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Medicine

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델

Published: June 15, 2011 doi: 10.3791/2738

Summary

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 전체 스태시스 모델은 정맥 벽 조직 및 혈전의 같지는 금액을 산출. 이것은 정맥 벽과 occlusive 혈전 사이에 만성 염증으로 급성에서 진행을 평가 상호 작용을 평가하기위한 유용한 입증되었습니다.

Abstract

정맥 thromboembolism (VTE)은 깊은 정맥 혈전증 (DVT)과 폐 색전증 (PE) 모두를 포함합니다. 미국 (미국), 높은 병적 상태와 사망률에 요금은 심각한 건강 관심사 1-2 VTE합니다. 심장 질환과 뇌졸중 후 VTE는 세 번째 가장 일반적인 혈관 질환 3. 혼자 미국에서는, 매년 영향을 추정 90만명은 300,000 사망자가 연간 3 발생과 함께있다. 이 질병의 메커니즘을 연구 생체내 동물 모델에서 신뢰성이 필요합니다.

하부 대정 맥 혈전증의 마우스 전체 스태시스 모델을 사용하는 장점은 몇 가지 있습니다. 마우스 모델은 극적으로 비용을 절감, 제한된 가용성 테스트 에이전트의 아주 작은 볼륨 관리를위한 수 있습니다. 대부분의 유망 구체적인 염증과 응고 인자의 기능을 delineated 수 있도록 유전자 knockouts와 마우스에 대한 가능성이 있습니다. 현재 분자 assays은 정맥 벽, 혈전, 전체 혈액 및 assays를위한 플라즈마의 quantitation를위한 수 있습니다. 그러나,이 모델과 관련된 주요 관심사는 수술 크기 제약과 혈관의 취쇄성입니다. 또한, 작은 IVC 샘플 무게 (0.005 g을 의미)로 인해이 같은 실시간 중합 효소의 연쇄 반응 (RT - PCR), 서양 얼룩 같은 동물 조직에 대한 정확한 통계 분석을 위해 숫자, 혈전과 혈액 assays을 높일 필요가 있습니다 효소 링크된 면역 (엘리사), zymography, 정맥 벽 및 혈전 셀룰러 분석하고, 전체 혈액 및 플라즈마 assays 4-8.

스테이시 모델의 주요 단점은 혈액 흐름의 부족은 혈전과 정맥 벽에 관리 체계 치료 대리인의 최대한의 효과를 억제한다는 것입니다.

Protocol

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1. 마우스 아나스타샤 절차

  1. 동물은 분당 0.5 리터 (기화기 제어)의 유속에서 자신의 케이지에서 제거하고 5% isoflurane과 100 % 산소로 가스 유도를위한 마취 미리 수술 유도 챔버에 배치됩니다.
  2. 생쥐는 마취 유도 챔버에서 진정 챔버에서 제거하고 머리 depilatory가 (1min) 사용되는 경우 복부 복부는 전기 면도기로 면도, 또는 챔버 내에 유지집니다.
  3. 아직 진정제를 맞았 는데도, 그들은 무게가 있지만, 내 눈을는 isoflurane과 산소를​​ 사용, 코 콘과 살균 안과 연고와 윤활 후 전신 마취 하에서 가열 장치를 순환 따뜻한 물 등의 recumbancy에 배치됩니다. 이 시점에서 산소 요금은 분당 0.2 리터로 축소됩니다.
  4. 복부는 chlorhexidine 솔루션을 뿌려놓은 (chlorhexidine의 디아 세 테이트 빠르게 bacterialcidal 및 영구이다) 및 멸균 거즈로 세 번 닦아 또는 외과 사이트 깨끗한까지입니다.

2. 마우스 미세 수술 및 복구 절차

  1. 복부 정중선 절개 (2cm)은 복부를 노출 피부와 복벽을 통해 홍채 가위로 이루어집니다. 멸균 생리 젖었 2x2in의 거즈는 동물의 왼쪽에 장내를 반영하는 데 사용됩니다. 마우스 restrainer는 하부 대정 맥 (IVC)의 장소 있도록 시각화에 들어가게된다.
  2. 이 시점에서, 2 % 및 0.2 리터 isoflurance / 분 100 % 산소 비율의 유지 보수 수준은 수술의 나머지 부분에 사용됩니다.
  3. 무딘 절개는 살균 작은 주걱의 면봉과 별도의 섬세한 홍채 절반 곡선 조직 집게를 사용하여 용이합니다. 관리들은 매우되기 위해 마우스 조직 처리로 촬영해야합니다. 복강을 입력시, 따라서 IVC의 시각화를 허용, 살균 드레이프로 창자를 반영하고 외면 화하다에 대한 멸균 생리 젖었 4x4in의 거즈를 사용합니다.
  4. 사이드 지점이 7-0 반응 prolene의 봉합과 출혈도 잡았하는 동안 신장 혈관에서 장골의의 분기점 모든 IVC 뒤로 지점은, 불로 지졌죠 있습니다.
  5. IVC는 신장 혈관 단 열등, 대동맥에서 분리됩니다. 7-0 prolene는 IVC를 ligate하는 데 사용됩니다.
  6. 개복술 사이트는 2 계층 방식으로 닫힙니다. 우리 연구실은 복벽을 닫습니다 지속적인 패턴에 5-0 vicryl, 합성 봉합사를 사용합니다. 접착제 피부 접착제는 피부를 닫습하는 데 사용됩니다. 제거에 대한 외부 봉합이 없습니다.
  7. 마우스가 다음 각 마우스 케이지에서 발견되며, 가열 램프 (최소 거리 - 24인치 거리 케이지에서)에서 (2 시간 45 분) 후 operatively 관찰 후, 원래의 주택으로 돌아왔습니다. 그것이 연구 목적을 방해하지 않는 경우 진통제 및 안티 - 염증성 에이전트를 사용할 수 있습니다. 과학 고통 약품을 보류 칭의, 동물, 그리고 ICUCA의 승인이 필요합니다. 저희 연구실은 Buprenorphine, 0.05-0.1 MG / kg SQ 쥐를위한 훌륭한 사전 및 사후 수술 진통 것을 발견했습니다. 또한, 4mg/kg (0.4 ML / 1 %의 솔루션의 kg)에 Lidocaine는 체계적인 진통제가 실험 결과를 혼란시킬 수있다 때 절개 사이트에 들어갈 수 있습니다.
  8. 각 실험 그룹에서 위장 동물 IVC 또는 배수 지점 출혈도 잡았거나 불로 지졌죠하지 제외하고는 수술 접근에 사용되는 위의 절개를 받고있다.
  9. 안락사는 설치류 동물에 대한 안락사에 미국 베티 의사회 가이드에 명시된 권장 사항에 따라 수행됩니다.

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Discussion

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하부 대정 맥 혈전증의 마우스 완전한 스테이 시스 모델은 다양한 연령의 마우스의 여러 변종을 수행할 수 있습니다. 모델은 대부분의 무게가 최소한 20g의 마우스에 적합합니다. 정맥 혈전증의이 동물 모델은 조사관이 정맥 벽 및 occlusive 정맥 혈전 간의 염증 상호 작용을 공부하실 수 있습니다. 우리의 경험에서, 우리는 그룹 당 10 명 이상 동물이 혈전 무게, 정맥 벽 염증성 세포 카운트, 정맥 벽 단백질, 정맥 벽 유전자 표현 및 활동에 대한 전체 혈액이나 혈장 분석에 대한 집단 간의 통계적 중요성을 얻기 위해 필요한 것으로 나타났습니다 assays.

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Disclosures

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Isoflurane gas
Prolene 7-0 suture
Vicryl 5-0 suture
Skin glue
Eye lube
Nolvasan Solution or bacteriostatic solution
Stereomicroscope scope
MediCapture
Cotton Applicators
2x2 Gauze
Heating pad
Anesthetic machine
Glass bead instrument sterilizer
Micro surgical instruments
Abdominal Restrainers

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References

  1. Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
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  3. Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).
  4. Henke, P. K., Varga, A., De, S. Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).
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Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers Jr., D. D., Wakefield, T. W. Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis. J. Vis. Exp. (52), e2738, doi:10.3791/2738 (2011).More

Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers Jr., D. D., Wakefield, T. W. Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis. J. Vis. Exp. (52), e2738, doi:10.3791/2738 (2011).

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