Summary
אינדוקציה אלקטרוליטי של הפעלת האנדותל אל פני השטח הפנימי של תוצאות הנבוב נחותים קאווה להיווצרות סוג ורידי פקיק עקב הפעלת האנדותל בדם קיפאון חלקי, שני מרכיבים של השלישיה של וירצ'וב.
Abstract
במודלים של בעלי חיים משמשים תפקיד חיוני פקקת עמוקה מחקר (DVT) ורידי כדי ללמוד היווצרות פקיק, ברזולוציה פקיק ולבחון תרכובות טיפולית פוטנציאל (1). תרכובות חדשות כדי להיות מנוצל לטיפול ומניעת DVT נמצאים כעת בשלבי פיתוח. מסירת פוטנציאל תרכובות אנטגוניסט טיפולית וריד פקוק מושפע כבר בעייתי. בהקשר של יישומים טיפולית, מודל המשתמשת חלקית קיפאון ובעקביות מייצר thrombi בתוך וריד מרכזי הוקם לאחרונה. אלקטרוליטי נחותים הווריד הנבוב Model (EIM) היא במודל עכבר של DVT המאפשר היווצרות פקיק בנוכחות של זרימת דם רציפה. מודל זה מאפשר סוכני טיפולית להיות בקשר עם פקיק באופן דינמי, הוא רגיש יותר מאשר דגמים אחרים של DVT (1). בנוסף, מודל זה פקקת מקרוב המדמה מצבים קליניים של היווצרות פקיק והוא אידיאלי ללמוד תא האנדותל ורידי ההפעלה, הגירה ליקוציט, thrombogenesis ורידי, וכן כדי לבחון יישומים טיפולית (1). המודל EIM היא פשוטה מבחינה טכנית, לשחזור בקלות, יוצר עקבי בגדלים thrombi ומאפשר מדגם גדול (כלומר פקיק קיר וריד) אשר נדרש למטרות אנליטיות.
Protocol
1. עכבר פרוצדורות הרדמה
- בעלי חיים יוסרו מן הכלוב שלהם והניחו בתא טרום ניתוחית בהרדמה אינדוקציה לזירוז גז 2% isoflurane ו 100% חמצן בקצב זרימה של 0.5 ליטר לדקה (מאדה מבוקר).
- עכברים הם מסומם בחדר אינדוקציה הרדמה, להסיר קאמרית הבטן הגחון הוא מגולח עם קוצץ חשמלי, או לשמור בתוך החדר אם מקריח שיער משמש (1 דקות).
- אמנם עדיין תחת סדציה, הם שקלו, העיניים משומנים עם משחה עיניים סטרילי, ואז הניח על מכשיר מים חמים במחזור חימום recumbancy הגב תחת הרדמה כללית עם חרוט האף באמצעות isoflurane וחמצן. בשלב זה בשיעור מופחת חמצן 0.2 ליטר לדקה.
- הבטן הוא ריסס עם פתרון chlorhexidine (diacetate chlorhexidine הוא bacterialcidal במהירות קבועה) וקינח עם גזה סטרילית שלוש פעמים או עד אתר כירורגי נקי.
2. עכבר מיקרו כירורגי ונהלים Recovery
- חתך קו האמצע הגחוני (2 ס"מ) הוא עשה עם איריס מספריים דרך העור ואת דופן הבטן לחשוף את הבטן. 2x2 סטרילית ספוגה מלח גזה משמש כדי לשקף את המעיים אל הצד השמאלי של החיה. עוצר העכבר לשים להדמיה מקום המאפשר של נחות הווריד הנבוב (IVC).
- בשלב זה, isoflurane מצטמצם לרמת התחזוקה של 2% ושיעור חמצן נשאר 0.2 ליטר לדקה עד סוף ההליך הכירורגי.
- דיסקציה בלאנט הוא הקל באמצעות ספוגית המוליך סטרילית עדינה במיוחד איריס מעוקל half מלקחיים רקמות. יש להקפיד בטיפול ברקמות העכבר כי הם שבירים מאוד.
- סניפי כל צד IVC, מן הוורידים כליות אל הסתעפות הכסל, הם ligated עם 7-0 לא מגיב התפרים prolene. ענפים חזרה נשאר פטנט.
- ב-IVC מודל אלקטרוליטי (EIM), מחט 25 גרם נירוסטה, המצורפת חוטי נחושת מצופה כסף (KY-30-1-GRN, Electrospec, דובר, ניו ג'רזי) מוכנס לתוך החשוף הזנב IVC, (איור 1) ואת מיקומו על הקיר הקדמי (האנודה).
- חוט נוסף הוא מושתל מתחת לעור השלמת מעגל (קטודה).
- הנוכחי של 250 μAmps מעל 15 דקות היה מיושם באמצעות S48 גראס גל מרובע ממריץ ויחידת זרם קבוע (טכנולוגיות דשא, Astro-Med, Inc, West Warwick, RI). התוצאות הנוכחיות ישיר להיווצרות של מוצרים רעילים של אלקטרוליזה כי לשחוק את פני האנדותל של IVC לקידום סביבה thrombogenic היווצרות פקיק הבאים.
- לאחר 15 דקות, המחט מוסרת ו ספוגית כותנה מוחזק בעדינות את האזור כדי למנוע דימום במגע
- אצל בעלי חיים מזויפים, המחט ממוקם לתוך IVC והוציאו אז, ללא יישום של הנוכחי.
- האתר laparotomy סגור באופן דו שכבה. המעבדה שלנו משתמשת 5-0 vicryl, תפר סינתטיים, דפוס מתמשך כדי לסגור את דופן הבטן. דבק דבק העור משמש כדי לסגור את העור. אין תפרים חיצוניים להסרה.
- עכברים הם התאוששו אז בכלוב עכבר בודדים, נצפו מקרוב שלאחר הניתוח (45 דקות עד 2 שעות) תחת מנורת חימום (מרחק 24 דקות סנטימטרים ספורים כלוב), ואז חזר יחידות דיור המקורי שלהם. משככי כאבים ואנטי דלקתיים יכולים לשמש אם זה לא מפריע מטרת המחקר. ההצדקה המדעית לעכב בתרופות לשיכוך כאבים, וטרינרי, ואישור ICUCA נדרשים. המעבדה שלנו מצא כי עצירות ,0.05-0 0.1 מ"ג / ק"ג SQ הוא משכך כאבים לפני ואחרי הניתוח מצוין עכברים. בנוסף, לידוקאין ב 4mg/kg (0.4 מ"ל / ק"ג של פתרון 1%) יכול להיות חדורים באתר חתך כאשר משככי כאבים מערכתית עשויה לבלבל תוצאות הניסוי.
- אנחנו בדרך כלל לא חווים שלאחר הניתוח תופעות לוואי בשל DVT. עם זאת, תופעות לוואי שלאחר הניתוח יכול לכלול השפעות המוות הרדמה ספונטנית, איבוד דם כירורגית, ו paresis חלקית עקב הטראומה עצב. בעלי חיים הם איטיים כדי להתאושש יכול להיות מוזן נוטריה ג'ל או לח האוכל מונח על הרצפה של הכלוב כדי להקל על ההתאוששות של החיה. בעלי חיים עם סיבוכים שלאחר הניתוח לנתק צריך להיות מורדמים אנושי.
- בנקודת זמן מוקצה, המתת החסד מבוצעת אנושי בהתאם להמלצות שנקבעו על ידי הנחיות איגוד הרפואה האמריקני וטרינרית על המתת חסד של מכרסמים.
3. נציג תוצאות
EIM הוא מודל לצורות פקיק בנוכחות של זרימת דם רציפה. התמונות הבאות מציגות פרמטרים נחקר במודל זה רומן.
איור 1 באזור אנטומי שבו definesthe ב 25 גרם נירוסטהמחט, חוט נחושת המחובר כסף מצופה (KY-30-1-GRN, Electrospec, דובר, ניו ג'רזי) מוכנס. שים לב הצומת הלימפה קיים כמעט ומסייע כציון דרך כדי למצוא את IVC הזנב.
איור 2: משקל פקיק 2 ימים לאחר EIM של זנים שונים. כצפוי, משקל פקיק היה נמוך ב PAI-1 עכברים KO ו גדול קרישיות יתר דלתא CT עכברים (^ CT).
איור 3: מסיסים P-selectin, יצרנית של פקקת ורידים עמוקה, נמדדה זנים שונים. הרמות הנמוכות ביותר נמצאו PAI-1 עכברים KO ואילו את הרמות הגבוהות ביותר נמצאו אצל עכברים דלתא קרישיות יתר CT.
איור 4 הקשר בין משקל פקיק מסיס ו-P-selectin נמצא זנים שונים. יש לציין, בקבוצה שהפיק את גודל פקיק קצר, מסיסים P-selectin זוהה היה הנמוך ביותר (PAI-1 עכברים KO). בקבוצת שהפיק את גודל פקיק הגדולה ביותר, מסיס P-selectin זוהה היה הגבוה ביותר (קרישיות יתר דלתא CT).
איור 5: על מנת להפגין נוכחות של זרימת דם, אולטרסאונד בוצע בעכברים שעברו EIM. איור 5 מראה את אולטרסאונד שבוצעו עכבר 2 ימים לאחר EIM. לאחר מכן הדגימה היה הקציר. שים לב כי צורת פקיק מציע היווצרות פקיק בנוכחות זרימה
Discussion
העכבר הוא כלי מעולה עבור מחקר בניסויים vivo. לפיכך, פיתוח של מודלים העכבר מקרוב לחקות מחלות או מצבים פתולוגיים הדרושים. מספר פקקת ורידים מודלים העכבר שימשו במחקר DVT כולל: פוטו (2), קיפאון (3-4) וטראומה מכני (5-6). עם זאת, אף אחד מן המודלים האלה משתמשים גירוי האנדותל הפנימי ליצור פקיק בנוכחות של זרימת דם רציפה. EIM, באמצעות גירוי אלקטרוליטי בתוך IVC, מקדם thrombogenesis ורידי ידי הפעלת אנדותל בנוכחות של זרימת הדם (1). זה פשוט מבחינה טכנית, לשחזור בקלות יש שיעור הישרדות גבוה (99%). למרות העובדה כי זרם חשמלי המשמש ליצירת אלקטרוליזה, חום לא נוצר (1). המודל EIM מקרוב המדמה DVT קליניים, ולכן משמש ככלי חשוב לחקר מנגנונים פנימיים של היווצרות ברזולוציה פקיק ו. המודל EIM שימושי גם לקידום גישות טיפוליות חדשות כנגד מחלת פקקת.
Disclosures
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
Acknowledgments
נתמך על ידי NIH 1P01HL089407-01A1 (לורנס, PI), בעלי חיים Core, NIH 1 HL080962 K01-01A2 (מאיירס, PI).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | Invitrogen | ABCD1234 |
References
- Diaz, J. A., Hawley, A. E., Alvarado, C. M. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104, 366-375 (2010).
- Eitzman, D. T., Westrick, R. J., Nabel, E. G. Plasminogen activator inhibitor-1 and vitronectin promote vascular thrombosis in mice. Blood. 95, 577-580 (2000).
- Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
- Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
- Pierangeli, S. S., Barker, J. H., Stikovac, D. Effect of human IgG antiphospholipid antibodies on an in vivo thrombosis model in mice. Thromb Haemost. 71, 670-674 (1994).
- Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74, 1361-1367 (1995).
