공부하기<em> 생체내에</em> 종양의 성장과 종양의 microenvironment, 우리는 면역 적격 동물 난소암의 syngeneic 및 orthotopic 마우스 모델을 사용합니다. 우리는 Katushka 형광 단백질 (MOV1와 마우스 종양 세포 라인 (MOV1)를 transduced<sup> KAT</sup>)와 우리가 난소 년에 orthotopic 주입을 표시하고<em> 생체내에</em> 이미지.
배경 : 난소암은 일반적으로 케이스 / 사망자 비율이 높은 고급 단계에서 진단하기 때문에 미국 여성들 사이 1,2,3 모든 gynecologic malignancies의 가장 치명적인 유적이다. 장액의 종양은 난소암의 가장 광범위한 형태이며, 4,5 TG – MISIIR 태그 유전자 변형은 저절로 종양의 유형을 개발하는 유일한 마우스 모델을 나타냅니다. Mullerian 억제 물질 유형 II 수용체 (MISIIR) 유전자 프로 모터 6 제어하에 TG – MISIIR 태그 마우스 표현 SV40 변환 영역. 추가 형질 라인은 그 표현 SV40 태그 transgene을 확인하고 있지만, 난소 종양을 개발하지 않습니다. 비 – 종양 발생하기 쉬운 쥐들이 C57Bl / 6 마우스에 대한 일반적인 수명을 전시하고 비옥한 있습니다. 이 생쥐는 TG – MISIIR 태그 – DR26 생쥐에서 분리된 종양 세포에 대한 syngeneic allograft받는 사람으로 사용할 수 있습니다.
목표 : 종양 이미징 7 가능하지만, 깊은 종양의 조기 발견은 작은 생활 동물에 도전합니다. 장액의 난소암에 대한 immunologically 손상 동물 모델의 잠복기 연구를 활성화하기 위해, 우리는 생체내 이미징, 종양 microenvironment 및 종양 면역 반응의 연구에 허가 난소암의 유형에 대한 syngeneic 마우스 모델을 설명합니다.
방법 : 우리는 먼저 26주 된 DR26 TG – MISIIR 태그의 여성에 수확 자연 난소 종양에서 태그 + 마우스 암 세포주 (MOV1)을 파생. 그렇다면, 우리는 안정 Katushka을 인코딩 TurboFP635 Lentivirus 포유 동물 벡터, 여기 / 635분의 588 nm의 8,9,10에서 방출 맥시멈와 말미잘 Entacmaea quadricolor에서 적색 형광 단백질의 멀리 붉은 돌연변와 MOV1 세포 transduced. 우리는 orthotopically 아닌 종양이 발생하기 쉬운 TG – MISIIR 태그 여성 생쥐의 난소 11,12,13,14에서 MOV1 언니를 심었을 거예요. 종양 진행은 생체내 광학 이미징 및 종양의 microenvironment에 immunohistochemistry에 의해 분석되었다 다음되었다.
결과 : Orthotopically MOV1 캣 세포를 이식은 묽은 난소 종양을 개발했습니다. MOV1 캣 종양은 인간의 난소 암 15 (그림 2)에서 관찰, 최대 주입 후 3 주 (그림 1) 생체내 이미징에 의해 시각 될 수 있으며, leukocytes로 가득 차 있었다.
결론 : 우리는 깊은 조직의 산도 안정 높이 Katushka의 photostability에 의한 초기 종양의 생체내 이미징에 적합한 난소암의 orthotopic 모델을 설명합니다. 우리는 종양 면역 반응과 immunotherapies의 생체내 이미징 연구 및 모니터링을위한 장액의 난소암이 소설 syngeneic 모델의 사용을 제안합니다.
수술과 주사 Orthotopic
난소 부르사에서 Orthotopic 주입은 교육 및 정밀도를 요구합니다. 그러므로
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 NIH 부여 P01 AI 068,730 (SNC, NS), NIH 부여 CA016520 / TAPITMAT (NS), Claneil 재단 (NS)에서 민간 자금 및 FCCC 및 펜실베니아 대학에 난소 포자 부여 (지원했습니다 P50 CA83638)와 폭스 체이스 암 센터 코어 그랜트 (P30 CA06927) (DCC). 저자는 펜실베니아 암 대학에서 박사 G. Danet – 데스노여스 감독 줄기 세포 및 이종 이식 코어에서 펜실베니아, 안토니 Secreto 대학에서 박사 EJ Delikatny 감독 광 / Bioluminescence 핵심 시설의 우수 기술 지원을 감사합니다 수술에 도움을 위해 펜실베니아 / OCRC 대학에서 orthotopic 분사 기술과 Denada Dangaj에 훈련 SNC 센터.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM-GLUTAMAX | Invitrogen | 10564-011 | ||
PBS | Gibco | 14040 | ||
Versene | Lonza | 17-711E | ||
Heating pad | Deltaphase | 39 DP | ||
Povidone pads | Dynarex | 1108 | ||
Alcohol pads | Fisher | 06-669-62 | ||
Artificial tears ointment | Phoenix Pharma., Inc. | 17845-153 | ||
Ketoprofen | Fort Dodge laboratories | |||
3cc/insulin syringe | BD | 309301 | ||
Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm) | Syneture | 9612-31 | ||
Tissue adhesive | Vetbond | 3M | ||
Vet Bactrim/ oral suspension | Hi-tech Pharmacal | 840823 | ||
IVIS-Lumina | Caliper lifesciences | |||
Isofluorane | Phoenix Pharma., Inc. | J108013 | ||
Fetal Bovine Serum, Qualified | Invitrogen | 10437036 | ||
Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
TurboFP635 mammalian vector | Evrogen | FP721 | ||
T175 flasks | cellstar | 660-190 |