Обратные генетические подходы оказались чрезвычайно полезными для определения того, какие гены лежащие в основе сопротивления вектора патогенов в комаров. Это видео показывает протокол метод, используемый Dimopoulos лаборатории, чтобы придать дсРНК в Anopheles gambiae комары, которые гавани малярийного паразита. Техника манипуляций инъекции установки и инъекционных дсРНК в грудной клетки показано на рисунке.
Abstract
Обратные генетические подходы оказались чрезвычайно полезными для определения того, какие гены лежащие в основе сопротивления вектора патогенов в комаров. Это видео показывает протокол метод, используемый Dimopoulos лаборатории, чтобы придать дсРНК в Anopheles gambiae комары, которые гавани малярийного паразита. Техника манипуляций инъекции установки и инъекционных дсРНК в грудной клетки показано на рисунке.
Protocol
RNAi-опосредованной генов в комары требует предварительной подготовки и очистки конкретных dsRNAs этой цели гена. Для синтеза дсРНК, мы рекомендуем комплект Амбион Megascript которая использует Т7 РНК-полимеразы-опосредованной реакции в пробирке транскрипции. Для очистки дсРНК, мы рекомен…
Discussion
Эффективность генов сильно варьирует и зависит от ряда факторов, включая стенограммы и белка оборот ставок, а дсРНК эффективность поглощения клетками и органами. Мы обнаружили, что глушитель начинает уже через 1 день после инъекции и может длиться до 6 инъекций сообщение дней. Используйте запись и…
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Megascript
kit
Ambion
for dsRNA synthesis; T7 RNA polymerase-mediated in vitro transcription reaction
RNeasy
Qiagen
For dsRNA purification
dsRNA
should be quantified and adjusted to 3 μg/ μL in water