण करने के लिए विषाक्तता को मापने के लिए कीटनाशकों संपर्क करने के लिए प्रयोग किया जाता है और इस परीक्षण के एक संशोधन संयंत्र प्रणालीगत कीटनाशकों के लिए प्रयोग किया जाता है. इन bioassays में कीड़े तकनीकी ग्रेड कीटनाशक और प्रतिक्रियाओं (मृत्यु दर) एक विशिष्ट अंतराल के बाद जोखिम पर दर्ज करने के लिए संपर्क कर रहे हैं. मृत्यु दर डेटा खुराक probit विश्लेषण प्रवेश कि लक्ष्य आबादी और (सीएल) सीमा डेटा परिवर्तनशीलता के अनुमान के रूप में विश्वास की एक श्रृंखला का 50% (50 नियंत्रण रेखा) मृत्यु दर प्रदान करता है एक घातक एकाग्रता का अनुमान उत्पन्न करने के लिए अधीन हैं. जब इन कीटनाशक अतिसंवेदनशील आबादी की एक श्रृंखला के लिए डेटा एकत्र कर रहे हैं, 50 नियंत्रण रेखा भविष्य निगरानी प्रयोजनों के लिए आधारभूत डेटा के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. बाद आबादी उत्पादों को उजागर किया गया, परिणाम एक पहले से निर्धारित 50 इसी पद्धति का उपयोग करते हुए नियंत्रण रेखा की तुलना में किया जा सकता है.
Protocol
1. परिचय
खाद्य उत्पादन अहसास के साथ अत्यंत महत्व का बन गया है कि 2025 तक दुनिया 8,04 1 अरब लोगों की आबादी तक पहुंच जाएगा. वर्तमान में उत्पादन की तुलना में खाद्य फसलों की एक बड़ी राशि की आपूर्ति करने की आवश्यकता हो जाएगा. पर्याप्त भोजन की उपलब्धता संयंत्र कीटनाशकों जैसे सुरक्षा उत्पादों के उपयोग के लिए फसल की पैदावार की मात्रा बढ़ाने के लिए और गुणवत्ता बनाए रखने के बिना सक्षम नहीं होगा. कीटनाशकों पर ऐतिहासिक और वर्तमान निर्भरता के आधार पर, कीटनाशक प्रतिरोध का उदाहरण के लिए होते हैं जारी रखने के लिए और वैज्ञानिक साहित्य में सूचना दी.
कीटनाशकों के कीट प्रतिरोध समस्याग्रस्त है क्योंकि उत्पादों को उच्च उपज और उच्च गुणवत्ता के उत्पादन कृषि का एक अभिन्न अंग हैं. हालांकि, अति प्रयोग और / या एक कीटनाशक के दुरुपयोग जो फसल उत्पादन के लिए हानिकारक हो सकता है प्रतिरोध के विकास के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. कीट (यानी, कीड़े, मातम, रोगज़नक़ों, आदि) तंत्र की एक किस्म है, लेकिन प्रतिरोध के विकास के लिए एक प्रमुख ड्राइविंग कारक उपयोग के लिए उपलब्ध कार्रवाई के स्वतंत्र मोड के साथ पंजीकृत 1 कीटनाशकों की कमी है द्वारा प्रतिरोध विकसित. जब कुछ उत्पादों एक व्यक्ति कीट के लिए एक विशेष प्रकार की फसलों के प्रणाली के भीतर चिह्नित कर रहे हैं, रासायनिक नियंत्रण विकल्प सीमित हैं. इसलिए, एक ही रासायनिक (ओं) को बार - बार प्रयोग किया जाता है और नित्य चयन दबाव कीट पर रखा गया है. यह समस्या जब कीट एक ही साल में कई पीढ़ियों है और हर पीढ़ी कीटनाशक से अवगत कराया है exacerbated है.
दोनों वित्तीय और enrivornmental 2 प्रतिरोध के साथ जुड़े खर्च कर रहे हैं. कीट प्रतिरोध उच्च दरों और कीटनाशकों के अधिक लगातार अनुप्रयोगों संतोषजनक नियंत्रण हासिल करने के लिए आवश्यक होता है. यील्ड घाटा लक्ष्य कीट नियंत्रण की विफलता की वजह से कीटनाशकों का उपयोग बढ़ाने के बाद भी होने की संभावना हैं. 2 पिमेंटेल संयुक्त राज्य अमेरिका में कीटनाशक प्रतिरोध के इन लागत का अनुमान है करने के लिए लगभग 1.5 अरब डॉलर सालाना हो.
कीट आबादी के बीच कीटनाशक संवेदनशीलता के सर्वेक्षण के एक सक्रिय दृष्टिकोण के लिए कीटनाशक के प्रदर्शन में किसी भी बदलाव का पता लगाने और रासायनिक नियंत्रण रणनीतियों को संशोधित करने के लिए एक प्रारंभिक चेतावनी प्रदान है. समग्र आईपीएम रणनीतियों को संशोधित करके, किसी भी कीटनाशक का व्यवहार्यता, विस्तारित किया जा सकता है जो बारी में, कृषि के लिए पर्याप्त भोजन और दुनिया के लिए फाइबर प्रदान जारी रखने के लिए महत्वपूर्ण है. यह कागज एक प्रोटोकॉल है कि कीटनाशक संवेदनशीलता की निगरानी और कीटनाशक प्रतिरोधी संपर्क कीटनाशकों के लिए वयस्क शीशी 3 परीक्षण का उपयोग आबादी के विकास और संयंत्र प्रणालीगत 4 कीटनाशकों के लिए इस परीक्षण के एक संशोधन का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है वर्णन करेंगे.
2. तरीके
2.1 सुरक्षा वक्तव्य
उचित सुरक्षा सावधानियों का उपयोग करना महत्वपूर्ण है जब कीटनाशकों के साथ निपटने. सामग्री सुरक्षा डाटा शीट (MSDS) उपयुक्त व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) के लिए कीटनाशक संभालने से पहले से परामर्श करें. प्रयोगशालाओं में कीटनाशकों को संभालने पर विशिष्ट प्रयोगशाला प्रशिक्षण कर्मियों द्वारा किसी भी bioassays प्रयास करने से पहले आवश्यक होना चाहिए.
2.2 बनाना स्टॉक समाधान
कीटनाशक सक्रिय संघटक (एअर इंडिया) के एक स्रोत से एक ज्ञात एकाग्रता के एक शेयर समाधान का विकास. सभी वांछित सांद्रता शामिल bioassay में उपचार के रूप में मूल स्टॉक समाधान से किया जाएगा. इस कागज, 100mls एक 100 / μg मिलीलीटर समाधान के एक शेयर के समाधान के रूप में विकसित किया जाएगा के हित के लिए, तथापि, किसी भी एकाग्रता इस प्रारंभिक एकाग्रता से पतला किया जा सकता है. तकनीकी ग्रेड एअर इंडिया की राशि समायोजित प्रतिशत शुद्धता के आधार पर तौला जाना है.
राशि तौला जा (बनाने की मात्रा) = एक्स ([# μg / मिलीलीटर समाधान] / [% purity/100])
उदाहरण के लिए, यह तकनीकी एअर इंडिया के 10152.284 μg बनाने के लिए 100 mls के 98.5% शुद्धता का एक तकनीकी ग्रेड कीटनाशक के 100 / μg मिलीलीटर समाधान की आवश्यकता होगी:
(100 मिलीलीटर) एक्स ([100μg/ml] / 0.985) = 10152.284 μg
संपर्क कीटनाशक के लिए 2.2.1 वयस्क शीशी टेस्ट
आंशिक रूप से एसीटोन के साथ एक बड़ा फ्लास्क भरने और कीटनाशक एअर इंडिया के समायोजित राशि का वजन. फ्लास्क में एसीटोन के साथ वजन नाव कुल्ला वजन नाव से सभी कीटनाशक हटायें. एसीटोन के साथ स्नातक लाइन बड़ा फ्लास्क भरें. अधिकांश प्रशीतित परिस्थितियों में आयोजित समाधान प्रभावकारिता के बारे में एक महीने के लिए कोई सराहनीय हानि के साथ गतिविधि को बनाए रखना होगा.
प्रणालीगत कीटनाशक के लिए वयस्क शीशी टेस्ट के 2.2.2 संशोधन
प्रणालीगत कीटनाशकों के साथ कीड़े का नशा साफ़ संपर्क उत्पादों के उस से अलग है. प्रणालीगत उत्पादों को आम तौर पर कीट के द्वारा किया जाता है होना चाहिए प्रत्यक्ष exposur होने कीट के बजाय सक्रिय हो जाते हैंसंपर्क कीटनाशकों के साथ के रूप में उत्पाद के लिए ए. इसलिए, वयस्क शीशी परीक्षण परीक्षण किया जा करने के लिए प्रणालीगत कीटनाशकों के लिए आदेश में संशोधित किया गया था. शेयर समाधान के लिए जरूरत एअर इंडिया का वजन 2.2 अनुभाग में उल्लेख किया है कि करने के लिए इसी तरह की गणना की है. पानी समाधान: कार्यप्रणाली इसी तरह एअर इंडिया के एक 10% में वजन शहद से भंग कर रहा है, सिवाय. यह समाधान bioassay की दीक्षा के 24 घंटे के भीतर किया जाना चाहिए. यदि तकनीकी ग्रेड सामग्री पानी में घुलनशील नहीं है, कीटनाशक समाधान के एक उच्च एकाग्रता ऐसे एसीटोन के साथ बनाया जा सकता है कि कीटनाशक का केवल एक छोटी मात्रा: एसीटोन मिश्रण शहद के लिए जोड़ा जाता है: पानी के घोल का 4.
2.3 सांद्रता सांद्रता का एक सीमा निर्धारित करने और विकास
उपयुक्त bioassay के लिए प्रतिक्रियाओं की सीमा को स्थापित करने की जरूरत सांद्रता का निर्धारण कठिन हो सकता है है. कई अनुकरण करने के लिए सांद्रता की सीमा को परिभाषित करने के लिए आवश्यक हो सकता है और यह परीक्षण और त्रुटि के द्वारा किया जाता है. इसके अतिरिक्त, सीमा समय के साथ बदल अगर जनसंख्या संवेदनशीलता के स्तर में परिवर्तन हो सकता है. कई अन्य कारकों को अंतिम सांद्रता की स्थापना में विचार किया जाना चाहिए और शामिल हैं: कीट के परिवार, कीटनाशक के वर्ग कीट के आकार, आदि पहले प्रकाशित वयस्क शीशी परीक्षणों के परिणाम कीटनाशक सांद्रता का प्रारंभिक चयन के साथ सहायता कर सकते हैं. Thripidae 15; Coleoptera: 16 Brentidae, 17 Curculionidae Coccinellidae 18-19, और Cybocephalidae 19; Diptera: Culicidae;: Hemiptera: Thysanaptera Aleyrodiidae 5-6, 7 Aphididae, Pentatomidae 8-10 और 11-14 Miridae bioassays के लिए प्रकाशित किया गया है 20, Lepidoptera: 21 Tortricidae और 3 Noctuidae, 22-26, Hymenoptera: 7,18 Braconidae, Ichneumonidae 26-27, 18 Aphidiidae, 7 Encyrtidae, और 18 Aphelinidae.
सांद्रता "एक्स" μg / एमएल समाधान पर आधारित है बना रहे हैं. हालांकि, जब शीशियों वयस्क शीशी परीक्षण के लिए तैयार हैं, केवल 0.5ml प्रत्येक शीशी को जोड़ा जाएगा, इसलिए, शीशी की एकाग्रता है आधा एकाग्रता किया. एक बार सांद्रता चुना जाता है, निम्न समीकरण समाधान की राशि का निर्धारण करने में सहायता कर सकते हैं वांछित एकाग्रता बनाने जोड़ा.
(C1) (v1) = (C2) (V2)
जहां C1 स्टॉक समाधान की एकाग्रता है, V1 है नए एकाग्रता बनाने की जरूरत स्टॉक की मात्रा, C2 तैयार किया जा रहा एकाग्रता है, और V2 के नए एकाग्रता की मात्रा है. उदाहरण के लिए, एक 100μg/ml शेयर समाधान के 5mls 5μg/ml के 100mls बनाने की जरूरत है. यह 5μg/ml समाधान 2.5μg/vial के एक एकाग्रता में लेपित शीशियों में नतीजा होगा.
5mls = [(5μg/ml) (100mls)] / (100μg/ml)
संपर्क कीटनाशक के लिए 2.3.1 वयस्क शीशी टेस्ट
आंशिक रूप से बड़ा flaks को भरने, और विभाज्य शेयर वांछित एकाग्रता बनाने के लिए आवश्यक समाधान की गणना की राशि. एसीटोन के साथ स्नातक लाइन के लिए बड़ा फ्लास्क भरें और 2.4 या बाद में उपयोग के लिए रेफ्रिजरेटर में भंडारण के लिए Parafilm एम (Alcan इंक, Neenah, WI) के साथ सील अनुभाग के लिए आगे बढ़ना. ज्यादातर समाधान के 1 महीने के लिए अच्छा कर रहे हैं.
प्रणालीगत कीटनाशक के लिए वयस्क शीशी टेस्ट के 2.3.2 संशोधन
इस प्रक्रिया में ही है के रूप में पहले वजन शहद द्वारा एक 10% छोड़कर 2.3.1 में वर्णित: पानी के समाधान के लिए एवजी है एसीटोन. पानी के समाधान के लिए सभी वांछित सांद्रता: पर्याप्त शहद मिलाएं. ये समाधान की तैयारी के 24 घंटे के भीतर किया जाना चाहिए.
शीशियों के 2.4 तैयारी
संपर्क कीटनाशक के लिए 2.4.1 वयस्क शीशी टेस्ट
यदि सांद्रता रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया गया, परिवेश के तापमान को गर्म अनुमति देते हैं. एसीटोन तापमान पर आधारित परिवर्तन जो कीटनाशक एकाग्रता को प्रभावित कर सकते हैं की मात्रा. रंग कोड पेंट या मार्कर का उपयोग सांद्रता के लिए 20 मिलीलीटर कांच की शीशियों (पेंच टोपी के लिए फिट).
एक दोहरा 0.5ml/concentration देने pipettor समायोजित करें. एसीटोन नियंत्रण के साथ काम आरंभ किया है, सबसे कम एकाग्रता के साथ निम्नलिखित और बढ़ती सांद्रता के साथ जारी जब तक सभी सांद्रता का इस्तेमाल किया गया है. एक छोटे से बीकर में इलाज किया जा शीशियों की वास्तविक संख्या के रूप में (यानी, 40 शीशियों के लिए 20mls) समाधान का लगभग आधा मात्रा डालो. जब समाधान उपयोग में नहीं है, इसे कवर करने के लिए वाष्पीकरण जो एकाग्रता में परिवर्तन पैदा कर सकता है कम से कम. दोहरा pipettor में कीटनाशक समाधान ड्रा और व्यक्तिगत कांच की शीशियों में 0.5ml समाधान के बग़ैर.
उपचार के तुरंत बाद, कांच की शीशियों एक वाणिज्यिक हॉट डॉग रोलर पर रखा जाता है. रोलर्स बारी के रूप में, कांच की शीशियों को घुमाएगी और एसीटोन evaporates, तकनीकी ग्रेड कीटनाशक के साथ लेपित शीशी के अंदर जा. हीट घ कर सकते हैंegrade कीटनाशक, इसलिए, यह गर्मी के लिए रवाना होने के लिए महत्वपूर्ण है. यह एक मॉडल है कि तपता है और एक साथ रोल है और एक ही स्विच द्वारा या हॉट डॉग रोलर है कि स्वतंत्र कार्य कर रहा है हीटिंग तत्व और रोलर्स के लिए स्विच की एक मॉडल का उपयोग करके नियंत्रित है पर हीटिंग तत्व रखती द्वारा भी किया जा सकता है. अधिक शीशियों से रोलर धारण के इलाज से बचें, एसीटोन पहले कांच की शीशियों घुमाया जाता है और वे शीशी दीवारों पर एक भी कोटिंग नहीं प्राप्त हो सकता है लुप्त हो जाना सकता है.
शीशियों जब तक सभी एसीटोन सुखाया गया है बारी बारी से करने के लिए अनुमति दें. शायद शीशी दीवारों पर एसीटोन संक्षेपण के ठीक परत है, इसलिए, शीशियों व्यक्तिगत रूप से जांच की जा चाहिए. समय बदलता शीशियों प्रयोगशाला परिस्थितियों पर आधारित रोल की आवश्यकता है. एक बार जब शीशियों सूखी टोपी हैं और उन्हें ठंडा या अंधेरे की स्थिति में या तो दुकान. कीड़े मनाया शंक्वाकार liners या फटे पन्नी liners कि शीशी के होंठ (यानी, इलाज सतहों से बचने के) के नीचे लटका के साथ lids पर आराम कर रही है, इसलिए, यह महत्वपूर्ण है करने के लिए संयुक्त राष्ट्र लाइन lids का उपयोग.
कोई शेष समाधान के इस्तेमाल के लिए शीशियों को तैयार नहीं ठीक से निपटाया जाना चाहिए. बड़ा कुप्पी में शेष समाधान Parafilm के साथ सील किया जा सकता है और रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत. शीशियों जब वे तैयार कर रहे हैं तिथि, क्योंकि विभिन्न कीटनाशकों अलग शैल्फ जीवन है. उदाहरण के लिए, pyrethroid - लेपित शीशियों लगभग एक महीने के लिए अच्छा कर रहे हैं, जबकि एक organophosphate की तरह, एक और अधिक अस्थिर कीटनाशक के साथ लेपित शीशियों, दो सप्ताह या उससे कम समय के शैल्फ जीवन है.
2.4.2 प्रणालीगत कीटनाशक के लिए संशोधित वयस्क शीशी टेस्ट
पुष्प फोम 4 कीड़ों के लिए कीटनाशक समाधान देने के लिए एक सब्सट्रेट के रूप में सेवा की जरूरत है. पुष्प फोम (12mm एक्स 12mm) टुकड़े एक काग छिद्रक का उपयोग काटें. जगह पहले से वर्णित कांच की शीशियों में पुष्प फोम का एक टुकड़ा. दोहरा 0.5ml समाधान देने और पुष्प फोम पर बांटना समायोजित pipettor भरें. तरल पदार्थ की यह मात्रा पुष्प फोम का टुकड़ा तर करना चाहिए, लेकिन शीशी में फोम के स्तर से अधिक नहीं होना चाहिए. और उच्चतम सांद्रता के निम्नतम: फिर से (पानी का समाधान केवल वजन शहद द्वारा 10%) के नियंत्रण से अनुक्रम में काम.
2.5. भंडारण शीशियों
संपर्क कीटनाशक के लिए 2.5.1 वयस्क शीशी टेस्ट
जब कीटनाशक लेपित शीशियों भंडारण, कीटनाशक के गुणों का पता है. विभिन्न कीटनाशकों जैसे विभिन्न भंडारण आवश्यकताओं है: pyrethroids प्रकाश के प्रति संवेदनशील हैं और कमरे के तापमान पर है, लेकिन अंधेरे में संग्रहीत किया जा सकता है है, तथापि, organophosphate कीटनाशकों तापमान संवेदनशील हैं और एक फ्रीजर में संग्रहीत करने की आवश्यकता है. यदि कीटनाशकों फ्रीजर में संग्रहीत होना आवश्यक हैं, वे कीड़े उजागर करने से पहले कमरे के तापमान पर गरम किया जाना चाहिए.
2.6 bioassay
कीड़ों के लिए परीक्षण किया जा लीजिए. इस प्रक्रिया फेरोमोन baited जाल, झाडू जाल, या बड़े पैमाने पर कब्जा की किसी अन्य साधन का उपयोग किया जा सकता है. प्राकृतिक मृत्यु दर करने के लिए संग्रह प्रक्रिया के दौरान घायल हुए लोगों के लिए होते हैं के लिए अनुमति देते हैं, उन्हें भोजन और एक नमी स्रोत के साथ इस अवधि के दौरान प्रदान कीड़े 8-24 घंटों के लिए आयोजित किया जाना चाहिए. टेस्ट बड़ा परीक्षण कीड़ों की संख्या, और अधिक मजबूत डेटा सेट हो जाएगा, एकाग्रता प्रति 10-25 कीड़े (10 न्यूनतम). जब bioassay के लिए कीड़ों का चयन, स्वस्थ, सक्रिय व्यक्तियों का चयन और सुस्त या असामान्य व्यक्तियों को त्यागें. ऐसी है कि वे सांद्रता की पूरी रेंज और एक समय में सिर्फ एक नहीं एकाग्रता को उजागर कर रहे शीशियों में रखें कीड़े. यह प्रक्रिया एक में सबसे अधिक स्वस्थ और सक्रिय व्यक्तियों या कुछ सांद्रता रखने को रोकने जाएगा. इसके अलावा, अगर यह एकाग्रता प्रति 10 कीड़ों की एक न्यूनतम के साथ प्रयोग आचरण करने के लिए संभव नहीं है, प्रत्येक एकाग्रता के रूप में संभव के रूप में कई बेनकाब. फिर एक कम समय के भीतर एक ही नमूना क्षेत्र (दो तीन सप्ताह) से अधिक कीड़ों को इकट्ठा और प्रयोग दोहराने. कुछ कीड़े फसल मौसम की प्रगति के रूप में संवेदनशीलता (प्रतिरोध का निर्माण) खो सकते हैं, इसलिए, जल्दी वसंत ऋतु में एकत्र व्यक्तियों की प्रतिक्रिया 28 गिरावट में एकत्र लोगों से अलग किया जा सकता है.
मानदंड विकसित करने के लिए मृत्यु दर का आकलन. सबसे अधिक इस्तेमाल किया मरणासन्न या मृत के रूप में कीड़े वर्गीकृत किया मापदंड समन्वित आंदोलन की कमी कर रहे हैं. इन टिप्पणियों से ही सही असमर्थता अगर अपनी पृष्ठीय सतह पर रखा, 1m या जब धीरे से एक कुंद साधन के साथ prodded समन्वित आंदोलन की कमी के समन्वित उड़ान को बनाए रखने में असमर्थ शामिल हो सकते हैं. यदि व्यक्ति ही सही लेकिन पर गिर सकते हैं, वहाँ कोई समन्वित आंदोलन है, मृत कीट माना जाना चाहिए. कीट कठिनाइयों का अनुभव अपने आप में एक चालाक सतह पर ठीक करने सकता है, इसलिए, यह शायद आवश्यक कीट एक सतह की आपूर्ति करने के लिए इतना है कि यह करने के लिए ही सही करने के लिए आवश्यक कर्षण हासिल करने में सक्षम है. की संख्या रिकार्डबचे और मृत व्यक्तियों के प्रत्येक एकाग्रता के लिए उत्तरजीविता गणना.
संपर्क कीटनाशक के लिए 2.6.1 वयस्क शीशी टेस्ट
शीशी में कीट (ओं) प्लेस और टोपी शिथिल सुरक्षित. ढक्कन को भागने से कीट को रोकने के लिए, लेकिन काफी ढीला वायु प्रवाह की अनुमति की जरूरत है. सबसे कीट bioassays के लिए, केवल एक कीट प्रत्येक शीशी में रखा है, तथापि, छोटे कीड़ों, जैसे whiteflies या thrips, के रूप में कई के रूप में 30 प्रति 6 शीशी, 15 व्यक्तियों की दर पर उजागर किया जा सकता है. शीशियों ईमानदार कमरे के तापमान पर जब तक कीड़े bioassay के endpoint में मृत्यु दर के लिए मूल्यांकन कर रहे हैं प्लेस. एक्सपोजर बार प्रजातियों और संभवतः 3,5-27 कीटनाशक के साथ अलग कर सकते हैं . एक नए कीट या रसायन के साथ प्रारंभिक विषाक्तता के स्तर की स्थापना की प्रक्रिया में, एकाधिक अनुसूचित प्रदर्शन के बाद समय बिंदुओं पर विषयों की निगरानी. परीक्षा समाप्त हो सकता है जब सर्वोच्च एकाग्रता में मृत्यु दर 100% है, जबकि अभी भी गैर - कीटनाशक इलाज नियंत्रण में उच्च उत्तरजीविता (<10% मृत्यु दर) को बनाए रखने कर सकते हैं. यदि 100% मृत्यु दर नियंत्रण में उच्च उत्तरजीविता के साथ सर्वोच्च एकाग्रता में हासिल नहीं है, bioassay उच्च सांद्रता का एक सीमा का उपयोग दोहराया जाना चाहिए. आदर्श रूप में, मृत्यु दर का स्तर कीटनाशक एकाग्रता बढ़ जाती है के रूप में वृद्धि करनी चाहिए.
कुछ कीड़े, जब 24 घंटे के लिए उजागर, नमी की एक स्रोत (यानी, संयंत्र सामग्री का एक छोटा सा टुकड़ा) 12 की आवश्यकता है . जब एक नाजुक कीट के साथ काम कर रहे हैं, यह कितनी देर तक कीट शीशी में नमी की एक वयस्क शीशी परीक्षण में कीटनाशक जोखिम से पहले स्रोत के बिना जीवित रह सकते हैं निर्धारित करने के लिए फायदेमंद है. इस जानकारी के साथ एक शीशी में और एक नमी स्रोत के बिना कीट रखने और वास्तविक कीटनाशक सर्वेक्षण का आयोजन करने से पहले समय पर अपने अस्तित्व की निगरानी के द्वारा निर्धारित किया जा सकता है.
2.6.2 प्रणालीगत कीटनाशक के लिए संशोधित वयस्क शीशी टेस्ट
Bioassay की दीक्षा से पहले, निर्धारित अगर फ़ीड कीट और शहद के साथ संतृप्त पुष्प फोम पर जीवित रह सकते हैं: कीटनाशक के अभाव में पानी के घोल. केवल पानी (या शहद:: एसीटोन गैर - पानी घुलनशील तकनीकी ग्रेड कीटनाशक के साथ सांद्रता की तैयारी में इस्तेमाल की सबसे बड़ी मात्रा के साथ पानी) पुष्प फोम के साथ शीशियों में रखें कीड़े शहद के साथ संतृप्त है और कई दिनों के लिए उत्तरजीविता की निगरानी. वयस्क शीशी परीक्षण के इस संशोधन केवल एक 4 Miridae और एक 29 Pentatomidae के साथ जांच की गई है, इसलिए परीक्षण की अवधि का निर्धारण संपर्क कीटनाशक bioassay के लिए अधिक से अधिक प्रयोग की आवश्यकता है. उदाहरण के लिए, Lygus lineolaris (Palisot डी Beauvois) thiamethoxam के लिए प्रदर्शन के बाद 24 घंटे में मृत्यु दर के लिए मूल्यांकन किया गया था, लेकिन 72 घंटे 4 imidacloprid लिए. Oebalus pugax एफ की मृत्युदर 96 घंटे में मूल्यांकन किया गया था जब 29 dinotefuran अवगत कराया . इसलिए, नियंत्रण शीशियों में कीट उत्तरजीविता लगातार उच्च कीटनाशक नशे से एक सटीक मृत्यु दर दर्ज़ा से पहले कई दिनों के लिए बनाया जा सकता है किया जाना चाहिए.
कीट (एस) संतृप्त पुष्प फोम के साथ जगमगाहट शीशी में रखें. Lids के साथ शीशियों सीलिंग के बजाय, एक कपास की गेंद के साथ शीशियों सील. शीशियों ईमानदार कमरे के तापमान पर जब तक कीड़े मृत्यु दर के लिए मूल्यांकन कर रहे हैं प्लेस. जैसा कि पहले उल्लेख किया है, नियमित अंतराल पर दर मृत्यु. परीक्षा जब वहाँ 100% मृत्यु दर पर नियंत्रण में उच्च उत्तरजीविता (<10% मृत्यु दर) के साथ सर्वोच्च एकाग्रता है समाप्त किया जा सकता है. यह अतिरिक्त सांद्रता का परीक्षण करने के लिए आवश्यक हो सकता है.
2.6.3 डेटा विश्लेषण
नियंत्रण एक 30 Abbott के अनुसार सूत्र का उपयोग कर उपचार में मृत्यु दर के लिए सही है .
सही मृत्यु दर (%) = (% (% अस्तित्व नियंत्रण - इलाज% अस्तित्व) / अस्तित्व नियंत्रण) x 100
लॉग खुराक probit उपयोग के लिए घातक जनसंख्या का 50% (50 नियंत्रण रेखा) को मारने के लिए और 95% विश्वास अंतराल (सीएल) की स्थापना के लिए आवश्यक एकाग्रता का निर्धारण डेटा का विश्लेषण. एकाधिक सॉफ्टवेयर प्रोग्राम 50 नियंत्रण रेखा (: proc 31 PROBIT, पोलो प्लस 32 एसएएस) निर्धारित करने के लिए उपलब्ध हैं.
3. नोट्स
- एसीटोन और नकारात्मक प्रवाह हवा हुड के नीचे कीटनाशकों के साथ काम.
- जब बड़ा बोतल भरने, यह सबसे अच्छा है एसीटोन के दो धोने की बोतलें. एक धोने की बोतल है कि तरल पदार्थ के तेजी से वितरण और एक धीमी गति से प्रसव के लिए के लिए अनुकूलित किया गया है. प्रसव बांह का हिस्सा हटाने के लिए एक बड़ा खोलने बनाने और इस बोतल एक बड़ी मात्रा की डिलीवरी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है जल्दी. एक बार एसीटोन स्नातक लाइन, परिवर्तन की बोतलें nears और धीमी वितरण के साथ बोतल धोने का उपयोग करें ताकि आप राशि है कि तिरस्कृत किया जाता है पर अधिक नियंत्रण है. यदि एक फ्लास्क स्नातक रेखा से ऊपर भर जाता है, ऊपर छोड़ दिया और अनुमति एसीटोन स्नातक लाइन के लिए लुप्त हो जाना.
- राशि nee नोटशेयर समाधान, एक एकाग्रता, अर्थात् तैयार करने की जरूरत है, अगर आप फ्लास्क भरने ¾ तरीका के ded लेकिन 30mls जोड़ने की जरूरत है, आप स्नातक लाइन पर जा सकते हैं.
Discussion
नियंत्रण रेखा 50 मूल्य के लिए एक लक्ष्य जनसंख्या (ओं) का आधारभूत संवेदनशीलता के रूप में स्थापित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इस डेटा के मूल्य भविष्य निगरानी सर्वेक्षणों में है या कि एक पहले से निर्धारित 50 नियंत्रण रेखा के वर्तमान परिणामों की तुलना करने के लिए लक्षित जनसंख्या की संवेदनशीलता स्थानांतरित कर दिया है निर्धारित करने के तत्काल उद्देश्य के लिए किया जा सकता है. 95% विश्वास अंतराल की जांच के द्वारा आबादी के बीच वास्तविक नियंत्रण रेखा 50 मूल्यों की तुलना में किया जा सकता है, अगर ऊपरी और निचली सीमाओं को ओवरलैप नहीं है, तो यह संभावना है कि जनसंख्या संवेदनशीलता और कुछ स्थितियों में एक महत्वपूर्ण परिवर्तन का अनुभव किया है प्रतिरोध का एक संकेत है 33. नियंत्रण रेखा 50 भी कीटनाशक esusceptibilitye 28 में मौसमी परिवर्तन की जांच करने के लिए, या प्रजातियों या कीटनाशक ऐ एस के बीच प्रतिक्रियाओं की तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है काफी काम भी इन आंकड़ों का इस्तेमाल किया है पुरुषों और 10 या वयस्कों के बीच महिलाओं और अपरिपक्व चरणों, 10,34 के बीच प्रतिक्रियाओं की तुलना. कभी कभी विश्वास अंतराल चौड़े हैं या नहीं गणना की जा करने में सक्षम है. तंग विश्वास अंतराल लाभ के लिए अधिक कीड़ों और / या अधिक सांद्रता के साथ bioassay आचरण.
Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
हम इस प्रकाशन से संबंधित धन अनुसंधान के लिए राज्य सहायता शामिल कपास 08-317MO # / USDA CSREES एसआर आईपीएम अनुदान 2009-34103-20018 और Landis अंतर्राष्ट्रीय कार्यक्रम को धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 50-100 ml glass beaker | |||
| Volumetric flask with stoppers (can use the amber colored flasks for light sensitive pesticides such as pyrethroids) | |||
| 20ml glass scintillation vials with un-lined lids | |||
| A method for color coating vials (paint or markers) | |||
| Acetone | |||
| Commercial hotdog roller (heat element disconnected) | |||
| 2 wash bottles (one modified such that the opening is large for fast delivery of the liquid and one so that the spout opening is small for slow delivery of the liquids) | |||
| Small weigh boat (make sure all plastic materials acetone safe) | |||
| Access to a balance with 0.001g readability or a higher precision. | |||
| Parafilm M | |||
| Repeater pipettor | |||
| Appropriate tips | |||
| Glass pipettes that fit in the volumetric flask. | |||
| Hood (used to remove the acetone smell) | |||
| A place to store insecticide solutions and vials [refrigerator (solutions), dark room or freezer depending on the chemical (vials)] |
References
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