एक तेजी से, की पीढ़ी के लिए सरल और लागत प्रभावी प्रोटोकॉल दाता व्युत्पन्न सीएमवी अभिभाषक, या EBV संक्रमण के विकास के जोखिम में allogeneic hematopoietic स्टेम कोशिका प्रत्यारोपण (HSCT) प्राप्तकर्ताओं के लिए जलसेक लिए multivirus विशिष्ट CTLs (rCTL). यह विनिर्माण प्रक्रिया जीएमपी अनुरूप है और टी सेल immunotherapy के विशेष केंद्रों से परे व्यापक कार्यान्वयन सुनिश्चित करना चाहिए.
वायरल संक्रमण allogeneic hematopoietic स्टेम सेल (HSCT) के प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं में रुग्णता और मृत्यु दर के कारण. हम और दूसरों को सफलतापूर्वक उत्पन्न किया है और टी कोशिकाओं Epstein बर्र वायरस (EBV) cytomegalovirus (सीएमवी) और (Adv) Adenovirus monocytes और उपयोग के लिए विशिष्ट संचार EBV से बदल lymphoblastoid सेल (EBV से LCL) जीन एक adenovirus वेक्टर के साथ के रूप में संशोधित प्रतिजन कोशिकाओं (APCs). कुछ 2×10 5 किग्रा / trivirus विशेष साइटोटोक्सिक टी lymphocytes (सीटीएल) जलसेक के बाद कई लॉग द्वारा proliferated है और रोकने के लिए और अन्य उपलब्ध उपचार के लिए प्रतिरोधी भी गंभीर वायरल रोग का इलाज दिखाई . तैयारी के लिए यह उत्साहजनक दृष्टिकोण के व्यापक कार्यान्वयन उच्च उत्पादन लागत, निर्माण की जटिलता और लंबे समय (कुल 10-14 सप्ताह EBV से LCL पीढ़ी है, और सीटीएल निर्माण के लिए 4-8 सप्ताह के लिए 4-6 सप्ताह) के द्वारा सीमित है. इन सीमाओं को पार करने के लिए हम एक नया, जीएमपी अनुरूप सीटीएल उत्पादन प्रोटोकॉल विकसित किया है. सबसे पहले, टी कोशिकाओं हम वृक्ष के समान कोशिकाओं (DCS) प्रतिजन के रूप में पेश डीएनए plasmids एन्कोडिंग LMP2 EBNA1 और BZLF1 (EBV), Hexon और Penton (Adv), और pp65 और IE1 (सीएमवी) के साथ nucleofected उपयोग को प्रोत्साहित करने के लिए adenovectors की जगह कोशिकाओं. ये APCs टी कोशिकाओं सभी उत्तेजक प्रतिजनों के लिए विशिष्ट पुन: सक्रिय. दूसरा, संस्कृति की उपस्थिति आईएल-4 में टी कोशिकाओं को सक्रिय (1,000 यू / मिली) और आईएल 7 (10ng/ml) बढ़ जाती है और हमारे लाइनों में प्रदर्शनों की सूची और विशेष टी कोशिकाओं की आवृत्ति को बनाए. तीसरा, हम एक नया, गैस पारगम्य संस्कृति (जी Rex) युक्ति है कि एक एकल उत्तेजना के बाद और बड़े सेल नंबर के विस्तार के अस्तित्व को बढ़ावा देता है, इस प्रकार EBV से LCLS के लिए आवश्यकता को हटाने और तकनीशियन हस्तक्षेप को कम करने का इस्तेमाल किया है. इन परिवर्तनों को लागू करने से अब हम multispecific सीटीएल 10 6 कोशिकाओं है कि> 90% से कम है प्रति एक कीमत पर EBV, सीएमवी, और अभिभाषक लक्ष्यीकरण का उत्पादन कर सकते हैं और सिर्फ 10 के बजाय दिन 10 हफ्तों के एक दृष्टिकोण है कि अतिरिक्त तक बढ़ाया जा सकता का उपयोग सुरक्षात्मक वायरल प्रतिजनों. हमारे एफडीए को मंजूरी दी दृष्टिकोण उच्च जोखिम allogeneic HSCT प्राप्तकर्ताओं के लिए रोगनिरोधी और उपचार अनुप्रयोगों के लिए मूल्य का होना चाहिए.
वायरल संक्रमण पर्याप्त और रोगियों को जो उनके रोग या उसके उपचार द्वारा immunocompromised कर रहे हैं में रुग्णता और मृत्यु दर के लिए खाते. HSCT के बाद, उदाहरण के लिए, जैसे EBV और सीएमवी के रूप में के रूप में अच्छी तरह से श्वसन syncytial वायरस (RSV) के रूप में श्वसन वायरस के द्वारा लगातार herpesviruses की वजह से संक्रमण, ठीक है, जाना जाता है, जबकि अभिभाषक, बीके वायरस की वजह से संक्रमण के महत्व है, और मानव herpesvirus (HHV) -6 और अधिक हाल ही में सराहना किया गया है. जबकि औषधीय एजेंटों कुछ संक्रमण के लिए मानक चिकित्सा कर रहे हैं वे पर्याप्त toxicities है, प्रतिरोधी वेरिएंट उत्पन्न है, और अक्सर अप्रभावी कर रहे हैं. इसके विपरीत, वायरस विशेष टी कोशिकाओं को स्टेम सेल दाताओं से प्राप्त hemopoietic स्टेम सेल प्रत्यारोपण में वायरल संक्रमण या रोग (HSCT) 2,5,6,18-21 सेटिंग की रोकथाम और उपचार के लिए सुरक्षित और प्रभावी सिद्ध कर दिया है . हालांकि, टी सेल immunotherapy की व्यापक कार्यान्वयन अंततः लागत और जटिलता, और समय सीटीएल के उत्पादन के लिए आवश्यक के द्वारा सीमित है.
हमारी उपन्यास और तेजी से दृष्टिकोण multivirus सीटीएल, वर्तमान पांडुलिपि में वर्णित है, उत्पन्न काफी वायरल रोगों के लिए साइटोटोक्सिक टी सेल थेरेपी की व्यवहार्यता बढ़ाने के लिए, रणनीति immunocompromised की मेजबानी के लिए देखभाल के एक मानक बन सक्षम होना चाहिए. APCs के रूप में प्लाज्मिड nucleofected DCs के प्रयोग दोनों MHC वर्ग मैं और द्वितीय को प्रतिजन प्रस्तुति वायरल या वैक्टर वास्तव में एक एकल कोशिका के भीतर व्यक्त किया जा रहा है के बाद से अलग डीसी आबादी के लिए प्रत्येक प्लाज्मिड 3 का उपयोग कर रहे हैं कई वायरल प्रतिजनों से से प्रतिस्पर्धा के बिना सक्षम बनाता है. / आईएल 4 7 बढ़ जाती है टी सेल अस्तित्व और प्रसार, जो तदनुसार आवृत्ति और प्रतिजन विशेष टी कोशिकाओं का जवाब 16,17 प्रदर्शनों की सूची को बढ़ाने में मदद करता है का उपयोग करें. अंत में, जी Rex संस्कृति में नाटकीय रूप से संस्कृति के दौरान टी सेल apoptosis को कम कर देता है. गैस मुद्रा (2 हे और सीओ 2 के बाहर) एक गैस पारगम्य सिलिकॉन झिल्ली भर फ्लास्क के आधार पर होता है, जबकि कक्षों के ऊपर एक मध्यम की अधिक गहराई की अनुमति hypoxia रोकने, अधिक पोषक तत्वों प्रदान और अपशिष्ट उत्पादों गिराए. यह मंच भी जब सुरक्षात्मक प्रतिजनों की पहचान कर रहे हैं के रूप में अतिरिक्त वायरस के लिए बढ़ाया जा सकता है है.
The authors have nothing to disclose.
इस काम के सेलुलर (अनुबंध एनआईएच (एचबी-10-03)-NHLBI HHSN26820100000C) चिकित्सा (सी एम आर), सेल आधारित थेरेपी के लिए एक विशिष्ट केंद्र के लिए एक उत्पादन सहायता के द्वारा समर्थित है एनआईएच NHLBI अनुदान U54 HL081007 1 (सी एम आर), एक ASBMT युवा अन्वेषक पुरस्कार (यूजी और जेवी), क्लीनिकल रिसर्च अवार्ड (यूजी) में लेकिमिया और लिंफोमा सोसायटी विशेष फैलो, और एक एमी Strelzer Manasevit विद्वान पुरस्कार (एएमएल).
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
---|---|---|
CellGenix | CellGenix | 2005 |
IL4 | R+D Systems | 204-IL/CF |
IL7 | Peprotech | 200-15 |
Hyclone RPMI 1640 | Thermo Scientific | SH30096.01 |
Human AB serum | Valley Biomedical Inc. | HP1022 |
Nucleofector | Amaxa/Lonza | AAF-1001B & AAF-1001X |
Nucleofection Kit | Amaxa/Lonza | V4XP-3012 |
Plasmids | NTC | n/a |
GM-CSF | R&D | 215-GM/CF |
IL1 | R&D | 201-LB-025 |
IL6 | R&D | 206-IL-CF |
TNFα | R&D | 210-TA-010 |
PGE2 | Sigma | P6532-1MG |
G-Rex | Wilson Wolf Manufacturing | AY11-00027 |