Summary

Einem orthotopen Modell des seröse Ovarialkarzinom in immunkompetenten Mäusen für In vivo Tumor Imaging und Überwachung der Tumor Immunantworten

Published: November 28, 2010
doi:

Summary

Zur Untersuchung<em> In vivo</em> Tumorwachstum und Tumor-Mikroumgebung, verwendeten wir eine syngenen und orthotopen Mausmodell des Ovarialkarzinoms in immunkompetenten Tieren. Wir transduzierten Maus Tumor-Zelllinie (MOV1) mit Katuschka fluoreszierende Protein (MOV1<sup> KAT</sup>) Und hier zeigen wir seine orthotopen Implantation in Ovar und<em> In vivo</em> Bildgebung.

Abstract

Hintergrund: Das Ovarialkarzinom ist in der Regel in einem fortgeschrittenen Stadium, wo der Fall / Todesfall Verhältnis hoch diagnostiziert und bleibt somit die tödlichste aller gynäkologischen Malignomen unter US-Frauen 1,2,3. Serösen Tumoren sind die häufigsten Formen von Eierstockkrebs und 4,5 der Tg-MISIIR-Tag transgenen stellt die einzige Maus-Modell, das sich spontan entwickelt diese Art von Tumoren. Tg-MISIIR-Tag Mäuse exprimieren SV40 transformiert Region unter die Kontrolle des Müllerschen Hemmstoff Typ-II-Rezeptor (MISIIR)-Gen-Promotor 6. Zusätzliche transgenen Linien wurden die Ausdruck der SV40 TAg Transgen identifiziert, aber nicht entwickeln Ovarialtumoren. Non-Tumor anfällig Mäuse zeigen typische Lebensdauer für C57Bl / 6 Mäusen und sind fruchtbar. Diese Mäuse können als syngenen Transplantat-Empfänger für Tumorzellen von Tg-MISIIR-Tag-DR26-Mäusen isoliert eingesetzt werden.

Ziel: Obwohl Tumorimaging ist möglich, 7, Früherkennung von Tumoren tief in kleinen lebenden Tieren schwierig. Um präklinischen Studien in einer immunologisch intakten Tiermodell für seröse Ovarialkarzinom beschreiben wir eine syngenen Mausmodell für diese Art von Eierstock-Krebs, der in-vivo-Bildgebung, Studien über die Tumor-Mikroumgebung des Tumors Immunantwort ermöglicht.

Methoden: Wir erste abgeleitete einem TAG + Maus-Zelllinie (MOV1) aus einem spontanen Ovarialtumor in einem 26 Wochen alten DR26 Tg-MISIIR-Tag weiblichen geerntet. Dann haben wir stabil transduzierten MOV1 Zellen mit TurboFP635 Lentivirus Säugetieren Vektor, Katuschka kodiert, eine weit-rot-Mutante der rot fluoreszierendes Protein aus Seeanemone Entacmaea quadricolor mit Anregung / Emissionsmaxima bei 588/635 nm 8,9,10. Wir orthotop implantiert MOV1 Kat in den Eierstöcken 11,12,13,14 von Nicht-Tumor anfällig Tg-MISIIR-Tag weiblichen Mäusen. Tumorprogression wurde in vivo optische Bildgebung und Tumor-Mikroumgebung wurde mittels Immunhistochemie analysiert gefolgt.

Ergebnisse: orthotop implantiert MOV1 Kat-Zellen entwickelt serösen Ovarialtumoren. MOV1 Kat Tumoren konnten visualisiert werden in-vivo-Bildgebung bis zu drei Wochen nach der Implantation (Abb. 1) und wurden mit Leukozyten infiltriert, wie in menschlichen Eierstockkrebs 15 (Abb. 2) beobachtet.

Schlussfolgerungen: Wir beschreiben einen orthotopen Modell des Ovarialkarzinoms geeignet für in-vivo-Bildgebung des frühen Tumoren aufgrund des hohen pH-Stabilität und Photostabilität Katuschka in tiefen Gewebeschichten. Wir schlagen vor, den Einsatz dieser neuartigen syngenen Modell seröser Eierstockkrebs für die in vivo Bildgebung und Überwachung der Tumor Immunantwort und Immuntherapien.

Protocol

1. Cell Culture Vor orthotoper Injektion, Kultur MOV1 Kat-Zellen, aus DR26 Tumoren stammen, in einem T175 Flasche, bis sie 90% konfluent. Planen Sie 1 bis 5.000.000 Zellen pro Injektion, die 1 oder 2 T175 Flaschen erfordern verwenden. Am Tag der Injektion Ernte der Zellen und Bestimmung der Zellzahl mit einer Zählkammer. Sobald die Zellkonzentration bestimmt worden ist, Pellet die Zellen durch Zentrifugation für 5 Minuten bei 300 X g bei Raumtemperatur. Nach dem Spin…

Discussion

Chirurgie und orthotopen Injektionen

Orthotoper Injektion in Eierstock Bursa Anforderungen Ausbildung und Präzision. So

  1. Im Falle einer schlechten chirurgischen Erfahrung, Praxis mit Leichen zuerst.
  2. Verwenden Sie bevorzugt multipare Frauen (ein oder zwei Würfe), da sie größere Eierstöcke im Laufe der Zeit die Injektion und die Überlebenszeit ermöglicht mit nulliparen Frauen vergleichen zu entwickeln.
  3. Aufgrund der geringen Größe der Maus Eierstock Bursa,…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Diese Arbeit wurde durch die NIH P01 AI 068730 (SNC, NS), der NIH CA016520 / TAPITMAT (NS), die private Finanzierung durch die Claneil Foundation (NS), und die Eierstöcke SPORE zu gewähren FCCC und der University of Pennsylvania unterstützt ( P50 CA83638) und der Fox Chase Cancer Center-Core Grant (P30 CA06927) (DCC). Die Autoren bedanken sich die hervorragende technische Unterstützung der Optical / Biolumineszenz Core Facility von Dr. EJ Delikatny an der University of Pennsylvania, Anthony Secreto vom Stem Cell und Xenograft-Core von Dr. G. Danet-Desnoyers an der University of Pennsylvania Cancer gerichteten Center for Training SNC orthotopen Injektionstechnik und Denada Dangaj an der University of Pennsylvania / OCRC für die Unterstützung der Operation.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
DMEM-GLUTAMAX   Invitrogen 10564-011  
PBS   Gibco 14040  
Versene   Lonza 17-711E  
Heating pad   Deltaphase 39 DP  
Povidone pads   Dynarex 1108  
Alcohol pads   Fisher 06-669-62  
Artificial tears ointment   Phoenix Pharma., Inc. 17845-153  
Ketoprofen   Fort Dodge laboratories    
3cc/insulin syringe   BD 309301  
Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm)   Syneture 9612-31  
Tissue adhesive   Vetbond 3M  
Vet Bactrim/ oral suspension   Hi-tech Pharmacal 840823  
IVIS-Lumina   Caliper lifesciences    
Isofluorane   Phoenix Pharma., Inc. J108013  
Fetal Bovine Serum, Qualified   Invitrogen 10437036  
Penicillin/streptomycin   Gibco 15140  
TurboFP635 mammalian vector   Evrogen FP721  
T175 flasks   cellstar 660-190  

References

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Cite This Article
Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses. J. Vis. Exp. (45), e2146, doi:10.3791/2146 (2010).

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