Summary
Biz köpek hindlimb kas gücü ve tekrarlanan eksantrik kasılmalar kas yanıtı ölçmek için bir minimal invaziv ve ağrısız bir yöntem açıklanmaktadır.
Abstract
Biz köpek pelvik ekstremite kas gücü ve tekrarlanan eksantrik kasılmalar kas yanıtı ölçmek için bir minimal invaziv ve tekrarlanabilir bir yöntem tarif. Stereotaktik çerçeve içinde doğru bir açıyla femur tibia hizalamak için bir anestezi köpek Pelvik ekstremite immobilize. Yapıştırıcı sarın servo motor tork ölçmek için bir şaft üzerine monte edilmiş bir pedal pençe yapıştırıyor. Perkütan sinir stimülasyonu, izometrik tork üretmek için pedal karşı ya push (genişletmek) veya (flex) çekin pençe pelvik bacak kasları harekete geçirir. Perkütan tibial sinir stimülasyonu tibiotarsal ekstansör kasları harekete geçirir. Tekrarlanan eksantrik (uzun) kasılmaları tibiotarsal fleksör kasları perkütan peroneal sinir stimülasyonu ile indüklenen. Eksantrik protokol servo motor tarafından dayatılan zorunlu bir streç tarafından izlenen bir başlangıç izometrik kasılma oluşur. Sözleşmeler, örneğin, bir eksantrik kasılma sırasında dönme etkili kas uzatır. Fleksör kasların uyarılması sırasında 800 msn izometrik ve 200 msn eksantrik kasılma tabi tutulur. Bu prosedür, her 5 saniyede tekrarlanır. Yorgunluk önlemek için, 4 dakika kalan toplam 30 kasılmaları yapılan her 10 kasılmalar izler.
Protocol
1. Deneme için ayarlama
- Dinamik kas Kontrol (DMC) yazılımı yükleyin.
- Fizyoloji teçhizat aşağıdaki üreticinin talimatlarına kadar güç.
- DMC yazılım Koşu:
Donanım DMC yazılımı çalıştıran bir bilgisayara bağlı olduğu varsayılır ve sistem kalibre olduğunu. Yazılım zaman zaman revize edilebilir, bu nedenle, talimatlar aşağıda kullandığımız güncel yazılım sürümü ile ilgili olarak verilmektedir. Yazılım açıldığında, zaten çalışıyor.
Kullanıcı başlangıçta DMC (örneğin, izometrik bir tetanoz üretmek için 1.5 s için 50 Hz uyarmak için) bir protokol yazabilir ve protokol daha sonra tekrar kullanmak üzere kaydedilebilir. Ve (2) eksantrik streç zarar protokolü (1) izometrik kasılma protokolü (örneğin, seğirme veya tetanoz): Biz iki standart protokoller kullanır. Biz seğirme için izometrik kasılma protokolü ile başlar. Seğirme optimize etmek için, Monitör Çıkışları ekranı kullanılır; elektrotlar taşınır seğirme sırasında üretilen tork görülebilir. Maksimum seğirme yanıtı elde edilir, veri ana ekran (Devam seçeneğini seçin) dönen ve seçerek başlayın ve Bitti toplanır. Dosyalar, pop-up penceresi Farklı Kaydet kaydedilir . Aynı konumda muhafaza elektrotlar sayesinde, tetanoz (50 Hz) sonra toplanan ve kaydedilir. Izometrik kasılmaları tamamlandığında, eksantrik streç yaralanma protokol yüklü ve çalıştırmak. Çünkü bu protokol, (10 kasılmaları) idam ana ekranda Çalıştır Tek tuş, tüm durum çalıştırın ortaya çıkarmak için seçilir kasılmaların bir dizi vardır . Şimdi başlayın seçildiğinde, Tüm Protokolleri penceresi açılır dosyaların kaydedileceği içine kök dosya ad ve dizin için çalıştır sorar anlaşılmaktadır. Sonra, Protokol Serisi Test başlatın ve eksantrik protokolü başlatmak için seçilen Bitti. Dosyalar seçilen Directory içine otomatik olarak kaydedilir.
2. Hayvan fizyolojisi teçhizat Konumlandırma
- Hayvanlar ile ilgili tüm prosedürler için hayvan bakımı ve kullanımı komitesi (ACUC) yönergeleri takip edilmelidir.
- Onaylanmış protokole göre (örneğin, izofluran) inhalasyon anestezi ile köpek anestezisi. Hayvan derin anestezi olduğundan emin olmak için refleks yanıp kontrol edin. CO 2 izleme, pulse oksimetre ve sıcaklık bütün prosedür sırasında yakından izlenmelidir. Biz genellikle inhalasyon anestezi sevofluran indüksiyonu için propofol kullanın.
- (Yani 2-3 cm büyük trokanter distal fibula başında ekstremite başından lateral uyarıcı elektrotlar alınacaktır (diz) bastırmak lateral etrafında saç tıraş.
- Femur ve tibia dik açı yapmak o kadar yerleştirilmiş pelvik uzuv ve tibia ile sırt yatma fizyoloji tablo pozisyon köpek masaüstü paralel. Sağ ya da sol bacak test edilebilir Ya.
- Pedal kuvveti köpek pençe ekleyerek önce, kuvvet pedal döndürmek için açık ve güvenli olmasını sağlamak için kontrol edin. Fizyoloji teçhizat için prosedür açıp pedal etkinleştirmek izleyin. Not: kullanıcı el taşımak için çalıştığında kuvvet pedalı "sert" olmalıdır.
- Ayak pedalına hafifçe köpeğin pençe dinlenme, ölçü ve dönme merkezi ekseni yanal rakam sonuna kadar köpek pençe uzunluğu kayıt.
- Pençe, kendinden yapışkanlı elastik sargı kullanarak ayak pedalı sabitleyin.
3. İzometrik seğirme tork (tibiotarsal fleksiyon)
- Bir güvenlik kontrolünden sonra, steril korumalı monopolar uyaran izolasyon ünitesi (SIU) 24-gauge uyarıcı elektrotlar bağlanır.
- Stimülatörü ayarlayın: 1 Hz (saniyede 1 darbe) sürekli darbe çıkışı
- Yazılım Ayarları: izometrik kasılma protokolü (ana ekran seçin Yük Protokolü) yükleyin. Çalıştır Tek tuş başlayın düğmesine yanında görünür olmalıdır. Bu protokolü sadece bir kez çalıştırmak sağlar.
- Eldivenli elleriyle, alkol ile cildi temizlemek ve lateral proksimal fibula distal peroneal sinir palpe. Sinir alanında bir işaret parmağı ile, cilt altında dikkatlice katot (siyah) elektrodu takın ve periost sadece dış. Elektrot, yaklaşık 2cm derinlikte derinin yüzeyine paralel hareket el kaldırılır elektrot önlemek için yeterli yerleştirilmiş olmalıdır.
- (Kırmızı), deri, paralel ve katot elektrot biraz distal altında anot elektrot yerleştirin. Her iki elektrot peroneal sinir fibula başı sadece distal iç olmalıdır.
- Uyarıdan etkinleştirin1 Hz tor. Monitörde seğirme tepkileri gözlemleyin. Büyük seğirme genlik elde etmek için elektrot pozisyonları küçük ayarlamalar yapın. Elektrot en büyük seğirme yanıtı bulmak için tibia paralel 3-4 ½ cm artışlarla tamamen kaldırıldı ve yerini olmalıdır. Bu prosedürün kritik bir bileşeni olan ve en büyük yanıtı bulmak için çok dikkatli olunmalıdır.
- Monitör Çıkışları ekran (Devam seçeneğini seçin) çıkmadan seğirme yanıtları kaydedin, daha sonra başlayın seçin ve veri toplamak için Bitti. Farklı Kaydet penceresi açılır istenen dosya adı ile dosyayı kaydedin. Stimülatörü kapatın.
4. İzometrik tetanik tork (tibiotarsal fleksiyon)
- Elektrotlar hareket ettirmeden, 1,5 sn için 50 Hz stimülatörü ayarlarını değiştirmek ve dış tetik fonksiyonu etkinleştirin. Bu stimülatörü yazılım tarafından aktive olmasını sağlar.
- Yazılım ayarları: seğirme gibi aynı izometrik kasılma protokolü tetanik yanıt toplamak için kullanılır. Uyarıcı elektrotlar taşındı başlayın varsayarsak ve Bitti tetanoz üretmek için seçilir. Tetanoz üretmek için izometrik protokolde stimülatörü doğru zamanlama korumak için yazılım tarafından tetiklenir. Farklı Kaydet penceresi açılır tetanik yanıt kaydedin.
5. Eksantrik protokol
- : 1 sn (100V) için 50 Hz ve dış tetik işlevini etkinleştirmek elektrotlar hareket ettirmeden, stimülatörü ayarlarını değiştirmek. Bu stimülatörü yazılım tarafından aktive olmasını sağlar.
- Yazılım ayarları: eksantrik streç yaralanması protokolü, 29 derece döndürmek için (maksimum 30 derece) servo motor için bir komut yükleyin . Çalıştır'ı seçin. Başlayın seçin; kaydedilecek dosya içine eksantrik serisi için kök dosya adı ve klasör girin. Protokol Serisi Testi Başlat'ı seçin ve ardından protokol başlatmak için Bitti.
- Bu protokolde stimülatörü doğru zamanlama korumak için yazılım tarafından tetiklenebilir. Her eksantrik kasılma yanıtı ekranda göründüğü gibi, otomatik olarak kaydedilir.
- Dört dakikalık dinlenme süresi her on eksantrik kasılmalar izler.
- 30 eksantrik kasılmaları (dört dakikalık bir dinlenme süresi ile ayrılmış her bir set üç set on kasılmaları) toplam toplayın.
6. İzometrik seğirme tork (tibiotarsal uzantısı)
- Yukarıdaki seğirme protokol yineleyin, ancak cilt ve fleksiyon protokolü için orijinal elektrot yerleştirme proksimal dik elektrotlar yerleştirin. Gastrocnemious kas karınlarına içinde kaudal ve distal IT kursları olarak tibial sinir uyarılır. Uyarıcı Eşleştirilmiş ve derin kas kaudal içinde referans elektrotlar yerleştirilir ve bastırmak için sadece proksimal. Bastırmak (diz) tarafından oluşturulan 90o açı iniyor bir hat boyunca yaklaşık yerleştirme noktası. Tibial sinir peroneal sinir (kaudal) derin yatıyor Çünkü, elektrotlar optimal seğirme potansiyellerini ortaya çıkarmak için çeşitli alanlarda yerleştirilmiş olmalıdır. Bu prosedürün kritik bir bileşenidir. Not: tibiotarsal seğirme ve tetani tork iz tibiotarsal fleksiyon iz göre ters görünecektir.
7. İzometrik tetanik tork (tibiotarsal uzantısı)
- Elektrotlar hareket ettirmeden, 1,5 sn için 50 Hz stimülatörü ayarlarını değiştirmek ve dış tetik fonksiyonu etkinleştirin. Bu stimülatörü yazılım tarafından aktive olmasını sağlar.
- Yazılım ayarları: 1.5 sn için 50 Hz ve dış tetik işlevini etkinleştirmek. Bu stimülatörü yazılım tarafından aktive olmasını sağlar.
- Yazılım ayarları: aynı izometrik kasılma protokolü, seğirme gibi tetanoz için kullanılır . Uyarıcı elektrotlar taşındı başlayın varsayarsak ve Bitti tetanoz üretmek için seçilir.
- Tetanoz üretmek için izometrik protokolde stimülatörü doğru zamanlama korumak için yazılım tarafından tetiklenir. Pop tetanik yanıtını Dosya pencere Kaydet kaydedin.
8. Veri analizi
- Dinamik kas analizi (DMA) programı (Aurora Bilimsel), seğirme, tetanik ve eksantrik kasılmalar toplanan tork ve zamansal bilgileri elde etmek için kullanılır.
- DMA program çalıştırıldığında: yazılım, zaman zaman revize edilebilir, bu nedenle, kullandığımız güncel yazılım sürümü ile ilgili talimatları aşağıda verilmiştir. DMA yazılım çalışmıyorsa açıldığında. Programı etkinleştirmek için, sol üst köşesinde beyaz ok düğmesini seçin. DMA yazılım fonksiyonları bir dizi var, ama bizim amacımız içinlar, sadece birkaç ilgili fonksiyonları açıklanacaktır.
Analiz etmek için bir dosya yükleyin:? Güncelle son veri dosyası veya yeni bir veri dosyası açılır DMA program başlatıldığında penceresi görüntülenir. Yeni seçin; sonraki pencerede seçin Labview sonraki pencerede, uygun klasör ve dosya seçin; Aç seçeneğini seçin. Bu pencerede kaldırmak için Filtre Arsa Kaldır seçeneğini belirleyin. Cut-off Frekans kutusunda bir filtre frekansı girin. Optimum filtre frekansı değerlendirilecek belirli verilere göre tespit edilecek olurdu. Bir örnek olarak, izometrik yanıtları ve eksantrik yanıtlar için 10 Hz - 30 Hz. Kullanım süzülmüş veri düğmesini seçin. Seç Arsa Veri altında, Filtreli Kuvvetleri seçin. Ekran genişletmek ve dosyası üzerinden taşımak için altta iki slayt çubuklarını kullanın. - Seyirme analizi (Şekil 1): 3 imleçler vardır: (1) mavi (2) ve sarı (3) beyaz dosya yüklenir ve yukarıda açıklanan aşamalar tamamlandığında, imleç konumunu ayarlamak varsayılarak. Izometrik seyirmesi ve tetani veya diğer izometrik kasılmaları için dinlenme tork tork yükselir noktada, mavi, sarı tork dinlenme tork (yani, dinlenme aşamasından sonra) geri döner yerleştirilir; beyaz yerleştirilir sarı imleç (gerekli değil) sağ. Imleçleri fare depresif ve seçilen imleci istediğiniz konuma sürükleyerek sol tuşu ile kolayca taşınır.
Analizi yapın: imleçler konumlandırılmış yapın Kas Analizi seçin, daha sonra Sonuçları Göster. Analiz Muscle Veri Sonuçları penceresi açılır, bir dizi değişkenin Maksimum Force gibi gösterilir; Temel Force ½ Dinlenme Zaman, vb veri imleçler 1 (mavi) ve 2 (sarı arasında yatıyor tork yanıt sunulmaktadır .) Tüm bu değişkenler veya özel değişkenler bir veri dosyasına kaydedilebilir, ancak bu süreci burada açıklanan değildir. Bir veri günlüğü değilse, veri el ile kaydedilmiş olması gerekir. Pencereyi Kapat ana ekrana dönmek için seçin. DMA kapatmak için Exit Program seçin ve sonra yeni bir dosya analizi başlamak için beyaz ok seçin. - Tetani analizi (Şekil 2): seğirme için yukarıda açıklandığı gibi aynı adımları.
- Eksantrik analizi (Şekil 3): eksantrik analiz kurmak için daha fazla adım gerektirir ve her 3 imleçleri kullanır. Eksantrik tork yanıt negatif ise (yani, tork iz aşağı doğru görünür), Referans Alan -1 (cm ²) kutusu (tork değerleri değişmeden) girerek ters ve normalize seçin; düğmesi veri (bu durumda, ters) normalize edilmiş göstermek için ters çevirir. Kapalı istenen Frekans Cut (örneğin, 10 Hz) girin ve süzülmüş veri analizi için kullanılacak filtre uygulanmış verileri kullanın için düğmeye tersine çevirmek için filtrelenmemiş veriler, kullan seçeneğini seçin. Pozisyon tork döner beyaz bir imleç eksantrik streç tork izometrik plato (bkz. aşağıdaki şekil) yükselmeye başlar noktada pozisyon sarı imleç; izometrik tork dinlenme tork yükselmeye başladığı nokta mavi imleç konumu tork dinlenme. Kas Analizi seçeneğini seçin, ardından Sonuçları Göster. Pop-up pencere kas Veri Analiz Sonuçlar, izometrik tork verileri için imleçler 1 (mavi) ve 2 (sarı) arasındaki veri seçmek ya da eksantrik tork verileri için imleçler 2 (sarı) ve 3 (beyaz) arasında. Tüm bu değişkenler veya özel değişkenler bir veri dosyasına kaydedilebilir, ancak bu süreci burada açıklanan değildir. Bir veri günlüğü değilse, veri el ile kaydedilmiş olması gerekir. Pencereyi Kapat ana ekrana dönmek için seçin. DMA kapatmak için Exit Program seçin ve ardından yeni bir dosya analizi başlamak için beyaz ok seçin.
9 - Temsilcisi Sonuçlar
- Twitch torku: Tibial sinir stimülasyonu (1 Hz) tibiotarsal ekstansör kasları aktive tek tiki (Şekil 1). Tork (gücü ve mesafe ürün) kullanıcı tarafından hesaplanan Y-ekseni "kuvvet" işaret ettiğini unutmayın. (Dönme eksenine lateral haneli sonuna kadar) pençe uzunluğunu ölçmek. Bu uzunluk, tork (Nm) belirlemek için kullanılan mesafe (kol).
- İzometrik tetanik tork (tibiotarsal uzatma): tibial sinir stimülasyonu tibiotarsal ekstansör kaslar (50hz bakliyat 1.5 sn tren) tetanized. Biz stimülasyon zamanlama kontrol etmek ve yakalamak için tork yanıtlar (Şekil 2) Dinamik Muscle Kontrol bilgisayar yazılımı (DMC, Aurora Scientific, Inc.) Kullanıldı.
- Eksantrik protokolü: eksantrik kasılmalar tibiotarsal fleksörlerinin yapılmıştır. Perkütan peroneal sinir Stimulation uzatma neden aktif fleksör kasları (eksantrik kasılma; Şekil 3), ortak rotasyon bir başlangıç izometrik kasılma aktif 6
Şekil 1 mavi (# 1), sarı (# 2) ve beyaz (# 3) imleçler Yerleştirme seğirme analiz etmek. DMA yazılımı bir temsilcisi ekran görüntüsü sağlıklı bir 13 kg köpek tibiotarsal uzantısı seğirme gösterilmiştir. Yazılım tarafından gerçekleştirilen bir sonraki analiz için, verileri elektronik tablo ve kuvvet çıkışı (Force (g) gücünün ürünü hesaplanır tork (Nm). Tork dönüştürülür ve olabilir gibi resimde gösterildiği ihraç edilmektedir unutmayın kol mesafesi (bu mesafe = uzunluk pençe lateral haneli dönme ekseni ölçülen).
Şekil 2 mavi (# 1), sarı (# 2) ve beyaz (# 3) imleçler Yerleştirme tetanoz analiz. Şekil 1 de gösterildiği gibi DMA yazılımı çekilen bir temsili ekran tibiotarsal uzantısı tetani, aynı hayvan için gösterilmiştir.
Şekil 3 mavi (# 1), sarı (# 2) ve beyaz (# 3) imleçler Yerleştirme eksantrik bir streç zarar daralma analiz etmek. DMA yazılımı bir temsilcisi ekran görüntüsü sağlıklı bir 13 kg köpek tek bir eksantrik streç zarar daralma gösterilir. Ilk plato (yeşil hat) izometrik kasılma fazı göstermektedir. Izometrik faz yeşil hat hızlı zirve tarafından gösterildiği gibi bir eksantrik (streç) faz tarafından takip edilmektedir. Tekrarlayan eksantrik kasılmalar genellikle izometrik tork sürekli bir düşüşe neden olabilir.
Discussion
Bu protokol, değerlendirmek, analiz etmek, in vivo büyük hayvan kas fonksiyonu belge ve tedavi müdahalelerin etkinliğini belirlemek ya da hastalığın ilerlemesi biyolojik özellikleri belgelemek için kullanılır. Hayvan 1-6 konumlandırma, kol, bacak yerleşim ve elektrot yerleştirme anahtar değişkenlerin önemli ölçüde etkili sonuçlar. Bir ön çalışma, izofluran kuvvet ölçümleri (Schueler RO, Koch H, Kornegay JN, yayınlanmamış veri, 1993) önemli ölçüde etkiler vermedi alveoler konsantrasyon (MAC) ortalama değerleri Donanım ve yazılım piyasada bulunan ve yöntemleri köklü. 7 1,2,8,4,9-11,6,12 Bu protokol, kullanıcıların almak ve yukarıda açıklanan yazılım ve ekipman kullanımı tavsiye edilir.
Değişiklikler: sınırlamalar mevcut servo motor, yaklaşık 23 kg ve 20 cm pençe uzunluğu vücut kitle içerir. Tork sınırı tork dönüştürücü (model 310LR) ~ 8 N-metre Burada anlatılan olduğunu unutmayın. Bu değer, 6 ay veya daha büyük normal köpekler tarafından aşılabilir. Geçerli protokol Olası değişiklikler yazılım güncelleme içerir ve transdüser tork aralığı artırmak için. Aurora Bilimsel büyük hayvanlar için geçerli protokol kullanılan stereotaktik çerçeve için ikame edilebilir bir uzuv konumlandırma cihazı üretmektedir. Bu yöntemi, insan olmayan primatlar da dahil olmak üzere diğer hayvan modellerinde başarıyla uygulanan olmuştur.
Disclosures
Bu video-makale üretimi Aurora Scientific, Inc tarafından sponsor oldu
Acknowledgments
Ulusal Sağlık Enstitüsü (NIH), Joshua Fräse Vakfı, Müsküler Distrofi Derneği (MDA).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Stimulating electrodes | Teca | 25mmx26G | Disposable sterile monopolar needle electrodes |
| Stimulator | Grass Technologies | S88X | |
| Stimulus isolation unit | Grass Technologies | SIU-C | |
| Muscle lever system | Aurora Scientific | 310C-LR | Footplate option |
| Signal interface | Aurora Scientific | Series 604A | |
| Dynamic Muscle Control & Analysis Software | Aurora Scientific | Aurora Scientific | |
| PC/Monitor | Aurora Scientific | Windows XP computer | |
| Limb position device | Aurora Scientific | NA | Can be substituted for stereotactic frame |
| Table | Northstar Customs, LLC | NA | Custom made table |
| Flexible wrap for paw attachment to pedal | Andover | PetFlex(5cmx2m) | May be reused a time or two |
References
- Childers, M. K., Okamura, C. S., Bogan, D. J., Bogan, J. R., Petroski, G. F., McDonald, K., Kornegay, J. N. Eccentric contraction injury in dystrophic canine muscle. Arch Phys Med Rehabil. 83, 1572-1578 (2002).
- Childers, M. K., Okamura, C. S., Bogan, D. J., Bogan, J. R., Sullivan, M. J., Kornegay, J. N. Myofiber injury and regeneration in a canine homologue of Duchenne muscular dystrophy. Am J Phys Med Rehabil. 80, 175-181 (2001).
- MK, C. hilders, JT, S. taley, JN, K. ornegay, KS, M. cD. onald Skinned single fibers from normal and dystrophin-deficient dogs incur comparable stretch-induced force deficits. Muscle Nerve. 31, 768-771 (2005).
- Kornegay, J. N., Bogan, D. J., Bogan, J. R., Childers, M. K., Cundiff, D. D., Petroski, G. F., Schueler, R. O. Contraction force generated by tarsal joint flexion and extension in dogs with golden retriever muscular dystrophy. J Neurol Sci. 166, 115-121 (1999).
- Liu, J. M., Okamura, C. S., Bogan, D. J., Bogan, J. R., Childers, M. K., Kornegay, J. N. Effects of prednisone in canine muscular dystrophy. Muscle Nerve. 30, 767-773 (2004).
- Tegeler, C. J., Grange, R. W., Bogan, D. J., Markert, C. D., Case, D., Kornegay, J. N., Childers, M. K. Eccentric contractions induce rapid isometric torque drop in dystrophin-deficient dogs. Muscle Nerve. 42, 130-132 (2010).
- Allen, D. G. Eccentric muscle damage: mechanisms of early reduction of force. Acta Physiol Scand. 171, 311-319 (2001).
- Friden, J., Lieber, R. L. Eccentric exercise-induced injuries to contractile and cytoskeletal muscle fibre components. Acta Physiol Scand. 171, 321-326 (2001).
- Merkies, I. S., Faber, C. G. Outcome measures in Duchenne muscular dystrophy: are we ready for the new therapeutic era? Neuromuscul Disord. 19, 447-447 (2009).
- Nagaraju, K., Willmann, R. Developing standard procedures for murine and canine efficacy studies of DMD therapeutics: report of two expert workshops on "Pre-clinical testing for Duchenne dystrophy". Neuromuscul Disord. 19, 502-506 (2009).
- Proske, U., Allen, T. J. Damage to skeletal muscle from eccentric exercise. Exerc Sport Sci Rev. 33, 98-104 (2005).
- Warren, G. L., Lowe, D. A., Armstrong, R. B. Measurement tools used in the study of eccentric contraction-induced injury. Sports Med. 27, 43-59 (1999).
