Transplante de intestino delgado em ratos

Summary

O rato modelo de transplante de intestino delgado tem sido reconhecida como uma importante ferramenta para estudar mechanismes da rejeição imunológica e tela novas drogas imunossupressoras. No entanto, este modelo é limitado a usar, porque as técnicas envolvidas é um desafio extremamente técnico. Agora vamos introduzir a técnica modificada.

Abstract

Desde 1990, o desenvolvimento de tacrolimus baseado imunossupressão e melhorou as técnicas cirúrgicas, a matriz aumentada de potentes medicamentos imunossupressores, profilaxia de infecções, e seleção de pacientes adequados ajudou a melhorar enxerto atuariais e taxas de sobrevida do paciente para todos os tipos de transplante de intestino. Pacientes com insuficiência intestinal irreversíveis e complicações da nutrição parenteral deve agora ser rotineiramente consideradas para o transplante do intestino delgado. No entanto, as taxas de sobrevida para o transplante do intestino delgado têm sido lentas para melhorar cada vez mais se compara favoravelmente com renal, coração, fígado e pulmão. O transplante de intestino delgado ainda é insatisfatório em comparação com outros órgãos. Progressos pode depender melhor compreensão da imunologia e fisiologia do enxerto e pode ser muito facilitada pelos modelos animais. Uma utilização mais ampla do mouse modelo de transplante de intestino delgado é necessário no estudo da imunologia e fisiologia do intestino transplante, bem como métodos eficientes para diagnosticar a rejeição inicial. No entanto, este modelo é limitado a usar, porque as técnicas envolvidas é extremamente tecnicamente desafiador. Nós desenvolvemos uma técnica modificada. Ao fazer anastomose da veia porta ea veia cava inferior, duas suturas são feitas permanecer no ápice proximal e ápice distal do destinatário s veia cava inferior com veia porta do doador s. A parede esquerda da veia cava inferior e veia porta do doador s é fechada com suturas contínua no interior da veia cava inferior, após, depois de um nó com a estadia ápice proximal da sutura da parede lateral direita da veia cava inferior e portal do doador s veias são fechadas com suturas contínua fora da caverna cava inferior com 10-0 suturas. Este método é mais fácil de executar, pois a anastomose é feita apenas de um lado da veia cava inferior e 10-0 suturas é o tamanho certo para evitar o sangramento e trombose. Neste artigo, vamos fornecer detalhes da técnica para complementar o vídeo.

Protocol

Preparação de doadores e captação do intestino delgado:

1. O rato é ansetheized com uma injeção intraperitoneal de pentobarbital supina e colocado no campo de operação.
2. A incisão mediana abdominal longa é feita. O proximal do jejuno, é identificada e ligada com 6-0. Anexado vasos mesentéricos distal para o tie jejuno estão ligados com 8-0 suturas.
3. Distal do íleo é identificado e ligada com 6-0. Vasos mesentéricos anexado ao íleo distal são ligados com 8-0 suturas.
4. O portal é exposto a partir dos tecidos circundantes gordura e anexado, ligadas e seccionadas as veias pancreaticoduodenal e esplênica.
5. A aorta abdominal é exposto e exposto a artéria mesentérica superior dos tecidos circundantes.
6. 1 ml de heparina (10U/ml) é injetado na veia cava inferior para heparinização.
7. A veia portal está dividido no hilo do fígado e da artéria mesentérica superior é dividido da aorta, incluindo um patch Carrel da aorta.
8. Jejuno e íleo distal são divididos para os laços. O intestino delgado é removido, em seguida, armazenados a 4 ° C em solução salina.

Destinatário preparação e transplante:

1. O rato é ansetheized com uma injeção intraperitoneal de pentobarbital supina e colocado no campo de operação.
2. A incisão mediana abdominal longa é feita. Conteúdo abdominal são retraídos fora do abdominal com gaze para expor a aorta abdominal e veia cava inferior.
3. Os ramos da aorta abdominal e veia cava inferior estão expostos e ligados com 10-0 suturas.
4. A ligadura proximal e distal é colocado ao redor da aorta e veia cava inferior, respectivamente.
5. O venotomia é feita na veia cava inferior do receptor com uma agulha de calibre 30. A abertura é então estendido para um comprimento de igual a veia porta do doador com micro-tesoura.
6. Aortotomia é feita na aorta abdominal do receptor com uma agulha de calibre 30. A abertura é então estendido para um comprimento de igual ao doador superiores remendo Carrel mesentérica artéria com micro-tesoura
7. As incisões da aorta abdominal e veia cava inferior são perfundidos com solução salina.
8. Intestino delgado do doador é colocado no lado esquerdo do abdômen do receptor cobrindo com gaze.
9. As suturas são colocadas permanecer no ápice proximal e ápice distal do destinatário aorta abdominal com superior doador remendo Carrel mesentérica artéria.
10. A anastomose do lado direito da aorta abdominal do receptor e doador mesentérica superior remendo Carrel artéria forem concluídas primeiro com sutura contínua.
11. Duas suturas são feitas ficar primeiro no ápice proximal e distal do ápice do destinatário veia cava inferior com portal do doador para a anastomose da veia porta do doador e do receptor veia cava inferior.
12. A parede esquerda da veia cava inferior e veia porta do doador é fechada com suturas contínua no interior da veia cava inferior.
13. Depois de um nó com a sutura proximal ápice estadia, a parede lateral direita da veia cava inferior e veia porta do doador é fechada com suturas contínua fora da caverna cava inferior.
14. Intestino delgado do doador é entregue para o lado direito do abdômen do receptor. A parede da direita da aorta abdominal do receptor e do doador anastomose da artéria mesentérica superior é fechada com suturas continuar.
15. Afinal anastomose é feita, a ligadura distal é removido primeiro para verificar o sangramento da anastomose.
16. Se houver pouco ou nenhum sangramento da anastomose proximal à ligadura é removido. Intestino delgado do doador é cheia de sangue imediatamente, a cor do intestino delgado torna-se vermelho.
17. A extremidade distal do íleo do enxerto é anastomosado término-lateral para a parte proximal do jejuno destinatário com uma sutura contínua de 8-0 suturas.
18. Jejuno proximal do doador é exteriorizado como um arquivo. Estoma e garantiu para a pele do lado direito da parede abdominal, com quatro suturas cada lado da sutura 8-0
19. Os intestinos são retornados para a cavidade abdominal e fechou com 6-0 continuar.
20. O mouse destinatário é colocado em área quente. Depois de uma hora, o destinatário recupera.

Discussion

A única resposta imunológica após o transplante do intestino delgado tem sido objeto de extensa pesquisa usando o modelo de transplante de intestino delgado em ratos. As reações imunológicas básicos, tais como enxerto-versus-reações, anfitriã do enxerto-versus-reação, uma combinação de ambas as reações de rejeição, crônicas e tolerância têm sido envolvidos. Quase todos os agentes imunossupressores de comprovada ou potencial relevância clínica foram testadas para a sua eficácia no modelo de transplante de intestino delgado.

Nós modificamos o mouse técnica de transplante de intestino delgado de várias maneiras para melhorar a eficiência e as taxas de sucesso:

1. O interior do intestino delgado doador deve manter clara e sem qualquer fezes esquerda.
2. A borda do patch Carrel da aorta da artéria mesentérica superior deve ser dividida tamanho suave e igual com a abertura da aorta abdominal do receptor.
3. Não torça a veia porta com a artéria mesentérica superior quando anastomoses da veia portal com inferior destinatário veia cava. Porque o portal é veia mais do que o da artéria mesentérica superior.
4. Do intestino delgado deve ser colocado no meio do abdômen e manter a artéria mesentérica superior e veia porta na tensão adequada quando reconstruir a circulação do sangue para evitar trombose.
5. A artéria mesentérica superior deve ser manter a tensão adequada quando o intestino pequena hóstia voltou para dentro da cavidade abdominal para evitar a trombose após o fechamento do abdômen.
6. 0,1 ml cefuroxine (20mg/kg) são deixados na cavidade abdominal para evitar a infecção antes de fechar o abdome.
7. Para ter certeza de não deixar o fluxo de fezes para a atividade abdômen durante a execução da anastomose do intestino delgado para evitar a infecção após a operação.
8. Não danificar os vasos mesentéricos, quando a colheita do intestino delgado para evitar a necrose do intestino delgado após a operação.

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Sutures	10-0 and 11-0	MONOSOF
Microscope	Unversal S3	Carl Zeiss, Inc.