Expansión ex vivo de células T tumor-reactiva por medio de la 1/Ionomycin briostatina y la formulación de la cadena gamma común de citoquinas
Summary
Un protocolo eficiente para la<em> Ex vivo</em> Expansión de las células T tumor-reactiva de los ganglios linfáticos que drenan tumores u otros tejidos linfoides secundarios, de los portadores de tumores anfitriones se describe. Este protocolo se expande de forma selectiva del tumor de células T específicas para el uso de la inmunoterapia adoptiva del cáncer de mama.
Abstract
Se informó que los pacientes de cáncer de mama se han pre-existentes respuesta inmune contra los tumores 1,2. Sin embargo, como la respuesta inmune no pueden proporcionar una protección completa contra el desarrollo o recurrencia del cáncer de mama. Para superar este problema mediante el aumento de la frecuencia de células T tumor-reactiva, la inmunoterapia adoptiva ha sido empleado. Una gran variedad de protocolos han sido utilizados para la expansión de células T específicas del tumor. Estos protocolos, sin embargo, están restringidos a la utilización de ex vivo tumor antígenos para la activación de los antígenos específicos de células T. Muy recientemente, las citoquinas cadena gamma común, como la IL-2, IL-7, IL-15 e IL-21 se han utilizado solo o en combinación para la mejora de la anti-tumor respuesta inmune 3. Sin embargo, no está claro cuál es la formulación que mejor funciona para la expansión de las células T tumor-reactiva. Aquí se presenta un protocolo para la activación selectiva y la expansión del tumor, las células T reactivas a partir del modelo de ratón transgénico FVBN202 de carcinoma de mama positivo de Her-2/neu para su uso en la terapia adoptiva de células T del cáncer de mama. El protocolo incluye la activación de células T con bryostatin-1/ionomycin (B / I) e IL-2 en ausencia de antígenos tumorales durante 16 horas. B / I imita la activación de señales intracelulares que dan lugar a la activación de células T, al aumentar la actividad de la proteína quinasa C y el calcio intracelular, respectivamente 4. Este protocolo se activa específicamente el tumor de células T específicas, mientras que matar a las células T irrelevantes. Las células B / I-T activadas son cultivadas con IL-7 e IL-15 durante 24 horas y luego pulsadas con IL-2. Después de 24 horas, las células T se lavan, se divide, y cultivadas con IL-7 + IL-15 por más de 4 días. Tumor de la especificidad y la eficacia antitumoral de la expansión ex vivo de células T se determina.
Protocol
Discussion
Expansión selectiva de las células T tumor-reactiva con efectores anti-tumor función se puede lograr mediante el protocolo propuesto con B / I activación y expansión ex vivo de las citoquinas gamma de la cadena de IL-2, IL-7 e IL-15. Mientras que la IL-2 es un factor de crecimiento de las células T que pueden apoyar la diferenciación y la expansión de las células T antígeno-específicas, IL-7 puede inhibir la apoptosis de las células T y apoyar su viabilidad durante la expansión. IL-15 puede soporta…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el NIH Grant R01 CA104757 (MH Manjili). Agradecemos el apoyo de VCU Massey Cancer Center y la Fundación del Commonwealth para la Investigación del Cáncer.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bryostatin 1 | Sigma | B7431-10ug | ||
| Ionomycin | Calbiochem | 407950 | ||
| Mouse IL-7 | PeproTech | 217-17 | ||
| Mouse IL-15 | PeproTech | 210-15 | ||
| Human IL-2 | PeproTech | 200-02 | ||
| RPMI1640 | Invitrogen | 11875 | ||
| FBS | Gemini | 100-106 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Cellgro | 30-002-CI | ||
| L- glutamine | Invitrogen | 25030081 | ||
| β- mercaptoethanol | Sigma | M7522 | ||
| anti-CD16/32 antibody | Biolegend | 101302 | ||
| Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit | BD Pharmingen | 556547 | ||
| FITC-CD4 | Biolegend | 100406 | ||
| PE-CD8 | Biolegend | 100708 | ||
| anti-c-Erb2/c–Neu | Calbiochem | OP16 | ||
| PE- anti mouse IgG | Biolegend | 405307 | ||
| formaldehyde | Polysciences | 04018 | ||
| Hemocytometer | Hycor | 87144 | ||
| Light microscope | VWR | V200073 | ||
| Mouse IFN-γ ELISA set | BD Pharmingen | 555138 | ||
| Cell culture flasks | Greiner | 658175 |
References
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