Summary
该视频演示了在实验室中使用背面按蚊的一般技术。为照顾实验室蚊子的方法证明通过从幼虫到蛹吸血成年人机体的生命周期的所有阶段。
Abstract
这个协议描述在insectary蚊虫饲养。 insectary客房均保持在28 ° C和〜80％湿度，12小时，。日/夜循环。对于此过程，你需要蚊子的笼子里，无菌10％的蔗糖溶液，擦手纸，烧杯，滤纸过滤纸，玻璃进料器，人体血液和血清，水浴，封口膜，蒸馏水，干净的塑料托盘，蚊子的食物（描述下文），蚊帐覆盖的托盘，真空，并收集室，收集成人。
Protocol
蚊子的食物：
- 食品答：接地的鱼食（Aquaricare）。需要添加一小捏。
- 食品乙：接地猫粮（普瑞纳）。需要添加一小捏。
- 食品：猫食品（普瑞纳）。两片需要添加。
血型：
动物或人体血液中可用于后方蚊子。收集了新鲜的血液是用注射器，并把在无菌15毫升猎鹰，每10毫升血液中含有的CPD（抗凝）1毫升管，然后轻轻地混合，在室温下离心5分钟转速2000。上清液丢弃，照顾，以消除包括其他血细胞（如白细胞）捉鬼外套。 RBC的颗粒，然后悬浮在同等体积的RPMI培养基吹打，并进一步在此中期三次冲洗。最后一次洗涤后，沉淀的红细胞悬浮在同等体积的RPMI培养基，并保存在4 ° C（可保持8-10天）。喂奶前，红细胞的RPMI是离心5分钟（2000转）沉淀下来的细胞，包装红细胞悬浮血清（O +人血清）获得40％的血细胞比容。血液必须保持在37 ° C总是喂养。
第一天：
- 美联储对血液产卵3-5天岁成年雌性蚊子。
- 吸食血液，人工膜（封口膜）喂养方法是使用如下：
- 红血细胞（见上文血液制剂）的混合热灭活血清，以获得一个〜40％的红细胞压积（盒装红细胞40％，血清60％）。这是添加到玻璃接驳。
- 馈线连接到一个温暖的水套（37℃），放在笼子，让蚊子访问膜表面。
- 蚊子都可以喂〜30分钟。
第3天：
- 雌性产卵后两天，他们养活的血液。一个包裹在一个圆锥形的小滤纸放在盛有蒸馏水的小烧杯，确保滤纸变得湿润。烧杯内保持笼蚊子产卵过夜。
第四天：
- 滤纸含有蚊卵被放置在一个塑料托盘〜300毫升蒸馏水。 A加少许食物和鸡蛋托盘允许在接下来的日子里，幼虫孵化。
5 - 8天：
- 美联储增长的幼虫每天有两个片食品彗星，密度和人口监测。初八（5日龄幼虫），幼虫人口稀释，从1托盘〜10纸盘，捏在每个托盘食品A和两片食品彗星。 （〜30分钟）
9 - 12天：
- 幼虫每天喂的食物C.在第12天（9日龄幼虫），水是淡水改变，并添加食物（食品B和食品彗星片捏）。蛹开始在这个阶段发展。托盘是用网覆盖，以避免成年人逃生。 （8-10分钟）
第13天 - 15：
蛹是不允许出现在未来2到成人 - 3天。食品是每天幼虫/蛹，仔细去除净，以避免逃脱的成年人。
16日：
- 通过连接真空抽吸，成年人都收集到一个笼子里。笼组成一个小的用棉灯芯，与10％蔗糖（灭菌）和纸巾衬在底部浸泡笼处理过程中可能发生的任何潜在的糖泄漏浸泡100毫升瓶装。 （约30-40分钟）
第17天 - 21：
- 成人（男性和女性），然后保持在4-5天insectary的房间，10％的蔗糖美联储前他们再次血美联储开始下一个循环。可以使用同样的蚊子产卵不止一次。
- 那些没有实验或饲养需要蚊子可以通过放置在一个冰柜笼子里被杀害。使用的托盘和笼需要清理和干后才可再次使用。
注意 ：可以在蚊子的饲养方法有一些变化，不同的实验室可能有不同的技术。
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Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Food A | Aquaricare | Grounded fish food. A small pinch needs to be added. | ||
| Food B | Purina | Grounded cat food. A small pinch needs to be added. | ||
| Food C | Purina | Cat food. Two tablets needs to be added | ||
| RBC | prepared red blood cells: 40% hematocrit in human serum | |||
| RPMI | Medium | |||
| CPD | anticoagulant | |||
| serum | O+ human serum | |||
| Mosquito feeder | ||||
| parafilm | ||||
| Anopheles gambiae | mosquitos | |||
| 10% sucrose | mosquito food | |||
| insectary |
References
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