Un modèle orthotopique de cancer ovarien séreux dans des souris immunocompétentes In vivo L'imagerie des tumeurs et le suivi des tumeurs réponses immunitaires
Summary
Pour étudier<em> In vivo</emLa croissance tumorale> et microenvironnement de la tumeur, nous avons utilisé un modèle de souris syngéniques et orthotopique de cancer ovarien chez les animaux immunocompétents. Nous transduites une lignée de cellules de souris de tumeurs (MOV1) avec Katushka protéine fluorescente (MOV1<sup> KAT</sup>) Et ici nous montrent son implantation orthotopique dans l'ovaire et de<em> In vivo</em> Imagerie.
Abstract
Contexte: Le cancer de l'ovaire est généralement diagnostiqué à un stade avancé où le ratio cas / décès est élevé et reste donc le plus meurtrier de tous les cancers gynécologiques parmi les femmes américaines 1,2,3. Tumeurs séreuses sont les formes les plus répandues de cancer des ovaires et de l'4,5 transgéniques Tg-MISIIR-TAG représente le modèle de souris seulement que se développe spontanément ce type de tumeurs. Tg-MISIIR-Tag souris expriment SV40 région transformer sous le contrôle des substances inhibitrices de Müller récepteur de type II (MISIIR) 6 promoteur du gène. D'autres lignées transgéniques ont été identifiés qui expriment le transgène TAg SV40, mais ne développent pas de tumeurs de l'ovaire. Non-tumorale souris sujettes présentent durée de vie typique des souris C57Bl / 6 et sont fertiles. Ces souris peuvent être utilisés comme receveurs d'une allogreffe de cellules tumorales syngéniques isolée de Tg-MISIIR-Tag-DR26 souris.
Objectif: Bien que l'imagerie des tumeurs est possible 7, la détection précoce des tumeurs profondes est difficile chez les animaux vivants de petite taille. Afin de permettre des études précliniques dans un modèle animal immunologiquement intacte pour le cancer ovarien séreux, nous décrivons un modèle de souris syngéniques pour ce type de cancer de l'ovaire qui permet l'imagerie in vivo, les études sur le microenvironnement de la tumeur et une tumeur des réponses immunitaires.
Méthodes: Nous avons d'abord tiré une TAG + lignée cellulaire de souris cancéreuses (MOV1) à partir d'une tumeur ovarienne spontanée récoltées dans un 26 semaines, âgé DR26-Tg MISIIR-Tag femelle. Ensuite, nous stablement transduites MOV1 cellules avec TurboFP635 vecteur lentiviral mammifères qui encode Katushka, un mutant rouge lointain de la protéine fluorescente rouge de l'anémone de mer quadricolor Entacmaea avec excitation / émission maxima à 588/635 nm 8,9,10. Nous orthotopique implanté MOV1 Kat dans l'ovaire 11,12,13,14 de non-tumorale sujettes Tg-MISIIR-Tag souris femelles. Progression de la tumeur a été suivie par l'imagerie optique in vivo et microenvironnement de la tumeur a été analysée par immunohistochimie.
Résultats: orthotopique implanté MOV1 cellules Kat ont développé des tumeurs de l'ovaire séreux. MOV1 tumeurs Kat pourrait être visualisé par l'imagerie in vivo jusqu'à trois semaines après l'implantation (fig. 1) et ont été infiltrées par les leucocytes, comme observé dans les cancers de l'ovaire humain 15 (fig. 2).
Conclusion: Nous décrivons un modèle orthotopique de cancer ovarien adapté à l'imagerie in vivo de tumeurs au début en raison de la haute pH-stabilité et photostabilité de Katushka dans les tissus profonds. Nous proposons l'utilisation de ce nouveau modèle syngénique de cancer ovarien séreux dans les études d'imagerie in vivo et le suivi des réponses immunitaires des tumeurs et d'immunothérapies.
Protocol
Discussion
La chirurgie et les injections orthotopique
D'injection orthotopique à Bursa ovaire exigences de formation et de précision. Ainsi
- En cas de mauvaise expérience, la pratique chirurgicale avec des cadavres d'abord.
- Utilisez de préférence des femelles multipares (une ou deux portées) car ils développent plus ovaires au cours du temps ce qui facilite l'injection et d'augmenter la survie à comparer avec des femelles nullipares.
- En raison de l…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par le NIH AI P01 068 730 (SNC, N.-É.), le NIH CA016520 / TAPITMAT (N.-É.), le financement privé de la Fondation Claneil (N.-É.), et l'ovaire SPORE accorder à la CCCC et la University of Pennsylvania ( P50 CA83638) et le Fox Chase Cancer Center de base de subvention (P30 CA06927) (CDC). Les auteurs remercient l'assistance technique de l'excellente Core Facility / bioluminescence optique dirigée par le Dr EJ Delikatny à l'Université de Pennsylvanie Secreto, Anthony de la cellule souche et Core xénogreffe dirigé par le Dr. G. Danet-Desnoyers à l'Université de Pennsylvanie cancer Centre de formation pour SNC technique d'injection orthotopique et Denada Dangaj à l'Université de Pennsylvanie / OCRC pour aider la chirurgie.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-GLUTAMAX | Invitrogen | 10564-011 | ||
| PBS | Gibco | 14040 | ||
| Versene | Lonza | 17-711E | ||
| Heating pad | Deltaphase | 39 DP | ||
| Povidone pads | Dynarex | 1108 | ||
| Alcohol pads | Fisher | 06-669-62 | ||
| Artificial tears ointment | Phoenix Pharma., Inc. | 17845-153 | ||
| Ketoprofen | Fort Dodge laboratories | |||
| 3cc/insulin syringe | BD | 309301 | ||
| Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm) | Syneture | 9612-31 | ||
| Tissue adhesive | Vetbond | 3M | ||
| Vet Bactrim/ oral suspension | Hi-tech Pharmacal | 840823 | ||
| IVIS-Lumina | Caliper lifesciences | |||
| Isofluorane | Phoenix Pharma., Inc. | J108013 | ||
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Invitrogen | 10437036 | ||
| Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| TurboFP635 mammalian vector | Evrogen | FP721 | ||
| T175 flasks | cellstar | 660-190 |
References
- Etzioni, R., et al. The case for early detection. Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).
- Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet. Future Medicine. 3, 275-288 (2009).
- Anderson, G. L., et al. Assessing Lead Time of Selected Ovarian Cancer Biomarkers: A Nested Case Control Study. J Natl Cancer Inst. 102, 26-38 (2010).
- Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocr Rev 22. , 255-288 (2001).
- Dubeau, L. The cell of origin of ovarian epithelial tumours. Lancet Oncol. 9, 1191-1197 (2008).
- Connolly, D. C., et al. Female mice chimeric for expression of the simian virus 40 TAg under control of the MISIIR promoter develop epithelial ovarian cancer. Cancer Res. 63, 1389-1397 (2003).
- Hensley, H., et al. Magnetic resonance imaging for detection and determination of tumor volume in a genetically engineered mouse model of ovarian cancer. Cancer Biol Ther. 6, (2007).
- Deliolanis, N. C., et al. Performance of the red-shifted fluorescent proteins in deep-tissue molecular imaging applications. J Biomed Opt. 13, (2008).
- Hoffman, R. M. A better fluorescent protein for whole-body imaging. Trends Biotechnol. 26, (2008).
- Shcherbo, D., et al. far-red fluorescent protein for whole-body imaging. Nat Methods. 4, 741-746 (2007).
- Fu, X., Hoffman, R. M. Human ovarian carcinoma metastatic models constructed in nude mice by orthotopic transplantation of histologically-intact patient specimens. Anticancer Res. 13, 283-286 (1993).
- Kiguchi, K., et al. A patient-like orthotopic implantation nude mouse model of highly metastatic human ovarian cancer. Clinical & experimental metastasis 16. , 751-756 (1998).
- Bao, R., et al. Activation of cancer-specific gene expression by the survivin promoter. J Natl Cancer Inst. 94, 522-528 (2002).
- Connolly, D. C., Hensley, H. H. Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In situ -Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents. Current Protocols in Pharmacology 45. , 1-36 .
- Milne, K., et al. Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors. , (2009).
