Transplante cardíaco heterotópico em ratos

Summary

O rato modelo de transplante cardíaco heterotópico tem sido comprovada por muitos pesquisadores de ser um método importante para o estudo dos mecanismos de rejeição e de resposta imune. No entanto, as técnicas envolvidas são ainda um desafio. Ao modificar as técnicas padrão que temos tido sucesso com mais de 1.000 transplantes.

Abstract

O mouse transplante cardíaco heterotópico tem sido amplamente utilizada desde que foi introduzido pelos drs. Corry e Russell em 1973. É particularmente valioso para estudar a resposta imune de rejeição e, agora que novos transgênicos e camundongos knockout gene estão disponíveis, e um grande número de reagentes imunológicos têm sido desenvolvidos. O modelo de transplante de coração é menos rigorosa do que os modelos de transplante de pele, embora tecnicamente mais desafiador. Nós desenvolvemos uma técnica modificada e ter completado mais de 1000 casos de sucesso de transplante cardíaco heterotópico em ratos. Ao fazer anastomose da aorta ascendente e aorta abdominal, duas suturas ficar são colocadas nos vértices proximal e distal da aorta abdominal com destinatário aorta ascendente do doador s, em seguida, usando 11-0 sutura para anastomose em ambos os lados da aorta com sutura contínua. As suturas permanecer fazer a anastomose mais fácil e 11-0 é um tamanho ideal de sutura para evitar sangramento e trombose.

Ao fazer anastomose da artéria pulmonar e veia cava inferior, duas suturas são feitas permanecer no ápice proximal e ápice distal do destinatário s veia cava inferior com a artéria pulmonar do doador s. A parede esquerda da veia cava inferior e artéria pulmonar do doador s é fechada com suturas contínua no interior da veia cava inferior, após, um nó com a estadia ápice proximal da sutura da parede lateral direita da veia cava inferior e artéria pulmonar do doador s são fechadas com suturas contínua fora da caverna cava inferior com 10-0 suturas. Este método é mais fácil de executar, pois a anastomose é feita apenas de um lado da veia cava inferior e 10-0 suturas é o tamanho certo para evitar o sangramento e trombose. Neste artigo, vamos fornecer detalhes da técnica para complementar o vídeo.

Protocol

Preparação de doadores e de colheita do coração:

1. O rato é anestesiados com injeção intraperitoneal de pentobarbital supina e colocado no campo operatório.
2. A incisão mediana abdominal longa é feita. Conteúdo abdominal são retraídos com gaze para a esquerda, a fim de expor a aorta abdominal e veia cava inferior.
3. 1 ml de heparina (10U/ml) é injetado na veia cava inferior para heparinização.
4. A toracotomia é feita: as costelas são divididos em ambos os lados da coluna vertebral e da parede torácica anterior é alavancado para expor o coração.
5. A veia cava inferior, a veia cava superior e veia ázigos são ligadas com seda 6-0 e dividido superior ao ligaduras.
6. Da aorta ascendente e artéria pulmonar são separados e divididos, tanto distalmente possível.
7. As veias pulmonares são ligadas e seccionadas distal aos laços.
8. O coração é perfundido com solução de 4 ^o C salina.
9. O coração é conservado em gelo solução salina fria.

Preparação de destinatário e Transplante

1. O rato é anestesiados com injeção intraperitoneal de pentobarbital supina e colocado no campo operatório.
2. A incisão mediana abdominal longa é feita. Conteúdo abdominal são retraídos fora do abdômen com uma gaze para expor a aorta abdominal e veia cava inferior.
3. Os ramos da aorta abdominal e veia cava inferior estão expostos e ligados com 10-0 suturas.
4. As ligaduras proximal e distal são colocados ao redor da aorta e veia cava inferior, respectivamente.
5. O venotomia é feita na veia cava inferior do receptor com uma agulha de calibre 30. A abertura é então estendido para um comprimento de igual a aorta pulmonar do doador com micro-tesoura.
6. Aortotomia é feita na aorta abdominal do receptor com uma agulha de calibre 30.
7. A aorta abdominal e abriu a veia cava inferior são irrigados com solução salina.
8. O coração do doador é colocado no lado esquerdo do abdômen do receptor e é coberto com gaze.
9. As suturas são colocadas ficar nos vértices proximal e distal da aorta abdominal com destinatário aorta ascendente do doador.
10. A anastomose do lado direito da aorta abdominal do receptor e aorta ascendente do doador são completadas com suturas de continuar.
11. Duas suturas são feitas ficar primeiro no ápice proximal e distal do ápice do destinatário veia cava inferior com a artéria pulmonar do doador para a anastomose da artéria pulmonar do doador e do receptor veia cava inferior.
12. A parede esquerda da veia cava inferior e artéria pulmonar do doador é fechada com suturas contínua no interior da veia cava inferior.
13. Depois de um nó com a sutura proximal ápice estadia, a parede lateral direita da veia cava inferior e artéria pulmonar do doador são fechadas com suturas contínua fora da caverna cava inferior.
14. O coração do doador é entregue para o lado direito do abdômen do receptor. A parede da direita da aorta abdominal do receptor e do doador anastomose aorta ascendente são fechadas com suturas continuar.
15. Após a anastomose é feita, a ligadura distal é removido para verificar o sangramento da anastomose.
16. Se houver pouco ou nenhum sangramento da anastomose, a ligadura proximal for removido. O coração do doador se enche de sangue imediatamente, a cor do coração se torna vermelho e começa a bater novamente.
17. Os intestinos são retornados para o abdômen, que é fechada com 6-0 contínua.
18. O mouse destinatário é colocado em uma área quente. Depois de uma hora o destinatário recupera.

Discussion

Resultados

Temos realizado com sucesso mais de 1000 casos de transplante cardíaco heterotópico em ratos e alcançou mais de 90% de sucesso em diferentes linhagens de camundongos, incluindo o tipo selvagem, transgênicos e camundongos knockout do gene.

Discussão

Uma vez que os drs. Corry e Russell introduziu transplante cardíaco heterotópico em ratos, em 1973, este modelo tem provado ser um particularmente valioso para estudar a resposta de rejeição imunológica e desenvolvimento de novas estratégias de imunossupressão. Este modelo pode ser usado de forma mais ampla, porque agora o surgimento de inúmeros transgênicos e camundongos knockout gene tem proporcionado novas formas de estudar os mecanismos de rejeição / tolerância. O vascularizado modelo de transplante de coração pode ser mais relevante para o transplante de órgãos sólidos clínicos. Apesar de transplantes de pele ou subcutânea de transplantes de coração neonatal são tecnicamente mais simples, a neovascularização, que é necessário para a sobrevida do enxerto nesses transplantes são particularmente sensíveis às respostas alogênico. Assim, a pele e subcutâneo ouvir transplantes pode ser útil para um teste rigoroso de tolerância, mas não para o desenvolvimento ou otimização de protocolos de indução de imunossupressores ou tolerância.

Nós modificamos a técnica de transplante vascular coração de várias maneiras para melhorar a eficiência e as taxas de sucesso:

1. O coração do doador deve ser irrigada com solução salina da aorta ascendente até o coração tornam-se cor clara após a colheita.
2. Os ramos da aorta abdominal e veia cava inferior do receptor deve ser ligada com 10-0 suturas, evitando o sangramento durante a operação e trombose após a operação.
3. O lúmen da aorta abdominal e veia cava inferior do receptor deve ser irrigada com solução salina até que não haja sangue é esquerda. Isso pode prevenir a trombose após a operação.
4. Bolhas de ar no interior dos vasos devem ser evitados ao fazer anastomoses.
5. As anastomoses da artéria deve usar 11-0 suturas, para ajudar a prevenir o sangramento da anastomose.
6. A incisão da aorta abdominal e veia cava inferior do receptor deve ser igual à abertura da artéria pulmonar e aorta ascendente do coração do doador.
7. É importante ter um campo operacional clara e expansiva, portanto, usar 6-0 em vez de os grampos para oclusão temporária da aorta e veia cava inferior.

Conclusão

Embora a técnica de transplante cardíaco heterotópico em ratos é um desafio técnico, é uma técnica importante para o estudo alloresponses. Modificações práticas e técnicas resultaram em uma taxa de sucesso de mais de 90% em nosso laboratório. Acreditamos que o vídeo eo manuscrito que acompanha vai ajudar a diminuir a curva de aprendizado para os laboratórios que desejem utilizar esta técnica.