في هذا التقرير ، إلا أننا يبرهن على وجود نظام لعزل الخلايا المانحة والثقافة من الغدة الثديية الماوس ، وزرع هذه الخلايا في orthotopically الفئران المتلقي لتحليل انسجة : التفاعلات الظهارية أثناء تطوير ورم الثدي.
وقد كان تأثير الخلايا اللحمية ، بما في ذلك الخلايا الليفية على تطور ورم الثدي موثقة بشكل جيد من خلال استخدام نماذج الماوس ، لا سيما من خلال زرع خلايا انسجة والخلايا الظهارية في الغدة الثديية من الفئران. زرع النماذج الحالية غالبا ما تنطوي على استخدام الفئران المناعة بسبب خلفيات وراثية مختلفة من خلايا انسجة والخلايا الظهارية. وغالبا ما تستخدم مصفوفات خارج الخلية لتضمين نوعين خلية مختلفة عن التفاعلات خلية خلية ثابتة ، ولكنها تنطوي على استخدام Matrigel أو ذيل فأر الكولاجين ، والتي هي ركائز المناعية. عدم وجود خلايا تي من الفئران وظيفية المناعة يمنع تقييم دقيق للانسجة الخلايا الثديية على تطور الورم في الجسم الحي ، مع انعكاسات هامة على تطوير الأدوية ونجاعتها. وعلاوة على ذلك ، والفئران المناعة مكلفة ، من الصعب ان تولد وتتطلب شروط رعاية خاصة. للتغلب على هذه العقبات ، وقد طورنا نهجا لزرع خلايا انسجة orthotopically والخلايا الظهارية في الفئران من الخلفية الجينية نفسها للحث على تشكيل ثابت الورم. هذا النظام ينطوي على حصاد طبيعي ، وسرطان الخلايا الليفية المرتبطة بها ، خلايا سرطان الثدي PyVmT والكولاجين من الفئران C57BL/6J المانحة. ثم يتم تضمين الخلايا في الكولاجين وزرع في غدد الثدي الأربية من الفئران C57BL/6J الإناث. زرع خلايا أورام PyVmT وحده شكل واضح آخر أيام 30-40 الزرع. تحليل نقطة النهاية في 60 يوما يشير إلى أن التعاون مع زرع الخلايا الليفية الثدي يعزز نمو الورم مقارنة مع الخلايا المزروعة PyVmT وحدها. بينما تم استخدام خلايا من الفئران ومصفوفة C57BL/6J في هذه الدراسات ، يمكن تطبيق عزل الخلايا ونهج المصفوفة وزرع نحو الفئران من خلفيات وراثية مختلفة يتظاهرون براعة. باختصار ، يمكن استخدام هذا النظام لتحقيق التفاعلات الجزيئية بين خلايا انسجة والخلايا الظهارية ، ويتغلب على القيود الحرجة في نماذج الماوس المناعة.
وقد تجلى مساهمة الفنية الليفية في تطور الورم من خلال نماذج لزراعة الأعضاء ، والذي يرتبط سرطان الخلايا الليفية شارك في زرع الثدي حميدة مع النتائج الخلايا الظهارية في زيادة نمو الورم والغازية 5. وقد شملت زرع النهج التقليدي استخدام الفئران SCID عارية أو أن تشارك في ?…
The authors have nothing to disclose.
وقد تم تمويل هذا المشروع من خلال منحة من قبل عدد المعاهد الوطنية للصحة / NCI R00 CA127357 ومركز جامعة كانساس الهبات السرطان.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
C57BL/6N mice | Harlan | N/A | |
MMTV-PyVmT transgenic mice | Jackson laboratories | 002374 | |
Fetal Bovine Serum | Fisher | SH3039603PR | |
DMEM | VWR | 10000113873 | |
Penicillin/streptomycin | Fisher | MT-30-001 | |
amphotericin | fisher | BP2645-20 | |
Amicon filtration columns ultracel 50k | Millipore | UFC905008 | |
Tubes for Beckman TI rotor | Beckman | 355618 | |
Rat tail collagen | Fisher | CB 40236 | |
10x EBSS | Sigma Aldrich | E7510-100ML | |
Trypsin 1X, 0.25% in HBSS w/o Calcium and Magnesium | Fisher | MT-25-050-CI | |
Glacial acetic acid | Fisher | A491-212 | |
Coomasie blue | Fisher | BP101 25 | |
Trypsin | Sigma Aldrich | T3924-100ml | |
Collagenase A | Sigma AldrichC0130-50 | ||
hyalronidase | Sigma Aldrich | H3884 | |
DNase | Sigma Aldrich | D5025 | |
Kaleidoscope Protein standard | Biorad | 1610375 | |
Glass slides | Fisher | 12545-78 | |
Glass coverslips | VWR | 101400-042 | |
Vimentin antibody S-20 | Santa Cruz Biotechnology | SC-7558 | |
α-smooth muscle actin antibody | Abcam | ab5694 | |
CK14 antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-53253 | |
CK18 antibody | Abcam | ab668 | |
DAPI | Sigma Aldrich | D9542 | |
Anti-mouse biotinylated | Vector laboratories | BA9200 | Distributed through Fisher |
Anti-mouse-alexa-568 | Invitrogen | A10037 | |
Anti-mouse- alexa-488 | Invitrogen | A11001 | |
Streptavidin- alexa-488 | Invitrogen | S11226 | |
DAPI | Invitrogen | D21490 | |
Prolong antifade | Invitrogen | P-36930 | |
Surgical scissors | Fine Science Tools | 91400-12 | |
Fine spring scissors | Fine Science Tools | 15000-02 | |
Blunt forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
# 5 fine forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
Gut chromic suture | Fisher | NC9326254 | |
Glass Pasteur pipet | Fisher | 22-042-815 | |
Ethanol | Fisher | A406P 4 | |
betadine | fisher | NC9386574 | |
Wound clips | Fisher | 12032-07 | |
Wound staple | Fisher | 12031-07 |