Clathrin بوساطة الإلتقام يعتمد على البروتينات التي تنسق محول اختيار البضائع وclathrin التجمع معطف. نحن هنا وصف لدراسة الإجراءات محول clathrin التفاعل الجسدي والتصوير الخلية الحية باستخدام النهج نموذجا الخميرة البروتين محول التقامي Sla1p.
ومسارا رئيسيا التقامي يبدأ مع تشكيل clathrin الحويصلات المغلفة (CCVs) أن نقل البضائع من سطح الخلية لالإندوسومات 1-6. وتتميز CCVs بواسطة شعرية متعددة السطوح من المعاطف التي clathrin غشاء الحويصلة وبمثابة سقالة الميكانيكية. ويتم تجميع المعاطف Clathrin خلال تشكيل حويصلة من triskelia clathrin الفردية ، النموذج القابل للذوبان من clathrin تتألف من ثلاثة الثقيلة وثلاث مفارز ضوء سلسلة 7،8. لأن triskelion لا يملك القدرة على ربط الغشاء مباشرة ، clathrin ملزم محولات حاسمة لربط شعرية تشكيل clathrin إلى غشاء من خلال الجمعيات مع الدهون و / أو بروتينات غشاء 9. مهايئات عبر الغشاء أيضا شحن حزمة البروتين ، مثل المستقبلات ، ويمكن أن تتفاعل مع بعضها البعض ومع المكونات الأخرى لتشكيل لجنة تنسيق المفردات آلات 9.
وقد وصفت أكثر من عشرين محولات clathrin ، وتشارك في عدة بوساطة الإلتقام clathrin وغيرها توطين لشبكة جولجي أو عبر الإندوسومات 9. باستثناء HIP1R (Sla2p الخميرة) ، وكلها معروفة clathrin محولات ربط المحطة المجال N – – المروحة من السلسلة الثقيلة clathrin 9. محولات Clathrin هي بروتينات وحدات تتألف من المجالات مطوية متصلة بواسطة linkers مرنة غير منظم. رابط داخل هذه المناطق ، زخارف ملزمة قصيرة التوسط التفاعلات مع المجال N – محطة clathrin أو المكونات الأخرى لتشكيل حويصلة آلات 9. وقد تم تحديد متميزتين clathrin ملزم الزخارف : clathrin مربع وعلى W – 9 مربع. وقد عرفت أصلا الآراء clathrin علبة تسلسل كما L [L / I] [D / E / N] [L / F] [D / E] (10) ولكن تم اكتشافها في وقت لاحق المتغيرات 11. وW – مربع يتفق مع تسلسل PWxxW (حيث x هو أي مخلفات).
وحددت أصلا Sla1p (القاتل الاصطناعية مع ملزم أكتين 1 – البروتين) باعتبارها بروتين يرتبط أكتين وضروري لبنية الهيكل الخلوي أكتين العادي وديناميكية في مواقع التقامي في خلايا الخميرة 12. Sla1p يربط أيضا إشارة NPFxD التقامي والفرز هو أمر حاسم لالإلتقام من البضائع التي تحمل إشارة NPFxD 13،14. ووصف في الآونة الأخيرة ، وقد تجلى Sla1p ربط clathrin من خلال فكرة مماثلة لصندوق clathrin ، LLDLQ ، متغير clathrin علبة (VCB) ، وتعمل كما هو محول an clathrin التقامي 15. بالإضافة إلى ذلك ، أصبحت علامة Sla1p المستخدمة على نطاق واسع للمعطف التقامي في دراسات الخلايا الحية المجهري مضان 16. هنا نستخدم Sla1p نموذجا لوصف النهج للدراسات التفاعل محول clathrin. ونحن نركز على العيش الخلية المجهر مضان ، GST – المنسدلة ، وأساليب التعاون مناعي.
Clathrin الحويصلات المغلفة (CCV) المشاركة في الإلتقام والنقل من الشبكة عبر وغولجي الإندوسومات ، مسارات الحفظ التي تعتبر أساسية في بيولوجيا الخلية حقيقية النواة. النهج المبينة في هذه الورقة أساليب مفيدة لدراسة الآليات الجزيئية المسؤولة عن تشكيل لجنة تنسيق المفردات ،…
The authors have nothing to disclose.
معتمد من قبل مدافع الجسور جبهة الخلاص الوطني للزمالة الدكتوراة. ويدعم المجهر المستخدمة في هذا العمل في جزء من شبكة التصوير منح مجهر البنية التحتية الأساسية من جامعة ولاية كولورادو. ويدعم العمل على محولات clathrin في المختبر من قبل المؤلف ليالي CSU البدء الصناديق وجائزة جمعية القلب الاميركية 09SDG2280525 إلى SD
Material | Company |
---|---|
QuickChange-XL site-directed mutagenesis kit | Stratagene |
protease inhibitor cocktail | Sigma |