Summary
הלב heterotopic העכבר מודל השתלת הוכח על ידי חוקרים רבים להיות שיטה חשובה לחקר המנגנונים של דחייה התגובה החיסונית. עם זאת, טכניקות מעורבות עדיין מאתגרת. על ידי שינוי שיטות סטנדרטיות יש לנו הצלחה עם יותר מ 1000 השתלות.
Abstract
השתלת הלב heterotopic העכבר כבר בשימוש נרחב מאז הונהגה על ידי בני הזוג. קורי וראסל בשנת 1973. זה חשוב במיוחד ללימוד דחייה התגובה החיסונית עכשיו מהונדס חדש יותר נוקאאוט בעכברים גנים זמינים, וכן מספר גדול של ריאגנטים אימונולוגית פותחו. המודל השתלת לב הינה מחמירה פחות מודלים השתלת עור, אם כי מאתגר יותר מבחינה טכנית. פיתחנו טכניקה שונה ו סיימו מעל 1000 מקרים מוצלח של השתלת לב heterotopic בעכברים. כשאתה מבצע השקה של האאורטה העולה ואת אבי העורקים בבטן, שני התפרים נשארים ממוקמים על apexes הפרוקסימלית ומ הדיסטלי של האאורטה הנמען בטן עם האאורטה העולה של התורם, ולאחר מכן באמצעות 11-0 תפר עבור השקה בצד שני של האאורטה עם התפרים המשך. התפרים נשארים לעשות השקה קל 11-0 הוא גודל תפר אידיאלי כדי למנוע דימום פקקת.
כשאתה מבצע השקה של עורק הריאה ונחות הווריד הנבוב, שני תפרים עשויים להישאר בפסגת הפרוקסימלית ומ לשיא דיסטלי של הנבוב נחות הנמען של קאווה עם עורק הריאה של התורם. הקיר השמאלי של נחות הווריד הנבוב ו עורק הריאה של התורם סגורה עם תפרים המשך הפנימי של הווריד הנבוב נחות לאחר, אחד קשר עם השהייה לשיא הפרוקסימלי תפר את הקיר הימני של נחות הווריד הנבוב ו עורק הריאה של התורם סגורות עם התפרים המשך מחוץ למערה הנבוב נחות עם 10-0 התפרים. שיטה זו היא קלה יותר לביצוע כי השקה נעשית רק על צד אחד של נחות הווריד הנבוב ו 10-0 התפרים הוא בגודל הנכון, כדי למנוע דימום פקקת. במאמר זה, אנו מספקים פרטים של הטכניקה כדי להשלים את הווידאו.
Protocol
התורם הכנה קציר לב:
- העכבר הוא הרדים עם זריקה intraperitoneal של פרקדן pentobarbital והניחה על שדה הניתוח.
- חתך ארוך בבטן קו האמצע הוא עשה. תכולת הבטן הם חזר עם גזה שמאלה על מנת לחשוף את אבי העורקים בבטן הנחות הווריד הנבוב.
- 1 מ"ל של הפרין (10u/ml) מוזרק לתוך הווריד הנבוב נחות עבור heparinization.
- פתיחת בית החזה נעשית: בצלעות מחולקות משני צידי עמוד השדרה ואת בית החזה הקדמי הוא הניף מעלה כדי לחשוף את הלב.
- נחות הווריד הנבוב, הממונה הווריד הנבוב ו וריד azygous הם ligated עם משי 6-0 וחילקו עדיפים על חיבורי אותיות.
- אבי העורקים ועורק הריאה עולים מופרדות וחילקו ככל distally האפשרי.
- הוורידים הם ריאתי ligated וחילקו דיסטלי על הקשר.
- הלב הוא perfused עם פתרון 4 מעלות צלסיוס מלוחים.
- הלב הוא לאחסן תמיסת מלח קרה כקרח.
נמען הכנה להשתלות
- העכבר הוא הרדים עם זריקה intraperitoneal של פרקדן pentobarbital והניחה על שדה הניתוח.
- חתך ארוך בבטן קו האמצע הוא עשה. תכולת הבטן הם חזר בו מחוץ הבטן עם גזה לחשוף את אבי העורקים בבטן הנחות הווריד הנבוב.
- הסניפים של אבי העורקים בבטן הנחות הווריד הנבוב חשופים ligated עם 10-0 התפרים.
- חיבורי אותיות הפרוקסימלית ומ דיסטלי ממוקמים סביב האאורטה ונחות הווריד הנבוב בהתאמה.
- Venotomy הוא עשה הנחות הווריד הנבוב של הנמען עם מחט מד 30. פתיחת הוארך אז לאורך של אבי העורקים שווה ריאתי של התורם עם מיקרו מספריים.
- Aortotomy עשוי באבי העורקים בבטן של הנמען עם מחט מד 30.
- אבי העורקים בבטן נפתחה הנחות הווריד הנבוב הם מושקים עם תמיסת מלח.
- הלב של התורם ממוקם בצד השמאלי של הבטן של הנמען מכוסה גזה.
- התפרים נשארים ממוקמים על apexes הפרוקסימלית ומ הדיסטלי של האאורטה הנמען בטן עם האאורטה העולה של התורם.
- השקה של הצד הימני של אבי העורקים בבטן של הנמען אבי העורקים העולה של התורם הושלמו עם התפרים המשך.
- שני התפרים נשארים הם לראשונה בפסגת הפרוקסימלית ומ לשיא דיסטלי של הנבוב נחות של הנמען קאווה עם עורק הריאה של התורם על השקה של עורק הריאה של התורם הנבוב נחות של הנמען קאווה.
- הקיר השמאלי של נחות הווריד הנבוב ו עורק הריאה של התורם סגורה עם תפרים המשך בתוך הווריד הנבוב נחותים.
- אחרי קשר אחד עם תפר לשיא הפרוקסימלי להישאר, הקיר הימני של נחות הווריד הנבוב ו עורק הריאה של התורם סגורים עם התפרים המשך מחוץ למערה הנבוב נחותים.
- הלב של התורם הוא התהפך לצד ימין של הבטן של הנמען. הקיר הימני של אבי העורקים בבטן של הנמען השקה אבי העורקים העולה של התורם סגורים להמשיך עם תפרים.
- לאחר השקה מורכב, המיתר דיסטלי מוסר לבדוק את מדמם השקה.
- אם יש מעט דימום לא מן השקה, ליגטורה הפרוקסימלית מוסר. הלב של התורם מתמלא בדם באופן מיידי; את הצבע של הלב הופך אדום והוא מתחיל להכות שוב.
- המעיים הם חזרו הבטן, וזה סגור עם 6-0 תפרים רציפה.
- העכבר מקבל מושם על אזור חם. לאחר שעה הנמען משחזרת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
תוצאות
ביצענו בהצלחה יותר מ 1000 מקרים של השתלת לב heterotopic בעכברים מושגת על שיעור 90% הצלחה זנים שונים של עכברים, לרבות סוג בר, מהונדס ו נוקאאוט בעכברים גנים.
דיון
מאז בני הזוג. קורי וראסל הציג השתלת לב heterotopic בעכברים בשנת 1973, מודל זה הוכיח להיות יקר במיוחד ללימוד תגובת דחייה של מערכת החיסון ופיתוח אסטרטגיות מדכאות חיסון הרומן. מודל זה יכול לשמש באופן רחב יותר כעת, כי הופעתם של מהונדס רבים נוקאאוט בעכברים גנים סיפקה דרכים חדשות לחקור את המנגנונים של דחייה / סובלנות. המודל vascularized השתלת הלב עשוי להיות רלוונטי יותר השתלת איברים קליני מוצק. למרות השתלות עור או השתלת תת עורית של לבבות בילוד מבחינה טכנית פשוטה, neovascularization הנדרש להישרדות השתל בהשתלות אלה רגישים במיוחד התגובות allogenic. לכן, העור ואת תת עורי לשמוע השתלות יכול להיות שימושי עבור בדיקה קפדנית של סובלנות, אבל לא לפיתוח או אופטימיזציה של פרוטוקולים וגורם לדיכוי המערכת החיסונית או סובלנות.
שינינו את טכניקת השתלת לב וכלי דם במספר דרכים כדי לשפר את היעילות ואת שיעורי ההצלחה:
- הלב של התורם צריך להיות מושקים עם תמיסת מלח מן האאורטה עולה עד לב להיות בצבע בהיר לאחר הקציר.
- הסניפים של אבי העורקים בבטן נחות הווריד הנבוב של הנמען צריך להיות ligated עם 10-0 התפרים, מניעת דימום במהלך המבצע פקקת לאחר הניתוח.
- לומן של אבי העורקים בבטן הנחות הווריד הנבוב של הנמען צריך להיות מושקים עם תמיסת מלח עד שלא נותר דם. זה יכול למנוע קרישי דם לאחר הניתוח.
- בועות האוויר בתוך הכלים יש להימנע בעת ביצוע anastomoses.
- Anastomoses עורק צריך להשתמש 11-0 התפרים, כדי למנוע דימום anastomoses.
- החתך של אבי העורקים בבטן נחות הווריד הנבוב של הנמען צריך להיות שווה פתיחת עורק הריאה ואבי העורקים עולה הלב של התורם.
- חשוב יש שדה ההפעלה ברורה ורחבה, ולכן להשתמש 6-0 תפר במקום מלחציים זמנית לחסום את העורקים ואת הווריד הנבוב נחותים.
מסקנה
למרות הטכניקה של השתלת לב heterotopic בעכברים הוא מאתגר מבחינה טכנית, היא טכניקה חשובה לחקר alloresponses. עיסוק שינויים טכניים גרמו שיעור מוצלח של מעל 90% במעבדה שלנו. אנו מאמינים כי הווידאו ואת כתב היד המלווה יסייע להפחית את עקומת הלמידה עבור מעבדות המבקשים להשתמש בטכניקה זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
References
- Corry, R. obert J., Winn, H. enry J., Russell, P. aul S. Primarily vascularized allografts of heart in mice. Transplantation. 16, 343-350 (1973).
