Heterotopisk Hjärttransplantation hos möss

Summary

Musen heterotopisk hjärttransplantation modell har bevisats av många forskare vara en viktig metod för att studera mekanismerna bakom avstötning och immunförsvaret. Men de inblandade teknikerna är fortfarande utmanande. Genom att ändra standarden tekniker vi har haft framgång med mer än 1000 transplantationer.

Abstract

Musen heterotopisk hjärttransplantation har använts mycket sedan den introducerades av Dr. Corry och Russell 1973. Det är särskilt värdefullt för att studera avslag och immunsvar nu att nyare transgena och gen möss knockout är tillgängliga, och ett stort antal immunologiska reagens har utvecklats. Den hjärttransplantation modellen är mindre stränga än de modeller hudtransplantation, men tekniskt mer utmanande. Vi har utvecklat en modifierad teknik och har genomfört över 1000 lyckade fall av heterotopisk hjärttransplantation hos möss. När du gör anastomos av aorta ascendens och bukaorta är två stannar suturer placeras på den proximala och distala apexes Mottagarens bukaorta med givaren s aorta ascendens, sedan med 11-0 sutur för anastomos på båda sidor av aorta med fortsatt suturer. Vistelsen suturer göra anastomos lättare och 11-0 är en idealisk sutur storlek för att undvika blödning och blodpropp.

När du gör anastomos av lungartären och sämre hålvenen, två bo suturer som gjordes vid den proximala spets och distala spets mottagarens s underlägsen vena cava med givaren s lungartären. Den vänstra väggen i sämre vena cava och givare s lungartären stängs med fortsatt suturer på insidan av den underlägsna vena cava efter, en knut med proximala spetsen stannar sutur rätt vägg sämre vena cava och givaren s lungartären stängs med en fortsatt suturer utanför sämre Vena grotta med 10-0 suturer. Denna metod är enklare att utföra eftersom anastomos görs bara på ena sidan av sämre vena cava och 10-0 suturer är rätt storlek för att undvika blödning och blodpropp. I denna artikel ger vi information om tekniken för att komplettera videon.

Protocol

Donator Förberedelser och hjärta Harvest:

1. Musen är bedövas med en intraperitoneal injektion av pentobarbital och placeras liggande på det operativa området.
2. En lång mittlinjen buksnitt görs. Buken innehåll är indragen med gasväv till vänster för att avslöja bukaorta och sämre hålvenen.
3. 1 ml heparin (10u/ml) sprutas in i sämre hålvenen för heparin.
4. Den torakotomi görs: revbenen delas på båda sidor av ryggraden och den främre bröstväggen är levered upp till utsätta hjärtat.
5. Den sämre hålvenen, överlägsen hålvenen och azygous ven är knyts ihop med 6-0 silke och delade överlägsen den ligaturer.
6. Uppstigande aorta och lungartären separeras och fördelas så långt distalt som möjligt.
7. Den pulmonell vener är knyts ihop och delas distalt banden.
8. Hjärtat är perfusion med 4 C ^o saltlösning.
9. Hjärtat lagras i iskall saltlösning.

Mottagare Förberedelser och Transplantation

1. Musen är bedövas med en intraperitoneal injektion av pentobarbital och placeras liggande på det operativa området.
2. En lång mittlinjen buksnitt görs. Buken innehållet är tillbaka utanför buken med gasväv för att exponera bukaorta och sämre hålvenen.
3. Grenarna av bukaorta och sämre hålvenen är utsatta och knyts ihop med 10-0 suturer.
4. Den proximala och distala ligaturer är placerade runt kroppspulsådern och sämre hålvenen respektive.
5. Den venotomy görs i sämre hålvenen av mottagaren med en 30 gauge nål. Öppningen är då förlängas till som är lika med givarens pulmonell kroppspulsådern med mikro-sax.
6. Den aortotomy görs i bukaorta av mottagare med en 30 gauge nål.
7. Den öppnade bukaorta och sämre hålvenen bevattnas med koksaltlösning.
8. Donatorns hjärta är placerad på den vänstra sidan av mottagarens buken och är täckt med gasbinda.
9. Vistelsen suturer placeras i proximala och distala apexes Mottagarens bukaorta med givarens aorta ascendens.
10. Den anastomos av den högra sidan av mottagarens bukaorta och givarens aorta ascendens är klara med fortsatt suturer.
11. Två stannar suturer görs först på den proximala spets och distala spetsen av mottagarens sämre vena cava med donatorns lungartären för anastomos av givarens lungartären och mottagarens sämre hålvenen.
12. Den vänstra väggen i sämre vena cava och donatorns lungartären stängs med fortsatt suturer i inne i sämre hålvenen.
13. Efter en knut med proximala spetsen stannar suturer och är rätt vägg sämre vena cava och givarens lungartären avslutades med fortsatta suturer utanför sämre Vena grottan.
14. Donatorns hjärta är vänt över till den högra sidan av mottagarens buken. Den högra väggen i mottagarens bukaorta och givarens aorta ascendens anastomos är stängda med att fortsätta suturer.
15. Efter anastomos görs, är den distala ligatur bort för att kontrollera blödning från anastomos.
16. Om det finns liten eller ingen blödning från anastomos är den proximala ligatur bort. Donatorns hjärta fylls med blod omedelbart, färg på hjärtat blir röd och det börjar att slå igen.
17. Tarmen återförs till buken, som stängs med 6-0 kontinuerlig suturer.
18. Mottagaren musen placeras på ett varmt område. Efter en timme mottagaren återhämtar sig.

Discussion

Resultat

Vi har framgångsrikt utfört mer än 1000 fall av heterotopisk hjärttransplantation hos möss och nådde över 90% framgång i olika stammar av möss, inklusive vildtyp, transgena gen möss knockout.

Diskussion

Eftersom Dr. Corry och Russell introducerade heterotopisk hjärttransplantation hos möss år 1973 har denna modell visat sig vara en särskilt värdefull för att studera immunförsvaret avstötningsreaktioner och utveckla nya immunsuppressiva strategier. Denna modell kan användas mer allmänt nu eftersom uppkomsten av många transgena och genen möss knockout har gett nya sätt att studera mekanismerna bakom avstötning / tolerans. Den vaskulariserad hjärttransplantation modell kan vara mer relevanta för klinisk solida organtransplantationer. Även hud transplantationer eller subkutan transplantationer av neonatal hjärtan är tekniskt enklare, den kärlnybildning som krävs för graft överlevnad i dessa transplantationer är särskilt känsliga för allogena svar. Således, hud och subkutan höra transplantationer kan vara användbart för en strikt test av tolerans, men inte för utveckling eller optimering av immunosuppressiva eller tolerans förmå protokoll.

Vi ändrade den vaskulära teknik hjärttransplantation på flera sätt att förbättra effektiviteten och priser framgång:

1. Donatorns hjärta ska bevattnas med saltlösning från aorta ascendens tills hjärtat blir ljus färg efter skörd.
2. Grenarna av bukaorta och sämre hålvenen av mottagaren bör knyts ihop med 10-0 suturer, förebygga blödning under operationen och trombos efter operation.
3. Lumen i bukaorta och sämre hålvenen av mottagaren bör bevattnas med koksaltlösning tills inget blod finns kvar. Detta kan förhindra trombos efter operationen.
4. Luftbubblor inne i fartygen bör undvikas när man gör anastomoser.
5. Artären anastomoser bör använda 11-0 suturer, för att förhindra blödning från anastomoser.
6. Snittet av bukaorta och sämre hålvenen mottagarens bör vara lika med öppnandet av lungartären och aorta ascendens av donatorns hjärta.
7. Det är viktigt att ha en tydlig och expansiv verksamhet området därför använda 6-0 sutur istället för klämmorna att tillfälligt täppa till aorta och sämre hålvenen.

Slutsats

Även tekniken att heterotopisk hjärttransplantation i möss är tekniskt utmanande, det är en viktig teknik för att studera alloresponses. Praktik och tekniska förändringar har resulterat i ett framgångsrikt på över 90% i vårt laboratorium. Vi tror att videon och den tillhörande manuskriptet kommer att hjälpa till att minska inlärningskurvan för laboratorier som vill använda denna teknik.