पूर्व ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की Bryostatin 1/Ionomycin का मतलब द्वारा vivo विस्तार और आम गामा चेन साइटोकिन्स निरूपण
Summary
के लिए एक कुशल प्रोटोकॉल<em> पूर्व vivo</em> ट्यूमर draining लिम्फ नोड्स या अन्य ट्यूमर असर मेजबान के माध्यमिक lymphoid ऊतकों से ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की विस्तार वर्णित है. इस प्रोटोकॉल चुनिंदा ट्यूमर स्तन कैंसर के दत्तक immunotherapy में उपयोग के लिए विशेष टी कोशिकाओं फैलता है.
Abstract
यह बताया गया है कि स्तन कैंसर के रोगियों, उनके ट्यूमर 1,2 के खिलाफ पहले से मौजूद प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है. हालांकि, इस तरह के प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए या स्तन कैंसर के विकास पुनरावृत्ति के खिलाफ पूरी सुरक्षा प्रदान करने में विफल. ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की आवृत्ति को बढ़ाने के द्वारा इस समस्या पर काबू पाने के लिए, दत्तक immunotherapy के नियोजित किया गया है. प्रोटोकॉल की एक किस्म ट्यूमर विशेष टी कोशिकाओं के विस्तार के लिए इस्तेमाल किया गया है. इन प्रोटोकॉल, तथापि, प्रतिजन विशेष टी कोशिकाओं की सक्रियता के लिए ट्यूमर प्रतिजनों पूर्व vivo का उपयोग करने के लिए प्रतिबंधित कर रहे हैं. अभी हाल ही में, आईएल -2, आईएल -7, आईएल 15, और आईएल-21 के रूप में आम गामा श्रृंखला साइटोकिन्स विरोधी ट्यूमर प्रतिरक्षा 3 प्रतिक्रियाओं की वृद्धि के लिए किया गया है अकेले या संयोजन में उपयोग किया. हालांकि, यह स्पष्ट नहीं है सूत्रीकरण ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं के विस्तार के लिए सबसे अच्छा क्या काम करेगा. यहाँ हम चयनात्मक सक्रियण और FVBN202 HER-2/neu स्तन कैंसर के दत्तक टी सेल थेरेपी में उपयोग के लिए सकारात्मक स्तन कार्सिनोमा के ट्रांसजेनिक माउस मॉडल से ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं के विस्तार के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं. bryostatin-1/ionomycin (बी / मैं) और आईएल -2 के साथ 16 घंटे के लिए ट्यूमर प्रतिजनों के अभाव में टी कोशिकाओं की सक्रियता प्रोटोकॉल शामिल हैं. बी / मैं सक्रियण intracellular संकेतों mimics कि प्रोटीन kinase सी गतिविधि और intracellular कैल्शियम में वृद्धि, क्रमशः 4 टी सेल सक्रियण में परिणाम . इस प्रोटोकॉल विशेष रूप से ट्यूमर विशेष टी कोशिकाओं को सक्रिय है, जबकि अप्रासंगिक टी कोशिकाओं की मौत हो गई. बी / मैं सक्रिय टी कोशिकाओं आईएल-7 और आईएल -15 के साथ 24 घंटे के लिए सुसंस्कृत हैं और फिर आईएल-2 के साथ स्पंदित है. 24 घंटे के बाद, टी कोशिकाओं को धोया हैं, विभाजन, और के साथ सुसंस्कृत आईएल -7 + अतिरिक्त 4 दिनों के लिए आईएल-15. पूर्व vivo विस्तार टी कोशिकाओं के ट्यूमर विशिष्टता और विरोधी ट्यूमर प्रभावकारिता निर्धारित किया जाता है.
Protocol
Discussion
ट्यूमर प्रतिक्रियाशील टी कोशिकाओं की विरोधी ट्यूमर effector समारोह के साथ चयनात्मक विस्तार प्रस्तावित प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए बी के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है / मैं सक्रियण और गामा श्रृंखला आईएल -2…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम एनआईएच R01 CA104757 अनुदान (महाराष्ट्र Manjili) द्वारा समर्थित किया गया. हम कृतज्ञता VCU Massey कैंसर केंद्र के समर्थन और कैंसर अनुसंधान के लिए राष्ट्रमंडल फाउंडेशन को स्वीकार करते हैं.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bryostatin 1 | Sigma | B7431-10ug | ||
| Ionomycin | Calbiochem | 407950 | ||
| Mouse IL-7 | PeproTech | 217-17 | ||
| Mouse IL-15 | PeproTech | 210-15 | ||
| Human IL-2 | PeproTech | 200-02 | ||
| RPMI1640 | Invitrogen | 11875 | ||
| FBS | Gemini | 100-106 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Cellgro | 30-002-CI | ||
| L- glutamine | Invitrogen | 25030081 | ||
| β- mercaptoethanol | Sigma | M7522 | ||
| anti-CD16/32 antibody | Biolegend | 101302 | ||
| Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit | BD Pharmingen | 556547 | ||
| FITC-CD4 | Biolegend | 100406 | ||
| PE-CD8 | Biolegend | 100708 | ||
| anti-c-Erb2/c–Neu | Calbiochem | OP16 | ||
| PE- anti mouse IgG | Biolegend | 405307 | ||
| formaldehyde | Polysciences | 04018 | ||
| Hemocytometer | Hycor | 87144 | ||
| Light microscope | VWR | V200073 | ||
| Mouse IFN-γ ELISA set | BD Pharmingen | 555138 | ||
| Cell culture flasks | Greiner | 658175 |
References
- Goodell, V., Waisman, J., Salazar, L. G., de la Rosa, C., Link, J., Coveler, A. L., Childs, J. S., Fintak, P. A., Higgins, D. M., Disis, M. L. Level of HER-2/neu protein expression in breast cancer may affect the development of endogenous HER-2/neu-specific immunity. Mol Cancer Ther. 7, 449-454 (2008).
- Disis, M. L., Knutson, K. L., Schiffman, K., Rinn, K., McNeel, D. G. Pre-existent immunity to the HER-2/neu oncogenic protein in patients with HER-2/neu overexpressing breast and ovarian cancer. Breast Cancer Res Treat. 62, 245-252 (2000).
- Liu, S., Riley, J., Rosenberg, S., Parkhurst, M. Comparison of common gamma-chain cytokines, interleukin-2, interleukin-7, and interleukin-15 for the in vitro generation of human tumor-reactive T lymphocytes for adoptive cell transfer therapy. J. Immunother. 29, 284-293 (2006).
- Bear, H. D., Roberts, J., Cornell, D., Tombes, M. B., Kyle, B. Adoptive immunotherapy of cancer with pharmacologically activated lymph node lymphocytes: a pilot clinical trial. Cancer Immunol Immunother. 5, 269-274 (2001).
- Morales, J. K., Kmieciak, M., Graham, L., Feldmesser, M., Bear, H. D., Manjili, M. H. Adoptive transfer of HER2/neu-specific T cells expanded with alternating gamma chain cytokines mediate tumor regression when combined with the depletion of myeloid-derived suppressor cells. Cancer Immunol Immunother. 58, 941-953 (2009).
- Cha, E., Graham, L., Manjili, M. H., Bear, H. D., Guy, C. T., Webster, M. A., Schaller, M., Parsons, T. J., Cardiff, R. D. IL-7 + IL-15 are superior to IL-2 for the ex vivo expansion of 4T1 mammary carcinoma-specific T cells with greater efficacy against tumors in vivo. Breast Cancer Res Treat. 89, 10578-10582 (2009).
- Kmieciak, M., Morales, J. K., Morales, J., Bolesta, E., Grimes, M., Manjili, M. H. Danger signals and nonself entity of tumor antigen are both required for eliciting effective immune responses against HER-2/neu positive mammary carcinoma: implications for vaccine design. Cancer Immunol Immunother. 57, 1391-1398 (2008).
- Stern, J. B., Smith, K. A. Interleukin-2 induction of T-cell G1 progression and c-myb expression. Science. 233, 203-206 (1986).
- Kittipatarin, C., Khaled, A. R. ex vivo expansion of memory CD8 T cells from lymph nodes or spleen through in vitro culture with interleukin-7. J Immunol Methods. 344, 45-57 (2009).
- Kokaji, A. I., Hockley, D. L., Kane, K. P. IL-15 transpresentation augments CD8+ T cell activation and is required for optimal recall responses by central memory CD8+ T cells. J Immunol. 180, 4391-4401 (2008).
- Le, H. K., Graham, L., Miller, C. H., Kmieciak, M., Manjili, M. H., Bear, H. D. Incubation of antigen-sensitized T lymphocytes activated with bryostatin 1 + ionomycin in IL-7 + IL-15 increases yield of cells capable of inducing regression of melanoma metastases compared to culture in IL-2. Cancer Immunol Immunother. 58, 1565-1576 (2009).
