Summary
Den mygga midgut och spottkörtlar är viktiga in-och utfart för Vector patogener som Plasmodium falciparum och denguefeber virus. Denna video visar dissektion tekniker för att ta bort midgut och spottkörtlar från Aedes aegypti myggor.
Abstract
Den mygga midgut och spottkörtlar är viktiga in-och utfart för patogener som Plasmodium parasiter och virus denguefeber. Denna video protokoll visar dissektion tekniker för avlägsnande av midgut och spottkörtlar från Aedes aegypti myggor.
Protocol
Dissekering av midgut och saliv vävnader körtel från myggor kräver förberedelse innan 1X Fosfatbuffrad saltlösning (1X PBS) lösning och anesthetization av myggor genom att utsätta till en temperatur på 4 ° C tills orörlig. Myggorna kvar bedövas genom att placera i en petriskål som hålls kall på is. Andra material som krävs är: ljusmikroskop utrustad med 10x objektiv, pipett, spetsig pincett, glasskiva, nål-tip sonder.
Midgut dissektion
- Placera en droppe 1X PBS på en glasskiva monteras under ljusmikroskop.
- Överför en mygga på det färdigställda bilden av stickande mygga bröstkorgen med en nål-tip sond.
- Håll mygga med sonden använder pincett för att ta tag i näst sista buk-segmentet och dra försiktigt bort mygga buken i en enda rörelse. Den midgut bör sitta kvar i immobiliserade bröstkorgen.
- Kasta buken. Använd pincett för att lossa midgut från bröstkorgen.
Spottkörteln dissektion
- Placera en droppe 1X PBS på en glasskiva monterad under ett ljusmikroskop.
- Plocka upp en mygga av stabbling bröstkorgen med en nål-tip sond.
- Dra av mygga benen med hjälp av fingrarna.
- Överför mygga på bilden.
- Ta bort huvudet av mygga med hjälp av pincetten.
- Håll mygga bröstkorgen med sonden, använder en annan givare för att försiktigt trycka ner på bröstkorgen.
- Spottkörtlarna finns på den främre delen av bröstkorgen och kan isoleras med hjälp av en nål-tip sond och bryta bilagor som ansluter körtel på bröstkorgen. Intakt spottkörtlar består av tre lober: två laterala loberna och en medial lob.
