Biology

Dunne darm transplantatie in Muizen

Published: August 20, 2007 doi: 10.3791/258

¹Department of Surgery, University of California, San Francisco - UCSF

Summary

De muis dunne darm transplantatie model is erkend als een belangrijk instrument om mechanismes van de afstoting en het scherm nieuwe immunosuppressieve geneesmiddelen te bestuderen. Echter, is dit model beperkt tot gebruik omdat de betrokken technieken is een zeer technisch uitdaging. Nu introduceren wij de gewijzigde techniek.

Abstract

Sinds 1990 is de ontwikkeling van tacrolimus gebaseerde immunosuppressie en verbeterde chirurgische technieken, het grotere gamma van krachtige immunosuppressieve geneesmiddelen, infectie profylaxe, en geschikt patiëntenselectie geholpen te verbeteren actuariële van transplantaat en patiënt overleving voor alle soorten van darm transplantatie. Patiënten met onomkeerbare intestinale falen en complicaties van parenterale voeding moet nu routinematig in aanmerking komen voor de dunne darm transplantatie. Echter, Survival tarieven voor dunne darm transplantatie zijn langzaam te verbeteren in vergelijking steeds gunstig af bij nier-, lever-, hart en longen. De dunne darm transplantatie is nog steeds onvoldoende in vergelijking met andere organen. Verdere vooruitgang kan afhangen van een beter begrip van de immunologie en fysiologie van het transplantaat en kan sterk worden vergemakkelijkt door diermodellen. Een breder gebruik van de muis dunne darm transplantatie model is nodig in de studie van de immunologie en fysiologie van de darm transplantatie alsmede efficiënte methoden in de diagnose van vroege afwijzing. Echter, is dit model beperkt tot gebruik omdat de betrokken technieken is een zeer technisch uitdagend. Hebben we een aangepaste techniek. Bij het maken van anastomose van de vena porta en vena cava inferior, zijn twee verblijven hechtingen gemaakt op de proximale en distale apex apex van inferieure de ontvanger s vena cava met portale de donor s ader. De linker muur van de vena cava inferior en de vena porta donor s wordt afgesloten met voortzetting van hechtingen aan de binnenkant van de vena cava inferior na, na een knoop met de proximale apex verblijf hechtdraad de rechter muur van de vena cava inferior en de donor s portal ader worden gesloten met hechtingen blijven buiten het onderste holle grot met 10-0 hechtingen. Deze methode is eenvoudiger uit te voeren omdat de anastomose wordt gemaakt net aan de ene kant van de vena cava inferior en 10-0 hechtingen is de juiste maat om het bloeden en trombose te voorkomen. In dit artikel geven we de details van de techniek om de video te vullen.

Protocol

Donor voorbereiding en de dunne darm oogst:

De muis is ansetheized met een intraperitoneale injectie van pentobarbital en geplaatst rug over de werking veld.
Een lange middellijn incisie in de buik wordt gemaakt. De proximale van jejunum is geïdentificeerd en geligeerd met 6-0 hechtingen. Bijgevoegde mesenteriale vaten distaal van het jejunum band zijn geligeerd met 8-0 hechtingen.
Het distale ileum van wordt geïdentificeerd en geligeerd met 6-0 hechtingen. De bijgevoegde mesenteriale vaten distaal van het ileum worden geligeerd met 8-0 hechtingen.
Het portaal is blootgesteld van de omringende vet en de bijgevoegde weefsels, geligeerd en verdeelde de pancreaticoduodenal en milt aderen.
De abdominale aorta is blootgesteld en bloot de a. mesenterica superior van de omliggende weefsels.
1 ml heparine (10u/ml) wordt geïnjecteerd in de vena cava inferior voor heparinization.
De poortader is verdeeld in de navel van de lever, en de a. mesenterica superior is gescheiden van aorta, waaronder een Carrel patch van de aorta.
Het jejunum en het ileum zijn verdeeld distaal van de banden. De gehele dunne darm is verwijderd, vervolgens opgeslagen bij 4 ° C in zoutoplossing.

Ontvanger voorbereiding en-transplantatie:

De muis is ansetheized met een intraperitoneale injectie van pentobarbital en geplaatst rug over de werking veld.
Een lange middellijn incisie in de buik wordt gemaakt. Buikinhoud worden teruggetrokken buiten de buik met een gaasje om de abdominale aorta en de vena cava inferior bloot te leggen.
De takken van de abdominale aorta en de vena cava inferior worden blootgesteld en geligeerd met 10-0 hechtingen.
De proximale en distale ligatuur is geplaatst rond de aorta en de vena cava inferior respectievelijk.
De venotomy wordt gemaakt in de vena cava inferior van de ontvanger met een 30 gauge naald. De opening wordt dan uitgebreid tot een lengte van die gelijk is aan portal van de donor ader met micro-schaar.
De aortotomy wordt gemaakt in de abdominale aorta van de ontvanger met een 30 gauge naald. De opening wordt dan uitgebreid tot een lengte van die gelijk is aan superieure van de donor a. mesenterica Carrel patch met micro-schaar
De insnijdingen van de abdominale aorta en de vena cava inferior zijn geperfuseerd met zoutoplossing.
De donor dunne darm wordt geplaatst aan de linkerkant van de buik van de ontvanger die met een gaasje.
Het verblijf hechtingen worden geplaatst aan de proximale en distale apex apex van de ontvanger abdominale aorta met de a. mesenterica superior donor Carrel patch.
De anastomose van de rechterkant van de buik van de ontvanger en de donor aorta a. mesenterica superior Carrel patch worden eerst aangevuld met verdere hechtingen.
Twee verblijf hechtingen worden gedaan tijdens de top proximale en distale top van inferieure de ontvanger vena cava met portaal van de donor voor de anastomose van het portaal van de donor ader en de ontvanger vena cava inferior.
De linker muur van de vena cava inferior en de vena porta donor is gesloten met hechtingen verder in de binnenkant van de vena cava inferior.
Na een knoop met de proximale apex verblijf hechtdraad, de rechter muur van de vena cava inferior en de donor poortader is gesloten met hechtingen blijft buiten het onderste holle grot.
De donor dunne darm is overgedragen aan de rechterkant van de buik van de ontvanger. De rechter muur van de abdominale aorta van de ontvanger en de donor a. mesenterica superior anastomose wordt afgesloten met nog hechtingen.
Nadat alle anastomose wordt gemaakt, wordt de distale ligatuur verwijderd eerst het bloeden cheque van de anastomose.
Als er weinig of geen bloeden van de anastomose de proximale ligatuur wordt verwijderd. De donor de dunne darm is gevuld met bloed onmiddellijk, de kleur van de dunne darm wordt rood.
Het distale uiteinde van de graft ileum is geanastomoseerd end-to-kant van het proximale deel van jejunum ontvanger met een continue hechting van 8-0 hechtingen.
De proximale jejunum van de donor is exteriorized als een stoma en bevestigd aan de huid aan de rechterkant van de buikwand met vier hechtingen elke zijde van 8-0 hechtingen.
De darmen gaan terug naar de buikholte en afgesloten met 6-0 gaan hechtingen.
De ontvanger muis wordt geplaatst op een warme omgeving. Na een uur, de ontvanger zich herstelt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De unieke immuunrespons na de dunne darm transplantatie is het onderwerp geweest van uitgebreid onderzoek met behulp van dunne darm transplantatie model in muizen. De basis immunologische reacties, zoals graft-versus-reacties, host-versus-graft-reactie, een combinatie van beide reacties, chronische afstoting en tolerantie betrokken zijn geweest. Bijna alle immunosuppressieve middelen van bewezen of potentiële klinische relevantie zijn getest op hun effectiviteit in de dunne darm transplantatie model.

We pasten de muis dunne darm transplantatie techniek op verschillende manieren om de efficiëntie en slagingspercentages te verbeteren:

De binnenkant van de kleine donor darm moet houden duidelijk en geen links eventuele uitwerpselen.
De rand van Carrel patch van de aorta van de a. mesenterica superior moet worden verdeeld glad en gelijke grootte met de opening van de abdominale aorta van de ontvanger.
Draai niet aan de poortader met de a. mesenterica superior wanneer anastomosen de poortader met inferieure vena cava ontvanger. Omdat de portal is ader langer is dan de a. mesenterica superior.
De dunne darm moet worden gelegd op het midden van de buik en houd de a. mesenterica superior en de poortader in de juiste spanning als de bloedcirculatie weer op te bouwen om trombose te voorkomen.
De a. mesenterica superior moet houden juiste spanning wanneer de ontvangende dunne darm terug in de buikholte om trombose te voorkomen dat na het sluiten van de buik.
0,1 ml cefuroxine (20mg/kg) er nog in de buikholte om infectie te voorkomen voor het sluiten van de buik.
Om zeker te zijn laat de ontlasting stroom in de buik activiteit bij het uitvoeren van de dunne darm anastomose om infectie te voorkomen na de operatie.
Niet beschadigen van de mesenteriale vaten bij het oogsten van de dunne darm naar dunne darm necrose na de operatie te voorkomen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.