Heterotope Herztransplantation in Mäuse

Summary

Die Maus heterotope Herztransplantation Modell wurde von vielen Forschern nachgewiesen worden, eine wichtige Methode zur Untersuchung von Mechanismen der Abstoßung und Immunantwort werden. Allerdings sind die eingesetzten Techniken erforderlich noch eine Herausforderung. Durch die Modifikation Standard-Techniken haben wir Erfolg mit mehr als 1000 Transplantationen.

Abstract

Die Maus heterotope Herztransplantation wurde in großem Umfang, da es von den Doktoren eingeführt wurde. Corry und Russell 1973. Es ist besonders wertvoll für das Studium Ablehnung und Immunantwort jetzt, dass neuere transgenen und Knockout-Mäuse zur Verfügung stehen, und eine große Anzahl von immunologischen Reagenzien entwickelt worden. Die Herztransplantation Modell ist weniger streng als die Hauttransplantat Modelle, obwohl technisch immer anspruchsvoller. Wir haben eine modifizierte Technik entwickelt und mehr als 1000 erfolgreichen Fällen der heterotopen Herztransplantation in Mäusen abgeschlossen. Bei der Anastomose der Aorta ascendens und abdominalen Aorta, sind zwei Haltefäden am proximalen und distalen Spitzen des Empfängers Bauchaorta mit dem Spender s aufsteigenden Aorta gelegt, dann mit 11-0 Naht für die Anastomose auf beiden Seiten der Aorta mit anhaltenden Nähten. Die Haltefäden machen die Anastomose einfacher und 11-0 ist ein idealer Naht Größe zu Blutungen und Thrombosen zu vermeiden.

Bei der Anastomose Lungenarterie und untere Hohlvene, sind zwei Haltefäden am proximalen und distalen Spitze Spitze des Empfängers s untere Hohlvene mit dem Spender s Lungenarterie gemacht. Die linke Wand der Vena cava inferior und Spender s Lungenarterie ist mit anhaltenden Nähte in der Innenseite der unteren Hohlvene geschlossen, nachdem, Naht einen Knoten mit dem proximalen Spitze bleiben der rechten Wand der Vena cava inferior und der Spender s Lungenarterie sind mit anhaltenden Nähte außerhalb der Vena Höhle mit 10-0 Nähten verschlossen. Diese Methode ist einfacher durchzuführen, da Anastomose nur auf der einen Seite der unteren Hohlvene und 10-0 Fäden gemacht wird, ist die richtige Größe zu Blutungen und Thrombosen zu vermeiden. In diesem Artikel geben wir Details der Technik, um das Video zu ergänzen.

Protocol

Donor Vorbereitung und Herz Harvest:

1. Die Maus ist betäubt mit einer intraperitonealen Injektion von Pentobarbital und legte sich rücklings auf den operativen Bereich.
2. Eine lange Mittellinie Bauchschnitt gemacht wird. Bauch-Inhalte sind mit Gaze nach links zurückgezogen, um die Bauchaorta und die untere Hohlvene aussetzen.
3. 1 ml Heparin (10u/ml) wird in die untere Hohlvene für Heparinisierung injiziert.
4. Die Thorakotomie gemacht wird: die Rippen auf beiden Seiten der Wirbelsäule gespalten und der vorderen Brustwand ist gehebelt bis das Herz aussetzen.
5. Die untere Hohlvene, die Vena cava superior und azygous Vene sind mit 6-0 Seide unterbunden und durchtrennt überlegen die Ligaturen.
6. Die aufsteigende Aorta und Lungenarterie sind getrennt und so weit distal wie möglich aufgeteilt.
7. Die Pulmonalvenen sind ligiert und durchtrennt distal der Bande.
8. Das Herz ist mit 4 C ^o Kochsalzlösung perfundiert.
9. Das Herz ist in eiskalten Salzlösung gespeichert.

Empfänger Vorbereitung und Transplantation

1. Die Maus ist betäubt mit einer intraperitonealen Injektion von Pentobarbital und legte sich rücklings auf den operativen Bereich.
2. Eine lange Mittellinie Bauchschnitt gemacht wird. Bauch-Inhalte liegen außerhalb des Bauches mit Gaze, die Bauchaorta und die untere Hohlvene freizulegen.
3. Die Äste der abdominalen Aorta und der Vena cava inferior ausgesetzt sind und ligiert mit 10-0 Nähten.
4. Die proximalen und distalen Ligaturen sind rund um die Aorta und untere Hohlvene plaziert.
5. Die Venotomie ist in die untere Hohlvene des Empfängers mit einem 30-Gauge-Nadel gemacht. Die Eröffnung ist dann zu einer Länge von gleich des Spenders pulmonalen Aorta mit Mikro-Schere erweitert.
6. Die Aortotomie ist in der abdominalen Aorta des Empfängers mit einem 30-Gauge-Nadel gemacht.
7. Das eröffnet Bauchaorta und die untere Hohlvene mit Kochsalzlösung gespült.
8. Der Spender ist das Herz auf der linken Seite des Empfängers Bauch gelegt und mit Gaze abgedeckt.
9. Der Aufenthalt Nähte an den proximalen und distalen Spitzen des Empfängers Bauchaorta mit der Spenderin aufsteigenden Aorta platziert.
10. Die Anastomose der rechten Seite des Empfängers Bauchaorta und des Spenders aufsteigenden Aorta sind mit anhaltenden Nähten abgeschlossen.
11. Zwei Haltefäden werden zuerst an den proximalen und distalen Spitze Spitze des Empfängers untere Hohlvene mit der Spenderin Lungenarterie für die Anastomose des Spenders Lungenarterie und des Empfängers untere Hohlvene gemacht.
12. Die linke Wand der Vena cava inferior und Spender Lungenarterie ist mit anhaltenden Nähte in der Innenseite der unteren Hohlvene geschlossen.
13. Nach einem Knoten mit dem proximalen Spitze Standnaht, sind die rechte Wand der Vena cava inferior und des Spenders Lungenarterie mit anhaltenden Nähte außerhalb der Vena Höhle geschlossen.
14. Der Spender ist das Herz auf die rechte Seite des Empfängers Bauch gedreht. Die rechte Wand des Empfängers Bauchaorta und des Spenders aufsteigenden Aorta Anastomose mit weiterhin Nähten verschlossen.
15. Nach Anastomose vorgenommen wird, wird die distale Ligatur entfernt, um die Blutung aus der Anastomose zu überprüfen.
16. Wenn es wenig bis gar keine Blutungen aus der Anastomose wird die proximale Ligatur entfernt. Der Spender das Herz mit Blut füllt sofort, die Farbe des Herzens wird rot, und es beginnt wieder zu schlagen.
17. Der Darm ist auf den Bauch, die mit 6-0 kontinuierlichen Nähten verschlossen wird zurückgegeben.
18. Der Empfänger der Maus auf einen warmen Raum gebracht. Nach einer Stunde den Empfänger erholt.

Discussion

Ergebnisse

Wir haben erfolgreich mehr als 1000 Fälle von heterotopen Herztransplantation in Mäusen durchgeführt und erreicht über 90% Erfolgsquote in verschiedene Stämme von Mäusen, einschließlich Wildtyp transgenen und Knockout-Mäusen.

Diskussion

Da Drs. Corry und Russell eingeführt heterotope Herztransplantation an Mäusen in 1973, hat dieses Modell erweist sich als besonders wertvoll für das Studium Immunabwehr Reaktion und die Entwicklung neuartiger Immunsuppressiva Strategien. Dieses Modell kann im weiteren Sinne nun verwendet werden, weil die Entstehung zahlreicher transgenen und Knockout-Mäusen neue Wege, um die Mechanismen der Ablehnung / Toleranz-Studie zur Verfügung gestellt hat. Die vaskularisierte Herztransplantation Modell kann mehr relevant für die klinische Organtransplantation. Obwohl Hauttransplantationen oder subkutane Transplantate von neonatalen Herzen technisch einfacher werden, sind die Gefäßneubildung, die für Transplantate in dieser Transplantationen erforderlich ist besonders empfindlich gegenüber allogenen Antworten. So hören Haut und des subkutanen Transplantation kann für eine strenge Prüfung der Toleranz, nicht aber für die Entwicklung oder Optimierung von Immunsuppressiva oder Toleranz zu induzieren Protokolle nützlich.

Wir veränderten die vaskuläre Herztransplantation Technik in mehrfacher Hinsicht auf Effizienz und Verbesserung der Erfolgsquote bei:

1. Der Spender das Herz sollte mit Kochsalzlösung aus der aufsteigenden Aorta bewässert werden, bis das Herz Lichtfarbe nach der Ernte zu werden.
2. Die Äste der abdominalen Aorta und untere Hohlvene des Empfängers sollte mit 10-0 Fäden ligiert werden, verhindert Blutungen während der Operation und Thrombose nach der Operation.
3. Das Lumen der Aorta und der Vena cava inferior des Empfängers sollte mit Kochsalzlösung gespült werden, bis kein Blut mehr übrig ist. Dies kann eine Thrombose nach der Operation zu verhindern.
4. Luftblasen im Inneren der Gefäße sollten vermieden werden, wenn was Anastomosen werden.
5. Die Arterie anastomosiert sollten 11-0 Fäden, um zu verhindern, Blutungen aus dem Anastomosen.
6. Der Schnitt der abdominalen Aorta und untere Hohlvene des Empfängers sollte gleich zur Eröffnung der Lungenarterie und Aorta ascendens des Spenders Herz.
7. Es ist wichtig, eine klare und weite Betätigungsfeld haben, verwenden daher 6-0 Naht anstelle der Klemmen vorübergehend verschließen die Aorta und Vena cava inferior.

Abschluss

Obwohl die Technik der heterotopen Herztransplantation in Mäusen technisch anspruchsvoll ist, ist es eine wichtige Technik zur Untersuchung alloresponses. Praxis und technische Änderungen wurden in einer Erfolgsquote von über 90% in unserem Labor führte. Wir glauben, dass das Video und die zugehörigen Manuskript wird helfen, die Lernkurve für Labors, die diese Technik nutzen wollen verringern.