पारंपरिक न्यूक्लिक एसिड quantitation पद्धति को व्यावहारिक और कुशल विकल्प के रूप में NanoDrop microvolume सिस्टम का उपयोग दो microvolume न्यूक्लिक एसिड quantitation प्रोटोकॉल के प्रदर्शन के माध्यम से वर्णित है.
Biomolecular assays विकसित कर रहे हैं लगातार किया जा रहा है कि सामग्री का उत्तरोत्तर छोटे मात्रा का उपयोग करें, अक्सर उन लोगों के लिए है कि microvolume quantitation प्रदर्शन कर सकते हैं न्यूक्लिक एसिड quantitation लिए पारंपरिक क्युवेट आधारित उपकरणों के उपयोग precluding.
NanoDrop microvolume नमूना प्रतिधारण प्रणाली (थर्मो वैज्ञानिक NanoDrop उत्पाद) पर कब्जा करने और cuvettes या capillaries जैसे पारंपरिक रोकथाम तंत्र के स्वतंत्र नमूना मिनट मात्रा को बनाए रखने के लिए फाइबर ऑप्टिक प्रौद्योगिकी और प्राकृतिक सतह तनाव गुणों के संयोजन द्वारा कार्य. इसके अलावा, सिस्टम छोटे पथ लंबाई, जो न्यूक्लिक एसिड एकाग्रता माप की एक विस्तृत रेंज में परिणाम को रोजगार अनिवार्य रूप से dilutions प्रदर्शन करने की जरूरत को नष्ट करने. नमूना स्पेक्ट्रोस्कोपी विश्लेषण के लिए आवश्यक की मात्रा को कम करना भी कई आणविक वर्कफ़्लोज़ भर में अतिरिक्त गुणवत्ता नियंत्रण कदम के शामिल किए जाने की सुविधा, कार्यकुशलता बढ़ाने और अंततः बहाव के परिणामों में अधिक से अधिक आत्मविश्वास के लिए अग्रणी.
हाल ही में प्रयोगात्मक अग्रिमों के साथ उच्च संवेदनशीलता सीमित द्रव्यमान का फ्लोरोसेंट विश्लेषण के लिए की जरूरत भी उभरा है. वही microvolume नमूना प्रतिधारण तकनीक का प्रयोग, फ्लोरोसेंट माप सामग्री के 2 μL के साथ प्रदर्शन किया जा सकता है, फ्लोरोसेंट assays मात्रा आवश्यकताओं को काफी कम किया जा अनुमति है. 10 या उससे कम μL के इस तरह के microreactions अब संभव है एक समर्पित microvolume fluorospectrometer का उपयोग कर.
दो microvolume न्यूक्लिक एसिड quantitation प्रोटोकॉल का प्रदर्शन हो सकता है कि पारंपरिक क्युवेट आधारित प्रोटोकॉल के लिए व्यावहारिक विकल्प के रूप में एकीकृत नमूना प्रतिधारण प्रणाली का उपयोग करेगा. सबसे पहले, एक प्रत्यक्ष A260 absorbance एक microvolume स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग विधि वर्णित है. इस प्रतिदीप्ति आधारित एक विधि है कि एक microvolume fluorospectrometer के साथ सक्षम बनाता है कम मात्रा प्रतिदीप्ति प्रतिक्रियाओं के एक प्रदर्शन के द्वारा पीछा किया जाता है. ये उपन्यास तकनीक न्यूक्लिक एसिड 1 से / स्नातकोत्तर μL 15,000 / नमूना के न्यूनतम खपत के साथ एनजी μL लेकर सांद्रता का आकलन सक्षम.
यहाँ प्रस्तुत quantitation प्रोटोकॉल सबसे व्यापक रूप से स्वीकार किए जाते हैं microvolume सिस्टम पर आधारित हैं. इस तरह की प्रणाली पारंपरिक न्यूक्लिक एसिड quantitation पद्धति के लिए व्यावहारिक विकल्प है, जो अधिक से अधिक नमूना मात्रा और नियंत्रण तंत्र के उपयोग पर भरोसा करते हैं प्रदान करते हैं.
NanoDrop microvolume प्रौद्योगिकी एक नमूना प्रतिधारण प्रणाली है कि एक तरल स्तंभ के रूप में मापा जा रहा नमूना की सतह तनाव गुणों पर निर्भर करता है कार्यरत हैं. यह आवश्यक है कि नमूना ऊपरी और निचले उचित स्तंभ गठन के लिए ऑप्टिकल माप सतहों के साथ संपर्क में आता है. यदि किसी भी बिंदु पर माप परिणाम गलत या प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य नहीं लगता है, यह सबसे अधिक संभावना नमूना विविधता या तरल स्तंभ टूटना का परिणाम है.
डिटर्जेंट और isopropyl शराब सफाई एजेंट के रूप में वे कुरसी माप सतहों uncondition सकता अनुशंसित नहीं हैं. एक असुविधाजनक कुरसी तब होता है जब पीठ के हाइड्रोफोबिक सतह के गुणों समझौता किया गया है, नमूना छोटी बूंद के एक सपाट में जिसके परिणामस्वरूप. असुविधाजनक pedestals के माप के दौरान तरल स्तंभ का टूटना करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं.
चित्रा 3. असुविधाजनक एक छोटी बूंद पानी की एक सपाट सतह की विशेषता है.
Uncondtioned कुरसी सतहों NanoDrop कुरसी Reconditioning यौगिक (पीआर-1, थर्मो वैज्ञानिक NanoDrop उत्पाद) का उपयोग कर उसकी मरम्मत हो सकता है. ऊपरी और निचले कुरसी सतहों, ~ 30 सेकंड के लिए सूखे की अनुमति दी reconditioning परिसर की एक पतली परत लागू होता है, तो एक साफ, सूखे, एक प्रकार का वृक्ष मुक्त प्रयोगशाला पोंछ का उपयोग बंद मला. राज्य सफलतापूर्वक उसकी मरम्मत एक पानी ऊपर beading के जब नीचे कुरसी की सतह पर लागू छोटी बूंद की विशेषता है.
चित्रा 4. उसकी मरम्मत सतह एक छोटी बूंद पानी के ऊपर एक beading के द्वारा विशेषता है.
Microvolume quantitation सिस्टम बहुत नमूना खपत को कम करने और नाटकीय रूप से एकाग्रता रेंज में वृद्धि जब और अधिक परंपरागत मात्रा का ठहराव सिस्टम की तुलना में. हालांकि microvolume quantitation अक्सर सीमित सुई बायोप्सी और लेजर कब्जा microdissection जैसे सेल जन, दक्षता और आसानी से इस पद्धति का उपयोग बना दिया है यह एक व्यापक रूप से स्वीकार किए जाते हैं के लिए वैकल्पिक पारंपरिक न्यूक्लिक एसिड quantitation तरीकों को शामिल परिस्थितियों के लिए एक समर्थकारी प्रौद्योगिकी बन गया है भी जब नमूना बहुतायत से होता है.
The authors have nothing to disclose.
रिचर्ड डब्ल्यू Beringer और डेविड एल ऐश, अनुप्रयोग, वैज्ञानिकों, तकनीकी सहायता और फिल्मांकन के लिए थर्मो वैज्ञानिक NanoDrop उत्पादों,.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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NanoDrop 2000c | Thermo Fisher Scientific | ND-2000C | ||
NanoDrop 3300 | Thermo Fisher Scientific | ND-3300 |