Dans ce rapport, nous démontrons un système pour isoler les cellules du donneur et de la culture de la glande mammaire de la souris, et la transplantation orthotopique ces cellules dans des souris bénéficiaires d'analyser stromales: interactions épithéliales pendant le développement de tumeurs mammaires.
L'influence de cellules stromales, y compris les fibroblastes sur la progression de la tumeur mammaire a été bien documenté par l'utilisation de modèles de souris, en particulier grâce à la transplantation de cellules stromales et les cellules épithéliales de la glande mammaire de souris. Modèles de transplantation actuels impliquent souvent l'utilisation de la souris immunodéprimées en raison de la génétique de différentes origines cellules stromales et les cellules épithéliales. Matrices extracellulaires sont souvent utilisés pour intégrer les deux types cellulaires différents pour cohérentes interactions cellule-cellule, mais impliquent l'utilisation de Matrigel ou de collagène de queue de rat, qui sont des substrats immunogène. Le manque de cellules T fonctionnelles des souris immunodéprimées empêche une évaluation précise des cellules stromales sur la progression de la tumeur mammaire in vivo, avec des implications importantes sur le développement de médicaments et d'efficacité. Par ailleurs, les souris immunodéprimées sont coûteux, difficiles à reproduire et exigent des conditions de soins spéciaux. Pour surmonter ces obstacles, nous avons développé une approche de la transplantation orthotopique de cellules stromales et les cellules épithéliales des souris de la même bagage génétique pour induire la formation de tumeurs cohérente. Ce système implique la récolte normale, le carcinome fibroblastes associés, PyVmT cellules de carcinome mammaire et du collagène de souris C57BL/6J donateurs. Les cellules sont ensuite intégrés dans le collagène et transplantées dans les glandes mammaires inguinales des souris C57BL/6J femelles. La transplantation de cellules PyVmT seuls forment des tumeurs palpables greffe 30-40 jours après. Analyse Endpoint moins 60 jours indique que la co-transplantation avec des fibroblastes améliore la croissance des tumeurs mammaires par rapport aux cellules transplantées PyVmT seul. Alors que les cellules et la matrice de souris C57BL/6J ont été utilisées dans ces études, l'isolement de cellules et la matrice et l'approche de transplantation peuvent être appliquées sur des souris de différentes origines génétiques démontrant la polyvalence. En résumé, ce système peut être utilisé pour étudier les interactions moléculaires entre les cellules stromales et les cellules épithéliales, et surmonte les limitations critiques dans les modèles murins immunodéprimés.
La contribution fonctionnelle des fibroblastes dans la progression tumorale a été démontrée par des modèles de transplantation, dans lequel le carcinome fibroblastes associés co-transplantés avec bénignes mammaires des résultats des cellules épithéliales dans la croissance tumorale et l'invasivité accrue 5. Approches de transplantation conventionnelle ont impliqué l'utilisation de souris SCID ou nude à la co-transplantation de cellules stromales et épithéliales de différentes origines…
The authors have nothing to disclose.
Ce projet a été financé par le NIH / NCI numéro de subvention R00 CA127357 et l'Université du Kansas cancer dotation Center.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
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C57BL/6N mice | Harlan | N/A | |
MMTV-PyVmT transgenic mice | Jackson laboratories | 002374 | |
Fetal Bovine Serum | Fisher | SH3039603PR | |
DMEM | VWR | 10000113873 | |
Penicillin/streptomycin | Fisher | MT-30-001 | |
amphotericin | fisher | BP2645-20 | |
Amicon filtration columns ultracel 50k | Millipore | UFC905008 | |
Tubes for Beckman TI rotor | Beckman | 355618 | |
Rat tail collagen | Fisher | CB 40236 | |
10x EBSS | Sigma Aldrich | E7510-100ML | |
Trypsin 1X, 0.25% in HBSS w/o Calcium and Magnesium | Fisher | MT-25-050-CI | |
Glacial acetic acid | Fisher | A491-212 | |
Coomasie blue | Fisher | BP101 25 | |
Trypsin | Sigma Aldrich | T3924-100ml | |
Collagenase A | Sigma AldrichC0130-50 | ||
hyalronidase | Sigma Aldrich | H3884 | |
DNase | Sigma Aldrich | D5025 | |
Kaleidoscope Protein standard | Biorad | 1610375 | |
Glass slides | Fisher | 12545-78 | |
Glass coverslips | VWR | 101400-042 | |
Vimentin antibody S-20 | Santa Cruz Biotechnology | SC-7558 | |
α-smooth muscle actin antibody | Abcam | ab5694 | |
CK14 antibody | Santa Cruz Biotechnology | sc-53253 | |
CK18 antibody | Abcam | ab668 | |
DAPI | Sigma Aldrich | D9542 | |
Anti-mouse biotinylated | Vector laboratories | BA9200 | Distributed through Fisher |
Anti-mouse-alexa-568 | Invitrogen | A10037 | |
Anti-mouse- alexa-488 | Invitrogen | A11001 | |
Streptavidin- alexa-488 | Invitrogen | S11226 | |
DAPI | Invitrogen | D21490 | |
Prolong antifade | Invitrogen | P-36930 | |
Surgical scissors | Fine Science Tools | 91400-12 | |
Fine spring scissors | Fine Science Tools | 15000-02 | |
Blunt forceps | Fine Science Tools | 11002-12 | |
# 5 fine forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
Gut chromic suture | Fisher | NC9326254 | |
Glass Pasteur pipet | Fisher | 22-042-815 | |
Ethanol | Fisher | A406P 4 | |
betadine | fisher | NC9386574 | |
Wound clips | Fisher | 12032-07 | |
Wound staple | Fisher | 12031-07 |