Summary

पूर्व ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की Bryostatin 1/Ionomycin का मतलब द्वारा vivo विस्तार और आम गामा चेन साइटोकिन्स निरूपण

Published: January 14, 2011
doi:

Summary

के लिए एक कुशल प्रोटोकॉल<em> पूर्व vivo</em> ट्यूमर draining लिम्फ नोड्स या अन्य ट्यूमर असर मेजबान के माध्यमिक lymphoid ऊतकों से ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की विस्तार वर्णित है. इस प्रोटोकॉल चुनिंदा ट्यूमर स्तन कैंसर के दत्तक immunotherapy में उपयोग के लिए विशेष टी कोशिकाओं फैलता है.

Abstract

यह बताया गया है कि स्तन कैंसर के रोगियों, उनके ट्यूमर 1,2 के खिलाफ पहले से मौजूद प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है. हालांकि, इस तरह के प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए या स्तन कैंसर के विकास पुनरावृत्ति के खिलाफ पूरी सुरक्षा प्रदान करने में विफल. ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की आवृत्ति को बढ़ाने के द्वारा इस समस्या पर काबू पाने के लिए, दत्तक immunotherapy के नियोजित किया गया है. प्रोटोकॉल की एक किस्म ट्यूमर विशेष टी कोशिकाओं के विस्तार के लिए इस्तेमाल किया गया है. इन प्रोटोकॉल, तथापि, प्रतिजन विशेष टी कोशिकाओं की सक्रियता के लिए ट्यूमर प्रतिजनों पूर्व vivo का उपयोग करने के लिए प्रतिबंधित कर रहे हैं. अभी हाल ही में, आईएल -2, आईएल -7, आईएल 15, और आईएल-21 के रूप में आम गामा श्रृंखला साइटोकिन्स विरोधी ट्यूमर प्रतिरक्षा 3 प्रतिक्रियाओं की वृद्धि के लिए किया गया है अकेले या संयोजन में उपयोग किया. हालांकि, यह स्पष्ट नहीं है सूत्रीकरण ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं के विस्तार के लिए सबसे अच्छा क्या काम करेगा. यहाँ हम चयनात्मक सक्रियण और FVBN202 HER-2/neu स्तन कैंसर के दत्तक टी सेल थेरेपी में उपयोग के लिए सकारात्मक स्तन कार्सिनोमा के ट्रांसजेनिक माउस मॉडल से ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं के विस्तार के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं. bryostatin-1/ionomycin (बी / मैं) और आईएल -2 के साथ 16 घंटे के लिए ट्यूमर प्रतिजनों के अभाव में टी कोशिकाओं की सक्रियता प्रोटोकॉल शामिल हैं. बी / मैं सक्रियण intracellular संकेतों mimics कि प्रोटीन kinase सी गतिविधि और intracellular कैल्शियम में वृद्धि, क्रमशः 4 टी सेल सक्रियण में परिणाम . इस प्रोटोकॉल विशेष रूप से ट्यूमर विशेष टी कोशिकाओं को सक्रिय है, जबकि अप्रासंगिक टी कोशिकाओं की मौत हो गई. बी / मैं सक्रिय टी कोशिकाओं आईएल-7 और आईएल -15 के साथ 24 घंटे के लिए सुसंस्कृत हैं और फिर आईएल-2 के साथ स्पंदित है. 24 घंटे के बाद, टी कोशिकाओं को धोया हैं, विभाजन, और के साथ सुसंस्कृत आईएल -7 + अतिरिक्त 4 दिनों के लिए आईएल-15. पूर्व vivo विस्तार टी कोशिकाओं के ट्यूमर विशिष्टता और विरोधी ट्यूमर प्रभावकारिता निर्धारित किया जाता है.

Protocol

1. 5 लिम्फोसाइटों के अलगाव पृथक draining ट्यूमर लिम्फ नोड्स या ट्यूमर असर FVBN202 ट्रांसजेनिक चूहों से spleens और RPMI1640 बर्फ ठंड में एकल कक्ष निलंबन तैयार 10% FBS के साथ पूरक. Polystyrene ट्यूब की तुलना में अधिक से अधिक टी सेल…

Discussion

ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की विरोधी ट्यूमर effector समारोह के साथ चयनात्मक विस्तार प्रस्तावित प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए बी के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है / मैं सक्रियण और गामा श्रृंखला आईएल -2…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

यह काम एनआईएच R01 CA104757 अनुदान (महाराष्ट्र Manjili) द्वारा समर्थित किया गया. हम कृतज्ञता VCU Massey कैंसर केंद्र के समर्थन और कैंसर अनुसंधान के लिए राष्ट्रमंडल फाउंडेशन को स्वीकार करते हैं.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Bryostatin 1   Sigma B7431-10ug  
Ionomycin   Calbiochem 407950  
Mouse IL-7   PeproTech 217-17  
Mouse IL-15   PeproTech 210-15  
Human IL-2   PeproTech 200-02  
RPMI1640   Invitrogen 11875  
FBS   Gemini 100-106  
Penicillin/Streptomycin   Cellgro 30-002-CI  
L- glutamine   Invitrogen 25030081  
β- mercaptoethanol   Sigma M7522  
anti-CD16/32 antibody   Biolegend 101302  
Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit   BD Pharmingen 556547  
FITC-CD4   Biolegend 100406  
PE-CD8   Biolegend 100708  
anti-c-Erb2/c–Neu   Calbiochem OP16  
PE- anti mouse IgG   Biolegend 405307  
formaldehyde   Polysciences 04018  
Hemocytometer   Hycor 87144  
Light microscope   VWR V200073  
Mouse IFN-γ ELISA set   BD Pharmingen 555138  
Cell culture flasks   Greiner 658175  

References

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Kmieciak, M., Toor, A., Graham, L., Bear, H. D., Manjili, M. H. Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation. J. Vis. Exp. (47), e2381, doi:10.3791/2381 (2011).

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