Summary
نموذج فأرة
Abstract
زرع الخلايا الجذعية والفيروسات في الرحم لديها امكانات هائلة لعلاج الاضطرابات الخلقية في الجنين البشري. على سبيل المثال ، في زرع الرحم (IUT) من الخلايا الجذعية المكونة للدم قد استخدمت بنجاح لعلاج المرضى الذين يعانون من نقص المناعة الشديد مجتمعة 1،2 ، وفي ظروف أخرى عديدة ، ومع ذلك ، فقد حاولت دون نجاح الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا. 3 ونظرا لهذه النتائج المختلطة ، وتوافر نموذج غير بشرية فعالة لدراسة العواقب البيولوجية لزرع الخلايا الجذعية والعلاج الجيني أمر بالغ الأهمية لدفع عجلة هذا المجال. وقد استخدمنا وغيرهم من طراز الماوس الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا لدراسة العوامل التي تؤثر في نجاح engraftment في الرحم المزروع الخلايا الجذعية المكونة للدم في الفئران البرية على حد سواء من نوع 4-7 وأولئك الذين يعانون من الأمراض الوراثية. 8،9 البيئة الجنين كما يوفر مزايا كبيرة لل نجاح العلاج الجيني في الرحم. على سبيل المثال ، أدى تسليم 10 الفيروسة الغدانية ، الغدة المرتبطة الفيروسية 10 ، 11 فيروسات ، وناقلات lentiviral 12،13 في الجنين في تنبيغ الأجهزة متعددة بعيدة من موقع الحقن مع التعبير الجيني على المدى الطويل. في الرحم ولذا قد يكون العلاج الجيني تعتبر استراتيجية العلاج المحتمل للاضطرابات جين واحد مثل ضمور العضلات أو التليف الكيسي. ميزة أخرى محتملة من الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا هي القدرة على تحفيز جهاز المناعة على التسامح مستضد معين. كما رأينا في الفئران مع الهيموفيليا ، وإدخال عامل التاسع في وقت مبكر من نتائج التنمية في التسامح لهذا البروتين (14).
بالإضافة إلى استخدامه في التحقيق العلاجات البشرية المحتملة ، يمكن للنموذج الفأر من الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا أن تكون أداة قوية لدراسة المسائل الأساسية في بيولوجيا الخلايا الجذعية والتنموية. على سبيل المثال ، يمكن للمرء تقديم مختلف الجزيئات الصغيرة للحث أو منع محددة التعبير الجيني في مراحل الحمل ومعرفة التعامل مع المسارات التنموية. ويمكن تقييم أثر هذه التعديلات في timepoints المختلفة بعد الزرع الأولي. علاوة على ذلك ، يمكن للمرء أن زرع الخلايا المحفزة أو نسب محددة السلف في البيئة لدراسة الأجنة الجذعية تمايز الخلايا المضيفة في بيئة غير المشع وغير قلق.
قدمت نموذج الفأر من الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا بالفعل أفكارا عديدة داخل مجالات علم المناعة ، والتنموية ، وبيولوجيا الخلايا الجذعية. في هذا البروتوكول القائم على الفيديو ، ونحن وصف نهج خطوة بخطوة لأداء الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا في الأجنة الماوس والخطوط العريضة للخطوات حاسمة والمزالق المحتملة لهذه التقنية.
Protocol
1. إعداد حقن الماصات
- معايرة مجتذب ماصة مثل هذا الفصل بين ماصة الزجاج يحدث في غضون 15 ثانية (انظر تعليمات الشركة الصانعة فيما يتعلق المعايرة). سوف ماصة لديها تفتق حيث يفصل.
- قطع نهاية ماصة مثل هذه المسافة من بداية تفتق إلى نهاية ماصة غير ل1.04cm 1.05cm. طول ماصة يتناسب عكسيا مع عيار فتحة ماصة. أن ندرك أن صنع أطول ماصة النتائج أيضا في الطرف الأضعف التي هي أكثر عرضة للكسر خلال الحقن.
- الخطوة المقبلة في جعل ماصة هو خلق شطبة السلس شحذ طرف على عجلة الماس شحذ. في وقت قطع ماصة إلى الحجم المناسب ، وغالبا ما ماصة فواصل مع شطبة الطبيعية في طرفها الذي يجب أن تستخدم عند وضع ماصة على عجلة القيادة. أثناء هذه العملية ، فمن المهم للراحة بلطف ماصة على عجلة وشحذ دوريا إعادة تقييم للتأكد من ماصة لمس تزال عجلة (كما شطبة يصبح أكثر سلاسة ، سوف تفقد الاتصال مع شحذ عجلة).
- مرة واحدة في شطبة ناعمة ، لا بد من شحذ غيض ماصة (الشكل 1). رفع ماصة بحيث لم يعد لمس عجلة شحذ ، تناوب عليها من قبل في اتجاه عقارب الساعة 10-50 درجة ، ووضع الظهر ماصة على عجلة دوارة شحذ لمدة 10 ثواني ~. سحب ماصة من العجلة وشحذ الآن فحص الحافة. هذه الخطوة تحتاج عادة إلى تكرارها مع تعديلات صغيرة عدة لإنشاء حافة حادة. إذا وضعت على حافته ماصة لفترة طويلة جدا ، هو أكثر عرضة لتطوير سطح متفاوتة (الشكل 1). بعد الانتهاء من جانب واحد ، يمكنك أن تنتقل إلى شحذ حافة المعاكس بتكرار الخطوات المذكورة أعلاه.
- استخدام علامة دائمة لرسم خط كفافي كل 4mm بدءا حيث تفتق يبدأ من ماصة. هذه الخطوط الفاصلة تتوافق مع حجم 5uL.
2. زرع في الرحم
- بعد إعداد المادة عن طريق الحقن (الخلايا على سبيل المثال ، فيروس ، الخ) يمكنك إعداد للحقن. نستخدم microinjector متصلة الهواء المضغوط مع الإعدادات التالية : (ضبط الضغط : 60-80 رطل المدخلات ، وملء 40 رطل ، وضخ 8-12 رطل في البوصة المربعة ، والتوازن 0 رطل في البوصة المربعة ، وعقد 0 رطل ؛ الوقت حقن 100 مللي ثانية).
- ماصة لتعقيم الحقن ، وتنظيفه مرتين مع EtOH 70 ٪ تليها مرتين مع 1X PBS العقيمة. كما غيض من ماصة لا يزال هشا للغاية ، ونحن لا ننصح التعقيم وماصات الحقن.
- يمكن إما أن يتم ذلك باستخدام حقن loupes التكبير 2.5X - الإصدار 3.5x أو مجهر تشريح. إعداد منطقتك الداخلي ببطانية الاحتباس الحراري ، والإضاءة ، والأدوات الجراحية اللازمة.
- تخدير الحوامل الماوس (نستخدم isoflurane والأكسجين تسليمها عن طريق وحدة التخدير تدفق مستمر). ضع الماوس على وسادة التدفئة في موقف ضعيف ويلصق كل طرف مع الشريط لتأمين الماوس في المكان.
- مقطع الفراء. ثم ، وارتداء القفازات الجراحية المعقمة ، الإعدادية في البطن مع 10 ٪ بوفيدون اليود ، تليها الكحول ، وحقن مسكنة من هذا القبيل كما البوبرينورفين.
- جعل شق 1cm في أسفل البطن (الجانب الأكثر أدنى من شق ينبغي حوالي 1cm متفوقة على introitus). شق الجلد واللفافة و. يجب الحرص على عدم إيذاء أعضاء البطن (الأمعاء والمثانة) والتي هي على الفور تحت طبقة رقيقة من اللفافة.
- باستخدام قطعة قطن ، وتمتد برفق لفافة وتسليم الرحم الحامل من خلال شق. احصاء عدد الأجنة التي يتم أولا تحديد المبيضين الأيمن والأيسر للتأكد من تصور الرحم بأكمله. مكان الرحم مرة أخرى في تجويف البطن قبل المتابعة بحيث تظل دافئة الأجنة أثناء التحضير للحقن.
- وضع حجم مناسب من المواد اللازمة لعدد من الأجنة كنت تخطط لحقن. بينما شغل الإبرة مع عينتك ، فمن المهم للحفاظ على الحافة submersed ماصة لتجنب الشفط عينتك في أنابيب microinjector. منذ الخلايا عادة في حجم صغير ، ونحن عادة مكان لهم في microfuge الصغيرة (مثلا : 0.5mL) أنبوب أو مباشرة على قطعة من Parafilm لتكون قادرة على ملء الإبرة دون كسر غيض ماصة.
- عقد بلطف كل الجنين والتعرف على جزء من الجنين كنت تخطط لحقن (الكبد على سبيل المثال ، التجويف البريتوني ، الساق ، الخ). مع الإبهام والسبابة ، يجب تثبيت الجنين داخل التجويف الذي يحيط بالجنين بحيث لا تدور في حين يتم تنفيذ عملية الحقن. من المهم الاستمرار على الجنين بحزم كاف لتحقيق الاستقرار في ذلك حتى الآن بما فيه الكفاية بلطف لتجنب الإضرار بها.
- إدراج ماصة بعناية من خلال الرحم ، سلى ، وجلد الجنين ، وإلى الجهاز الهدف. إذا ماصة حاد ، ينبغي أن يمر بسهولة من خلال هذه الأنسجة. إذا غيض ماصة غير مملة ، كنت واي ليرة لبنانية خيام إشعار الرحم والأغشية الأمنيوسي. حقن حجم المطلوب في كل الجنين. لا بد من أن يكون ثابتا تحركاتك خلال وقت الإدراج ، والحقن ، والانسحاب من ماصة.
- مرة واحدة يتم حقن حجم المطلوب ، سحب ماصة بعناية. إذا فعلت بشكل صحيح ، يجب أن المواد التي لم يتسرب من التجويف الذي يحيط بالجنين أو الرحم. إذا تم إنشاء حفرة كبيرة في السلى ، والتي يمكن للمرء أن يتعرف عن تسرب السائل الذي يحيط بالجنين ، ثم يعرض للخطر بقاء. أخيرا ، من أجل الدراسات التي تنطوي على حصاد ما بعد الولادة ، يجب على جميع الأجنة تلقي حقن مثالية من الناحية الفنية ، حيث لا يوجد وسيلة لتمييز الأجنة وحقن uninjected بعد الولادة.
- إذا كنت تنفذ عمليات الحقن في كبد الجنين ، قد ترى في بعض الأحيان الدم في الطرف ماصة بعد سحب هذا ، فإنه يؤكد كنت في الموضع الصحيح ، وينبغي ألا تؤثر على بقاء. إذا كان أداء الحقن داخل الصفاق ، وتهدف أقل قليلا من كبد الجنين. لحقن العضلي ، قد وضع الجنين لتحديد الورك والفخذ وحقن العضلة الألوية. أخيرا ، من أجل حقن داخل البطيني ، فمن السهل أن نرى خيوط الاكليلية لتوجيه ماصة للهدف المناسب. لهذه الحقن ، ويطلب من ماصات عيار أكبر قليلا لاختراق الجمجمة دون كسر ماصة.
- المقبل ، بعناية مكان الرحم مرة أخرى إلى تجويف البطن. تأكد من عدم الملتوية على نفسها أو حول إمداد الأوعية الدموية. تقديم برنامج تلفزيوني من 1mL 1X العقيمة في التجويف البريتوني الأم لاستبدال أي السوائل التي فقدت أثناء العملية. إغلاق شق في 2 طبقات مع خياطة مضفر امتصاص 5-0 (مثلا : Vicryl). أولا إغلاق اللفافة دون إصابة الأمعاء أو المثانة الكامنة ، ومن ثم إغلاق الجلد.
- في هذا الوقت ، يمكن أن تدار بعد الإجراء أدوية لتسكين الألم. عودة إلى حقن كل أنثى في قفص الفردية الخاصة ، ووضع القفص على بطانية الاحتباس الحراري. رصد الماوس حتى يصبح في وضع مستقيم. وضع الفراش في قفص ووضع الماوس في منطقة هادئة من الماوس المرفق حيث انه لا ينبغي ان ينزعج (أي عدم تنظيف القفص) حتى عدة أيام بعد الولادة. والتقليل من أي ضغط إضافي للحيوان تقليل فرص العمل قبل الأوان.
- بمجرد الانتهاء من حقن نظيفة ماصة الخاص مرتين مع 1X PBS معقمة وEtOH مع 70 ٪ مرة واحدة.
- ينبغي التقيد الإناث حقن يومية لضمان انهم يتماثلون للشفاء من الإجراء دون صعوبة. ينبغي رصد شق للعلامات ، والتهاب تورم ، وفصل الجرح ، وغيرها من العدوى. يمكن إعطاء المسكنات بعد العملية حسب الحاجة.
3. ممثل النتائج :
بقاء الأجنة حقن لمدة التسليم هي العامل الرئيسي الذي يحد من تحقيق النجاح مع هذه التقنية. اعتمادا على حقن المواد وسلالة تستخدم الماوس ، يمكن أن تختلف معدلات البقاء على قيد الحياة. بصفة عامة ، ينبغي أن حقن الخلايا المكونة للدم في البرية من نوع الفئران في E14 ينتج ما لا يقل عن 50 ٪ يعيشون المولد الجراء. ارتفاع معدلات البقاء على قيد الحياة ممكنة بالاعتماد على الجوانب الفنية على حد سواء من الحقن ، وكذلك الخصائص لدى الفئران التي حقنت.
التقليل من الصدمة إلى الرحم والأغشية السلوية هو الجانب الأكثر أهمية التقنية لهذا البروتوكول. حادة ، وذات العيار الصغير ماصات الصدمات في الرحم نتيجة الحد الأدنى من خلال الحقن. نحن لا نوصي باستخدام إبر الحقن وفقا لمعايير الكفاءة من الإبر الجاهزة كبير جدا وسيؤدي في حفرة كبيرة في الرحم. وضعت اليد حقن الزجاج الماصات هي إلا إبر عيار الصغيرة التي يمكن استخدامها في عمليات الحقن في الرحم. تقنية جراحية دقيقة ودقيقة ، بما في ذلك التعامل مع طيف من الرحم ومخدر قصير أمر حاسم أيضا من أجل تحقيق النتائج المثلى.
يمكن أن خصائص معينة من الفئران المستفيدة مثل الخلفية الوراثية ، وعمر الحمل ، وحجم القمامة تؤثر أيضا على البقاء على قيد الحياة. سلالات معينة من الفئران هم أكثر عرضة للعمالة المبكرة وفقدان الحمل اعتمادا على خلفيتهم الجينية. الحيوانات المعدلة وراثيا 15 بعيوب العضلات أو الاعصاب يمكن أن يكون ضعف القدرة على تقديم الأجنة عن طريق المهبل بعد خضوعه لالبطن خط الوسط 8 إناث الحوامل وهذه قد تتطلب التسليم من قبل قيصرية. وقد وجدنا أيضا أن عمر الحمل في وقت الحقن يمكن أن تؤثر على قدرتها على البقاء. الأجنة التي تقل أعمارهم عن 12 يوما الجنينية وانخفاض معدلات البقاء على قيد الحياة من كبار السن الأجنة. أخيرا ، وجدنا أن حجم القمامة كبيرة (> 10 الأجنة) تميل إلى أن ارتفاع معدلات سقوط الجنين بعد الحقن. الاهتمام بالجوانب التقنية على حد سواء من هذه التقنية والخصائص التي تنفرد بها الفئران يمكن حقنها تعظيم بقاء الأجنة المحقونة.
ve_content "> وعندما يتم تنفيذ هذه الأساليب بشكل صحيح ، يمكن للمرء أن يتوقع أن تتعرض الأجنة لجميع المواد المحقونة. مماثلة لوضع ما بعد الولادة ، إلا أن التنفيذ الناجح للخلايا أو الفيروسات في الرحم لا يؤدي دائما في engraftment الخلية المانحة أو الجين التعبير ، على التوالي. engraftment للخلايا الجذعية ، على سبيل المثال ، تعتمد على عدة عوامل مثل جرعة ومصدر للخلايا المزروعة. وبالمثل ، فإن نجاح تنبيغ الفيروسية ، في جزء منه ، والتي تحددها نوع من ناقلات الفيروسية المستخدمة. يجب على المرء فهم العوامل العديدة التي تؤثر البقاء الجرو ، engraftment الخلوية ، وتنبيغ الفيروسية لتحقيق النجاح مع هذا البروتوكول.
الشكل 1. مخطط تصور سليم لشحذ ماصات الحقن (الخطوة 1.4)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
أكثر من 50 عاما مضت ، بيلينجهام ، برنت ، ومدور المستخدمة في زرع الرحم في الفئران للحث على التسامح في مأمن من البروتينات الخارجية (16). ومنذ ذلك الوقت ، وقد استخدمت عدة تنويعات من هذه التقنية لمعالجة مسائل في علم المناعة وبيولوجيا الخلايا الجذعية.
بروتوكول مفصلة هنا هو واحد من أكثر الوسائل متاحة لIUT. الجنين في الكبد يقدم هدفا تصور بسهولة ويتيح الوصول إلى الدورة الدموية الجهازية من خلال البوابة والأوردة الكبدية. ومع ذلك ، فقد وصفت عدة تعديلات من أجل تحقيق أفضل توقيت ومكان الحقن المطلوب. على سبيل المثال ، يمكن للحقن في الأجنة الذين تقل أعمارهم عن E13.5 يكون أكثر صعوبة لأن الرحم لا تتسم بالشفافية. إذا كان هذا النهج لا بد من دراسة سابقة الأحداث في التطور ، يمكن استخدام الموجات فوق الصوتية الموجهة لحقن الأنسجة المستهدفة ولا سيما (17). توجيهات الموجات فوق الصوتية مفيد أيضا لتوجيه حقن أجهزة معينة ، مثل القلب أو الرئتين. الحقن في الوريد إلى الوريد المحي 18،19 تقدم ميزة توفير الخلايا مباشرة إلى الدورة الدموية ويمكن أن تسمح لإيصال كميات أكبر من الخلايا. 5 لدينا وصف عمدا النهج العام لأداء الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا في الفئران حتى أن القارئ لديه الأساس اللازم لتحقيق النجاح مع هذه الحقن ، ويمكن تكييف هذه الأساليب لتطبيق المحددة المطلوبة
على الرغم من استخدامه الأولية لدراسة التسامح المناعي أكثر من 50 سنة مضت ، وهناك علامات الاستفهام لا تزال مهمة الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا التي ستكون مفيدة. وقد برهنت على قدرتها على إحداث التسامح لمستضدات أجنبية محددة إدخالها في البيئة الجنينية في الفئران. 4،6،7 على الرغم من أن الجهاز المناعي الماوس الجنين في وقت لاحق من ذلك من الحيوانات الكبيرة ، وربما أثر هذا الاستنتاج ، من خلال آليات محددة التسامح الجنين الذي يحدث في الفئران تحتاج إلى مزيد من الدراسة. مثل هذه التجارب قد استجلاء سبل تحسين الحث التسامح بين البشر. حتى في الفئران ، وعوامل مثل توافر منافذ للدم والميزة التنافسية للخلايا المضيفة لا تزال تحد من نجاح engraftment الخلايا الجذعية 3 الاستراتيجيات الحالية لتحقيق المزيد من هذا التلاعب وتشمل آليات محددة للاستجابة المضيف المناعية وتحقيق الاستفادة المثلى من الطريق ، التوقيت ، وجرعة من الخلايا الجذعية التسليم. الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا في الفئران الحمل المبكر نموذجا مثاليا لدراسة الخلايا الجذعية engraftment والتمايز.
الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا هو أداة قوية لفهم القضايا الأساسية في مجالات الخلايا الجذعية وعلم الأحياء التطوري. وتحديد الآليات التي تؤدي إلى التسامح الجنين لمستضدات التي أدخلت في الرحم آثار كبيرة على مجال زرع الخلايا الجذعية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن التسليم الناجح لناقلات فيروسية توفير العلاج للاضطرابات جين واحد. توفر العديد من سلالات الماوس المعدلة وراثيا ومتحولة يسمح للتحقيق في دور جينات معينة تلعب لتغيير النمط الظاهري هو متوقع. فإن نموذج الفأر من قبل الجامعة الإسلامية للتكنولوجيا مما لا شك فيه هذه المجالات ويقربنا من تحقيق إمكاناتهم الكاملة السريرية لعلاج المرضى الذين يعانون من التشوهات الخلقية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
نود أن نعترف مصادر تمويلنا : معهد كاليفورنيا للطب التجديدي السريرية زميل المنحة التدريب (AN) ، المؤسسة الوطنية للعلوم (MW) ، ايرين Perstein جائزة (TCM) ، الكلية الاميركية للجراحين (TCM) ، جمعية طب الأطفال الأمريكية الجراحية ( الطب الصيني التقليدي) ، ومارس من الدايمات (TCM).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Pipettes | Kimble Chase | 71900-100 | |
| Pipette puller | Sutter Instrument Co. | Model P-30 | |
| Microinjector | Narishige International | IM-300 | |
| Pipette sharpener | Sutter Instrument Co. | Model BV-10 |
References
- Flake, A. W. Treatment of X-linked severe combined immunodeficiency by in utero transplantation of paternal bone marrow. N Engl J Med. 335, 1806-1810 (1996).
- Wengler, G. S. In-utero transplantation of parental CD34 haematopoietic progenitor cells in a patient with X-linked severe combined immunodeficiency (SCIDXI). Lancet. 348, 1484-1487 (1996).
- Flake, A. W., Zanjani, E. D. in utero hematopoietic stem cell transplantation: ontogenic opportunities and biologic barriers. Blood. 94, 2179-2191 (1999).
- Merianos, D. J. Maternal alloantibodies induce a postnatal immune response that limits engraftment following in utero hematopoietic cell transplantation in mice. J Clin Invest. 119, 2590-2600 (2009).
- Peranteau, W. H., Endo, M., Adibe, O. O., Flake, A. W. Evidence for an immune barrier after in utero hematopoietic-cell transplantation. Blood. 109, 1331-1333 (2007).
- Kim, H. B., Shaaban, A. F., Yang, E. Y., Liechty, K. W., Flake, A. W. Microchimerism and tolerance after in utero bone marrow transplantation in mice. J Surg Res. 77, 1-5 (1998).
- Durkin, E. T., Jones, K. A., Rajesh, D., Shaaban, A. F. Early chimerism threshold predicts sustained engraftment and NK-cell tolerance in prenatal allogeneic chimeras. Blood. 112, 5245-5253 (2008).
- Mackenzie, T. C., Shaaban, A. F., Radu, A., Flake, A. W. Engraftment of bone marrow and fetal liver cells after in utero transplantation in MDX mice. J Pediatr Surg. 37, 1058-1064 (2002).
- Hayashi, S. Mixed chimerism following in utero hematopoietic stem cell transplantation in murine models of hemoglobinopathy. Exp Hematol. 31, 176-184 (2003).
- Bouchard, S. Long-term transgene expression in cardiac and skeletal muscle following fetal administration of adenoviral or adeno-associated viral vectors in mice. J Gene Med. 5, 941-950 (2003).
- Meza, N. W. Rescue of pyruvate kinase deficiency in mice by gene therapy using the human isoenzyme. Mol Ther. 17, 2000-2009 (2009).
- MacKenzie, T. C. Efficient transduction of liver and muscle after in utero injection of lentiviral vectors with different pseudotypes. Mol Ther. 6, 349-358 (2002).
- MacKenzie, T. C. Transduction of satellite cells after prenatal intramuscular administration of lentiviral vectors. J Gene Med. 7, 50-58 (2005).
- Sabatino, D. E. Persistent expression of hF.IX After tolerance induction by in utero or neonatal administration of AAV-1-F.IX in hemophilia B mice. Mol Ther. 15, 1677-1685 (2007).
- Mellor, A. L., Munn, D. H. Immunology at the maternal-fetal interface: lessons for T cell tolerance and suppression. Annu Rev Immunol. 18, 367-391 (2000).
- Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. Actively acquired tolerance of foreign cells. Nature. 172, 603-606 (1953).
- Endo, M. Gene transfer to ocular stem cells by early gestational intraamniotic injection of lentiviral vector. Mol Ther. 15, 579-587 (2007).
- Waddington, S. N. Long-term transgene expression by administration of a lentivirus-based vector to the fetal circulation of immuno-competent mice. Gene Ther. 10, 1234-1240 (2003).
- Schachtner, S., Buck, C., Bergelson, J., Baldwin, H. Temporally regulated expression patterns following in utero adenovirus-mediated gene transfer. Gene Ther. 6, 1249-1257 (1999).
