이 문서는 광유에 따라 세포, 팁 – 녹음을 통해 개별 sensilla에 화학 자극을 분리에 대한 electrophysiological 방법을 설명합니다.
우리는 electrophysiologically 짧은 감각 sensilla 3,4 PEG – 같은 조사에 대한 기존의 팁 – 녹음 기술의 1,2의 수정을 설명합니다. 모든 전갈의 중간 복부 표면의 밀도 분야가 pectines라는 두 개의 부속, 메카 및 chemosensory 말뚝 sensilla 5,6입니다. 이러한 sensilla의 chemoresponsiveness 평가하기위한 한 가지 방법은 휘발성 odorant이 감각 필드 5,7에 소개로 extracellularly sensillum 내에서 신경 활동을 기록을위한 텅스텐 전극을 사용합니다. 이 방법의 제한 속도가 느린 데이터 수집 및 통제 흥분제 소개 및 페그 분야에서 제거를 포함합니다. 이러한 한계를 극복하기 위해, 우리는 각각의 말뚝 sensilla 8,9 물을 기반 tastants를 제공하는을 통해 매체로 무극 성 미네랄 오일을 사용하는 새로운 팁 – 녹화 기술을 개발했습니다. 우리는 성공적으로 구연산 초산, 에탄올, 그리고 소금에 sensillar의 chemoresponses를 얻는이 방법을 적용했습니다. 여기 우리는 이러한 연구 9 실험 프로토콜을 설명합니다. 우리는이 새로운 방법은 곤충 10, 11, 갑각류 12 포함한 다른 arthropod chemosensory 시스템의 응답 특성을 공부하는 데 유용할 수 있습니다 생각합니다.
위의 프로토콜 electrophysiological 연구 사막 초원 전갈 (Paruroctonus utahensis)를 준비하는 방법을 설명합니다. 특히, 우리는 석유에 따라 pectinal chemosensory 뉴런의 제어 세포 끝 – 녹음을위한 챔버를 빌드하는 방법을 보여줍니다. 기름과 물을 혼합하지 않기 때문에, 그것은 화학 자극 (물 기반 각성제)를 단일 sensilla로 분리 수 있습니다. 그것은 스트레스를해야한다는 P. utahensis는 비교적 작은 동물 (≈ 2.5-5 ㎝)이며 큰 동물이 프로토콜을 적용하면 여러 크기와 같은 동물의 플랫폼, 챔버의 크기 조정, 그리고 적용 기름 양을 요구할 수 있습니다. 우리는 물을 기반의 화학 자극의 전달 제어에 필요한 석유의 최소 금액을 테스트하기 위해 파일럿 연구를 실시하는 것이 좋습니다.
또한, 우리는 pectinal sensilla 8 시간 기준 신경 활동에 기름의 영향을 찾을 수 없습니다. 이것은 이전 chemoresponsiveness를 평가하기 위해,뿐만 아니라 다른 모델 시스템을위한 확인하여야한다.
이 방법은 감각 분야에서 sensilla 간의 chemoresponse 상호 작용 효과에 대해 테스트하는 다른 방법과 함께 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 한 sensillum에서 끝 – 기록 (석유 이하)이 가능합니다 같은 우리 이웃 sensillum 9 시부터베이스 레코드 (텅스텐 전극을 통해). 이러한 녹음 구성은 기본 – 기록 sensillum의 신경 활동에 영향을 미치는 지 여부를 화학적으로 한 sensillum을 자극하지 평가하기 위해 사용할 수 있습니다. 지금까지 아무도 전갈 pectinal sensilla이 테스트를하지 있으며, 그것뿐만 아니라 다른 chemosensory 시스템을위한 열린 질문 유지됩니다.
요약하면, 우리는 석유 진보 arthropod 맛보기의 신경 기초로 electrophysiological 조사의 범위를 아래의 팁 – 녹음 방법을 생각합니다. 이 원고에서는, 우리는이 방법에 대한 동물을 준비 프로토콜을 제공하고, 우리는 주변 감각 신경 시스템의 진학 확고한 기반을 제공합니다 바랍니다.
The authors have nothing to disclose.
우리는 생활 자금, 오클라호마 대학 학부 연구 기회 프로그램, 그리고이 작품을 자금에 대한 동물학의 부 감사합니다. 또한 편집에 도움 박사 마리엘의 Hoefnagels 감사합니다.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Lift-N-Press tab | Ted Pella, Inc. | 16082 | Doubled-sided adhesive | |
MicroFil | World Precision Instruments, Inc. | MF34G | Micropipette filler | |
Standard Glass Capillaries | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-6 | Glass pipettes | |
Microelectrode Holder | World Precision Instruments, Inc. | MEH3SBW10 |