역방향 유전자 접근 방법은 모기에 벡터 병원균하는 유전자 underly 저항을 결정하는 매우 유용하게 입증했습니다. 이 비디오 프로토콜은 말라리아 기생충을 항구 아노 펠 레스 모기 gambiae로 dsRNA를 주입하기 위해 Dimopoulos 연구실에서 사용하는 방법을 보여줍니다. 사출 설정을 조작하고 흉부에 dsRNA를 주입 기술은 그림이다.
Abstract
역방향 유전자 접근 방법은 모기에 벡터 병원균하는 유전자 underly 저항을 결정하는 매우 유용하게 입증했습니다. 이 비디오 프로토콜은 말라리아 기생충을 항구 아노 펠 레스 모기 gambiae로 dsRNA를 주입하기 위해 Dimopoulos 연구실에서 사용하는 방법을 보여줍니다. 사출 설정을 조작하고 흉부에 dsRNA를 주입 기술은 그림이다.
Protocol
모기에 RNAi – 중재 유전자 입을 관심의 유전자를 대상으로 특정 dsRNAs의 사전 준비 및 정화가 필요합니다. dsRNA 합성을 위해, 우리는 T7 RNA 시험 관내 전사 반응에서 효소 – 중재의 사용을 만드는 앰비온의 Megascript 키트를 권장합니다. dsRNA 정화를위한, 우리는 Qiagen RNeasy 키트를 권장합니다. dsRNA의 샘플은 계량 3 μg / 물 μL 조정해야합니다. 당신이 필요합니다 다른 자료는 다음과 같습니?…
Discussion
유전자 입을의 효율성은 매우 다양하고 세포와 기관에 의해 증명서 및 단백질 턴 오버 요금 및 dsRNA의 이해 효율을 포함한 여러 가지 요인에 따라 달라집니다. 우리는 입을는 이르면 1로 일 게시 주사를 시작하고 최대 6 일 게시 주입 지난 수있는 것으로 나타났습니다. 입을를 확인하기 위해 모래 바닥 같은 양적 PCR과 서양 등 증명서와 단백질 검출 방법을 사용합니다.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Megascript
kit
Ambion
for dsRNA synthesis; T7 RNA polymerase-mediated in vitro transcription reaction
RNeasy
Qiagen
For dsRNA purification
dsRNA
should be quantified and adjusted to 3 μg/ μL in water