यह आलेख व्यक्तिगत sensilla कोशिकी, खनिज तेल के तहत टिप रिकॉर्डिंग के माध्यम से रासायनिक उत्तेजना अलग करने के लिए एक electrophysiological विधि का वर्णन करता है.
हम electrophysiologically संक्षेप में, संवेदी 3,4 sensilla खूंटी तरह की जांच के लिए एक मौजूदा तकनीक टिप रिकॉर्डिंग 1,2 के एक संशोधन का वर्णन. मध्य वेंट्रल सभी बिच्छू की सतह पर दो pectines बुलाया appendages, mechano और जो के घने क्षेत्रों chemosensory खूंटी sensilla 5,6 हैं. इन sensilla के chemoresponsiveness का आकलन करने के लिए एक विधि extracellularly sensillum भीतर तंत्रिका गतिविधि की रिकॉर्डिंग के रूप में एक अस्थिर odorant संवेदी क्षेत्र 5,7 करने के लिए शुरू की है के लिए एक tungsten इलेक्ट्रोड का उपयोग करता है. इस विधि की सीमाओं को धीमी गति से डेटा संग्रह और अनियंत्रित उत्तेजक के लिए परिचय, और से, खूंटी क्षेत्र हटाने शामिल हैं. इन सीमाओं को पार करने के लिए, हम एक नई तकनीक टिप रिकॉर्डिंग है कि एक माध्यम है जिसके माध्यम से पानी आधारित tastants व्यक्तिगत खूंटी sensilla 8,9 करने के लिए देने के लिए के रूप में nonpolar खनिज तेल का उपयोग करता है विकसित की है. हम सफलतापूर्वक इस पद्धति लागू है साइट्रिक एसिड, इथेनॉल, और नमक sensillar chemoresponses प्राप्त है. यहाँ हम एक ऐसी 9 अध्ययन के लिए प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल का वर्णन. हमें लगता है कि इस नई विधि 10 कीड़े, 11 और 12 क्रसटेशियन के उन सहित अन्य सन्धिपाद chemosensory प्रणाली, की प्रतिक्रिया गुणों का अध्ययन करने के लिए उपयोगी हो सकता है.
ऊपर प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे electrophysiological अध्ययन के लिए एक रेगिस्तान चरागाह बिच्छू (Paruroctonus utahensis) तैयार करने के लिए . विशेष रूप से, हम बताते हैं कि कैसे नियंत्रित कोशिकी तेल तहत pectinal chemosensory न्यूरॉन्स की नोक रिकॉर्डिंग के लिए एक कक्ष का निर्माण करने के लिए. क्योंकि तेल और पानी के मिश्रण नहीं है, यह संभव है रासायनिक (जल आधारित उत्तेजक के साथ) उत्तेजना एकल sensilla अलग. यह जोर दिया जाना चाहिए कि पी. utahensis, एक अपेक्षाकृत छोटे जानवर (≈ 2.5-5 सेमी) है और बड़े जानवरों के लिए इस प्रोटोकॉल को लागू करने पशु मंच, चैम्बर के आकार के रूप में कई आकार का समायोजन, और तेल की राशि लागू की आवश्यकता हो सकती है. हम पायलट अध्ययन के संचालन के लिए पानी आधारित रासायनिक उत्तेजक नियंत्रित प्रसव के लिए आवश्यक तेल की एक न्यूनतम राशि का परीक्षण सलाह देते हैं.
इसके अलावा, हम तेल की आधारभूत pectinal sensilla 8 भीतर तंत्रिका गतिविधि पर कोई प्रभाव नहीं पाया. यह अन्य मॉडल प्रणाली के लिए पुष्टि होना चाहिए के रूप में अच्छी तरह से पहले chemoresponsiveness का आकलन करने के लिए.
इस पद्धति का एक और chemoresponse sensilla बीच संवेदी क्षेत्र में बातचीत प्रभाव के लिए परीक्षण विधि के साथ संयोजन के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. उदाहरण के लिए, यह टिप रिकॉर्ड (तेल) के तहत के लिए संभव है के रूप में हम एक पड़ोसी 9 sensillum से आधार रिकॉर्ड (एक tungsten इलेक्ट्रोड के माध्यम से) . एक sensillum से इस तरह के एक रिकॉर्डिंग विन्यास का आकलन किया जाए या नहीं एक sensillum रासायनिक उत्तेजक आधार दर्ज sensillum के तंत्रिका गतिविधि को प्रभावित करता है के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. तिथि करने के लिए, कोई एक बिच्छू pectinal sensilla के लिए यह परीक्षण किया है, और यह के रूप में अच्छी तरह से अन्य chemosensory प्रणालियों के लिए एक खुला प्रश्न बना हुआ है.
संक्षेप में प्रस्तुत करने के लिए, हम तेल अग्रिम सन्धिपाद स्वाद के तंत्रिका आधार में electrophysiological जांच के दायरे के तहत टिप रिकॉर्डिंग विधि लगता है. इस पांडुलिपि में, हम इस विधि के लिए जानवरों की तैयारी के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं, और हम आशा है कि यह परिधीय संवेदी तंत्रिका प्रणाली के आगे के अध्ययन के लिए एक मजबूत नींव प्रदान करता है.
The authors have nothing to disclose.
हम जीवन निधि, विश्वविद्यालय ओकलाहोमा के अंडर ग्रेजुएट रिसर्च अवसर कार्यक्रम, और इस काम के वित्तपोषण के लिए जूलॉजी विभाग धन्यवाद. हम भी संपादकीय मदद के लिए डा. Marielle Hoefnagels धन्यवाद.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Lift-N-Press tab | Ted Pella, Inc. | 16082 | Doubled-sided adhesive | |
MicroFil | World Precision Instruments, Inc. | MF34G | Micropipette filler | |
Standard Glass Capillaries | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-6 | Glass pipettes | |
Microelectrode Holder | World Precision Instruments, Inc. | MEH3SBW10 |