Ett effektivt protokoll för<em> Ex vivo</em> Utbyggnad av tumörreaktiva T-celler från tumören dränerande lymfkörtlar eller andra sekundära lymfoida vävnader av tumör-bärande värdar beskrivs. Detta protokoll expanderar selektivt tumör-specifika T-celler för användning i adoptiv immunterapi av bröstcancer.
Det rapporterades att bröstcancer patienter har tidigare immunsvar mot sina tumörer 1,2. Sådana immunsvaret inte ger fullständigt skydd mot utveckling eller återfall av bröstcancer. För att lösa detta problem genom att öka frekvensen av tumörreaktiva T-celler, har adoptiv immunterapi använts. En mängd olika protokoll som har använts för utbyggnad av tumör-specifika T-celler. Dessa protokoll är dock begränsad till användning av tumörantigen ex vivo för aktivering av antigen-specifika T-celler. Helt nyligen har gemensamma gamma kedjan cytokiner såsom IL-2, IL-7, IL-15 och IL-21 har använts ensamt eller i kombination för att höja anti-tumör immunsvar 3. Det är dock inte klart vilken formulering skulle fungera bäst för utbyggnaden av tumörreaktiva T-celler. Här presenterar vi ett protokoll för selektiv aktivering och expansion av tumörreaktiva T-celler från FVBN202 transgena musmodell av HER-2/neu positiv bröstcancer för användning i adoptiv T cells behandling av bröstcancer. Protokollet inkluderar aktivering av T celler med bryostatin-1/ionomycin (B / I) och IL-2 i avsaknad av tumörantigen i 16 timmar. B / I aktivering härmar intracellulära signaler som leder till T-cell aktivering genom att öka proteinkinas C-aktivitet och intracellulär kalcium, respektive 4. Detta protokoll aktiverar specifikt tumör-specifika T-celler medan dödar irrelevanta T-celler. The B / I-aktiverade T-celler odlas med IL-7 och IL-15 för 24 timmar och sedan pulsade med IL-2. Efter 24 timmar är T-cellerna tvättas, split, och odlade med IL-7 + IL-15 för ytterligare 4 dagar. Tumör-specificitet och anti-tumör effekt av fritt expanderat vivo T-celler bestäms.
Selektiv expansion av tumör-reaktiva T-celler med effektormedierad anti-tumör-funktionen kan uppnås genom det föreslagna protokollet med B / I aktivering och ex vivo expansion med de cytokiner gamma-kedjan IL-2, IL-7 och IL-15. Medan IL-2 är en T-cell tillväxtfaktor som kan stödja differentiering och expansion av antigen-specifika T-celler, kan IL-7 hämmar apoptos av T-celler och stödja deras livskraft under expansion. IL-15 kan stödja celler minne T som är viktiga för att generera långsiktigt anti…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av NIH R01 CA104757 Grant (MH Manjili). Vi erkänner tacksamt stöd av OAV Massey Cancer Center och Commonwealth Stiftelsen för cancerforskning.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Bryostatin 1 | Sigma | B7431-10ug | ||
Ionomycin | Calbiochem | 407950 | ||
Mouse IL-7 | PeproTech | 217-17 | ||
Mouse IL-15 | PeproTech | 210-15 | ||
Human IL-2 | PeproTech | 200-02 | ||
RPMI1640 | Invitrogen | 11875 | ||
FBS | Gemini | 100-106 | ||
Penicillin/Streptomycin | Cellgro | 30-002-CI | ||
L- glutamine | Invitrogen | 25030081 | ||
β- mercaptoethanol | Sigma | M7522 | ||
anti-CD16/32 antibody | Biolegend | 101302 | ||
Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit | BD Pharmingen | 556547 | ||
FITC-CD4 | Biolegend | 100406 | ||
PE-CD8 | Biolegend | 100708 | ||
anti-c-Erb2/c–Neu | Calbiochem | OP16 | ||
PE- anti mouse IgG | Biolegend | 405307 | ||
formaldehyde | Polysciences | 04018 | ||
Hemocytometer | Hycor | 87144 | ||
Light microscope | VWR | V200073 | ||
Mouse IFN-γ ELISA set | BD Pharmingen | 555138 | ||
Cell culture flasks | Greiner | 658175 |