وقد أثبتت عكس النهج الوراثية مفيدة للغاية لتحديد الجينات التي تشكل أساس المقاومة لمسببات الأمراض في ناقلات البعوض. هذا البروتوكول الفيديو يوضح الطريقة التي يستخدمها المختبر Dimopoulos لحقن الرنا المزدوج الجديلة في الأنوفيلة غامبياي ، التي ترعى طفيل الملاريا. ويتجلى أسلوب التلاعب الإعداد الحقن وحقن الرنا المزدوج الجديلة في القفص الصدري.
Abstract
وقد أثبتت عكس النهج الوراثية مفيدة للغاية لتحديد الجينات التي تشكل أساس المقاومة لمسببات الأمراض في ناقلات البعوض. هذا البروتوكول الفيديو يوضح الطريقة التي يستخدمها المختبر Dimopoulos لحقن الرنا المزدوج الجديلة في الأنوفيلة غامبياي ، التي ترعى طفيل الملاريا. ويتجلى أسلوب التلاعب الإعداد الحقن وحقن الرنا المزدوج الجديلة في القفص الصدري.
Protocol
[رني بوساطة إسكات الجينات في البعوض ويتطلب التحضير المسبق وتنقية dsRNAs المحددة التي تستهدف هذا الجين من الفائدة. لتخليق الرنا المزدوج الجديلة ، نوصي عدة Megascript Ambion الذي يجعل من استخدام الحمض النووي الريبي بوليميراز T7 بوساطة كرد فعل النسخ المختبر. لتنقية الرنا…
Discussion
كفاءة إسكات الجين هو متغير جدا ويعتمد على عدد من العوامل بما في ذلك نص والبروتين بدوره على أسعار والرنا المزدوج الجديلة كفاءة امتصاص الخلايا والأعضاء. لقد وجدنا أن إسكات يبدأ في وقت مبكر ك 1 حقن آخر النهار ويمكن أن تصل إلى 6 أيام بعد الحقن. استخدام وسائل الكشف عن نص والبروتين مثل PC…
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Megascript
kit
Ambion
for dsRNA synthesis; T7 RNA polymerase-mediated in vitro transcription reaction
RNeasy
Qiagen
For dsRNA purification
dsRNA
should be quantified and adjusted to 3 μg/ μL in water