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Biology

女答:埃及伊蚊蚊的dsRNA注入

doi: 10.3791/215 Published: July 4, 2007

Summary

反向遗传方法已被证明非常有用,确定哪些基因底层电阻载体病原体在蚊子。这个视频协议,说明了由詹姆斯实验室用于注入雌性埃及伊蚊的蚊子,海港登革热病毒的双链RNA的方法。校准注射针头,注射设置进行操作,并注入胸廓的dsRNA的技术说明。

Abstract

反向遗传方法已被证明非常有用,确定哪些基因底层电阻载体病原体在蚊子。这个视频协议,说明了由詹姆斯实验室用于注入雌性埃及伊蚊的蚊子,海港登革热病毒的双链RNA的方法。校准注射针头,注射设置进行操作,并注入胸廓的dsRNA的技术说明。

Protocol

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  1. 拉玻璃毛细管微量注射针。我们用针拉马,从萨特仪器有限公司(模型P - 2000)。针拉马程序规范是:

    热:275
    FIL:3
    VEL:37
    DEL:250
    PUL:125

  2. 针装入一个已知体积的水(例如,1μL)和手动标记与罚款sharpie的规模。
  3. 成立了蚊子注射后杯。首先削减1000μL枪头最外层提示。然后,切在洞杯边,并插入枪头杯的剩余部分。把一个净或盖杯上。
  4. 用冰填充两个泡沫塑料箱。将冰盒#1立体显微镜下,放置在冰面上的玻璃表面玻璃。
  5. 麻醉与CO 2和地点与杯,冰盒#2,成人的成蚊。
  6. 准备的dsRNA注射针。将填补与双链RNA注射块塑料软管针(注射块的描述见下文)。
  7. 移动杯钳手表玻璃麻醉蚊子。打破注射针尖对蚊子角质层。放弃这种蚊子。
  8. 注射针插入到蚊子的胸部。使用另一只手,从“休息的位置”调整阀对喷油器“注射位置”,并压缩活塞,直到所需的dsRNA量已注入。
  9. 将注入后注射杯蚊子。

注射块成立

  1. 修正了一个50毫升的注射器煤渣块。
  2. 将一个可调的1路阀注射器年底,至少有两个出风口。
  3. 不透气的塑料软管连接到1风口。
  4. 插入软管的自由端的一个微量适配器。

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Luna, B. M., Juhn, J., James, A. A. Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos. J. Vis. Exp. (5), e215, doi:10.3791/215 (2007).More

Luna, B. M., Juhn, J., James, A. A. Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos. J. Vis. Exp. (5), e215, doi:10.3791/215 (2007).

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