इस प्रोटोकॉल और बरकरार anesthetization इमेजिंग के लिए एक विश्वसनीय विधि का वर्णन<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em> लार्वा. हम अस्थिर desflurane संवेदनाहारी को कुछ दिनों के लिए लिए उप सेलुलर और संरचनाओं की फिर से पहचान संकल्प दोहराए इमेजिंग के लिए अनुमति देने के लिए उपयोग किया है<sup> 1</sup>.
ऑप्टिकल इमेजिंग, आनुवंशिक रूप से इनकोडिंग fluorophores और आनुवंशिक उपकरणों में हाल ही के सुधार वांछित ट्रांसजेनिक जानवर लाइनों के कुशल स्थापना की अनुमति एक जीने के संदर्भ में जैविक प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए सक्षम है, और कुछ मामलों में भी बर्ताव, जीव. हम इस प्रोटोकॉल का वर्णन करेंगे कैसे बरकरार ड्रोसोफिला लार्वा, अस्थिर desflurane, चतनाशून्य करनेवाली औषधि का उपयोग करने के लिए विकास और उप सेलुलर संकल्प 1-3 synaptic आबादी के plasticity का पालन anesthetize. जबकि अन्य उपयोगी तरीकों ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर लार्वा anesthetize पहले किया गया है 4,5,6,7,8 वर्णित है, इस के साथ साथ प्रस्तुत प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण निम्नलिखित संयुक्त प्रमुख विशेषताओं की वजह से सुधार दर्शाता है: (1) anesthetization की एक बहुत ही उच्च स्तर, भी दिल की धड़कन 150 1 एनएम के पार्श्व संकल्प के लिए अनुमति गिरफ्तार, (2)> anesthetization चक्र के अनुसार 90% के एक उच्च जीवित रहने की दर, घंटे की अवधि से अधिक 2 दिन और (अधिक से अधिक पाँच समय अंक की रिकॉर्डिंग की अनुमति 3) एक उच्च 2 मामलों में हमें सक्षम करने संवेदनशीलता शारीरिक स्तर पर व्यक्त प्रोटीन की गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए. विस्तार में, हम postsynaptic ग्लूटामेट रिसेप्टर सबयूनिट GluR – आईआईए स्थिर ट्रांसजेनिक लाइनों में अंतर्जात 1 प्रमोटर और एक्सॉन जाल लाइन 1 FasII – GFP के माध्यम से व्यक्त की कल्पना करने में सक्षम थे. (4) 4,7 लार्वा अन्य तरीकों के विपरीत न केवल जीवित imaged किया जा सकता है, लेकिन यह भी बरकरार (यानी गैर dissected) अवलोकन 1 दिन के एक नंबर पर होने के लिए अनुमति देता है. साथ वीडियो विवरण के अलग अलग हिस्सों के vivo इमेजिंग 2,3 कक्ष में समारोह, लार्वा, anesthetization प्रक्रिया, कैसे लार्वा के भीतर विशिष्ट पदों को फिर से पहचान और लार्वा के सुरक्षित हटाने के बढ़ते सही इमेजिंग से चैम्बर.
प्रस्तुत विधि शुरू ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर लार्वा के शरीर दीवार मांसपेशियों पर glutamatergic synapses के अध्ययन के लिए विकसित किया गया था. ड्रोसोफिला neuromuscular जंक्शन (NMJ) एक टकसाली मांसपेशियों और न्यूरॉन्स के cyto वास्तुकला की विशेषता है और इस प्रकार आदर्श vivo इमेजिंग में के लिए उपयुक्त है . हालांकि, वर्णित anesthetization प्रोटोकॉल इमेजिंग NMJ तक ही सीमित नहीं है, ड्रोसोफिला लार्वा की पारदर्शिता वर्णित प्रोटोकॉल के अनुकूलन अंगों के विकास का अध्ययन करने के लिए, कोशिकाओं के प्रवास axonal और कोशिकाओं के भीतर उप सेलुलर पुनर्गठन कार्गो के परिवहन की सुविधा.
The authors have nothing to disclose.
हम Andreas Schönle, biophysical रसायन विज्ञान, जर्मनी और डेविड जे Sandstrom, मानसिक स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान, राष्ट्रीय तकनीकी सलाह के लिए स्वास्थ्य, Bethesda, एमडी, संयुक्त राज्य अमेरिका के संस्थानों के लिए मैक्स काष्ठफलक – संस्थान धन्यवाद. हम फ्रैंक Kötting, यूरोपीय तंत्रिका विज्ञान संस्थान, इमेजिंग कक्ष निर्माण के लिए गौटिंगेन और anesthetization डिवाइस धन्यवाद. यह काम अल्जाइमर Forschung TMRYZ के लिए पहल से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था सेलुलर और आण्विक तंत्रिका विज्ञान, विश्वविद्यालय के Tübingen के लिए ग्रेजुएट स्कूल के एक फैलोशिप द्वारा चीन छात्रवृत्ति परिषद, SBH की एक फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था.
Reagents:
Equipment: