Summary
De muis volledige stase model van de vena cava inferior trombose levert kwantificeerbare hoeveelheden aderwand weefsel en trombus. Het is nuttig gebleken voor het evalueren van interacties tussen de ader muur en de occlusieve trombus en bij de beoordeling van de progressie van acute naar chronische ontsteking.
Abstract
Veneuze trombo-embolie (VTE) omvat zowel diepe veneuze trombose (DVT) en longembolie (PE). In de Verenigde Staten (VS), de hoge morbiditeit en mortaliteit te maken VTE een serieus gezondheidsprobleem 1-2. Na hart-en vaatziekten en beroertes, VTE is de derde meest voorkomende vasculaire ziekte 3. In de VS alleen, er is een naar schatting 900.000 mensen die lijden elk jaar met 300.000 sterfgevallen die jaarlijks 3. Een betrouwbare in-vivo diermodel om de mechanismen van deze ziekte onderzoek nodig is.
De voordelen van het gebruik van de muis compleet stasis model van de vena cava inferior trombose zijn meerdere. De muis-model zorgt voor de toediening van zeer kleine hoeveelheden van de beperkte beschikbaarheid te testen stoffen, het verminderen van de kosten dramatisch. Meest veelbelovend is het potentieel voor muizen met gen-knockouts die het mogelijk maken specifieke ontstekings-en stollingsfactor functies worden afgebakend. Huidige moleculaire testen zorgen voor de kwantificering van ader muur, trombose, volbloed en plasma voor assays. Echter, een grote zorg met betrekking tot dit model is de operatieve grootte van beperkingen en de brosheid van de schepen. Ook vanwege de kleine steekproef IVC gewicht (gemiddeld 0.005 gram) is het noodzakelijk om het aantal dieren aan nauwkeurige statistische analyse voor weefsel, trombose, en bloed testen, zoals real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot te verhogen, enzym-linked immunosorbent (ELISA), zymografie, ader wand-en trombus cellulaire analyse, en vol bloed en plasma assays 4-8.
Het grote nadeel van de stasis model is dat het ontbreken van de bloedstroom het maximale effect van de toegediende systemische therapeutische middelen op de trombus en aderwand remt.
Protocol
1. Muis Anesthesie Procedures
- Dieren uit hun kooi en geplaatst in een verdovingsmiddel pre-operatieve inductie kamer voor gas inductie bij 5% isofluraan en 100% zuurstof, bij een debiet van 0,5 liter per minuut (vaporizer gecontroleerd).
- Muizen worden verdoofd in de verdoving inductie kamer, verwijderd van kamer en het ventrale buik wordt geschoren met de tondeuse, of onderhouden in de kamer als een haar ontharingscrème wordt gebruikt (1min).
- Hoewel nog steeds onder sedatie, ze zijn gewogen, zijn de ogen gesmeerd met steriele oogzalf en vervolgens geplaatst in een dorsale recumbancy op een warm water circuleert apparatuur voor verwarming van onder algehele narcose, met een neus, met behulp van isofluraan en zuurstof. Op dit punt de zuurstof tarief wordt verlaagd tot 0,2 liter per minuut.
- De buik is bespoten met chloorhexidine-oplossing (chloorhexidine diacetaat wordt snel bacterialcidal en persistent) en veegde met een steriel gaasje drie keer of totdat de operatiewond schoon is.
2. Muis Micro-chirurgische en recovery procedures
- Een ventrale middellijn incisie (2cm) wordt gemaakt met iris schaar door de huid en de buikwand het blootstellen van de buik. Een steriele zoutoplossing gedrenkte 2x2in gaas wordt gebruikt om de darmen naar links van het dier kant weer te geven. Een muis restrainer is opgezet zodat visualisatie van de vena cava inferior (IVC).
- Op dit punt, is een onderhouds-niveau van 2% isoflurance en 100% zuurstof van 0,2 liter / min wordt gebruikt voor de rest van de chirurgische procedure.
- Stompe dissectie wordt vergemakkelijkt met een steriele applicator staafje en een extra delicate iris half gebogen weefsel tang. Voorzichtigheid is geboden bij het hanteren muisweefsels want ze zijn uiterst kwetsbaar. Bij het binnenkomen van de buikholte, gebruik dan een steriele zoutoplossing gedrenkte 4x4in gaas om na te denken en exterioriseren de darmen op een steriel laken, waardoor visualisatie van het IVC.
- Alle IVC terug branches, van de renale aderen naar de iliacale bifurcatie, worden dichtgeschroeid terwijl de zijtakken zijn geligeerd met 7-0 niet-reactief prolene hechtingen.
- Het IVC is gescheiden van de aorta, gewoon inferieur aan de nier aderen. 7-0 prolene wordt gebruikt om de IVC ligeren.
- De laparotomie site is gesloten in een twee-lagen mode. Ons laboratorium maakt gebruik van 5-0 Vicryl, een synthetisch hechtdraad, in een doorlopend patroon af te sluiten van de buikwand. Adhesive huidlijm wordt gebruikt om de huid te sluiten. Er zijn geen externe hechtingen voor verwijdering.
- Muizen worden dan teruggevonden in een individuele muizenkooi, waargenomen na operatie (45 minuten tot 2 uur) onder een warmtelamp (minimale afstand 24-inch uit de buurt van kooi), keerde daarna terug naar hun oorspronkelijke woningen. Pijnstillers en anti-inflammatoire middelen kunnen worden gebruikt als het niet interfereert met studie doelstelling. Wetenschappelijke redenen om pijnstillers te weigeren, veterinaire en ICUCA goedkeuring nodig zijn. Ons laboratorium heeft uitgewezen dat Buprenorfine, 0.05-0.1 mg / kg SQ is een uitstekende pre-en post-operatieve analgeticum voor muizen. Bovendien kan Lidocaïne op 4mg/kg (0,4 ml / kg van een 1% oplossing) worden toegediend in de incisie site wanneer systemische analgetica kan experimentele resultaten verwarren.
- Sham dieren uit elke experimentele groep ondergaat de bovenstaande dissectie gebruikt voor de chirurgische benadering, met uitzondering van het IVC of een drainerende vestigingen zijn niet afgebonden of dichtgeschroeid.
- Euthanasie wordt uitgevoerd in overeenstemming met de aanbevelingen uiteengezet door de American Veterinary Medical Association richtsnoeren inzake Euthanasie voor knaagdieren in te stellen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De muis complete Stasis Model van Inferior Vena Cava Trombose kan worden uitgevoerd op meerdere stammen van muizen van verschillende leeftijden. Het model is het meest geschikt is voor muizen van minstens 20 gram in gewicht. Dit dier model van veneuze trombose kunnen onderzoekers bestuderen inflammatoire interacties tussen de ader wand en de occlusieve veneuze trombus. Vanuit onze ervaring hebben we gemerkt dat 10 of meer dieren per groep nodig zijn om statistische significantie te verkrijgen tussen de groepen voor thrombus gewichten, aderwand inflammatoire cellen, aderwand eiwit, aderwand genexpressie, en de volbloed of plasma-analyse voor activiteit assays.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Geen belangenconflicten verklaard.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane gas | |||
| Prolene 7-0 suture | |||
| Vicryl 5-0 suture | |||
| Skin glue | |||
| Eye lube | |||
| Nolvasan Solution or bacteriostatic solution | |||
| Stereomicroscope scope | |||
| MediCapture | |||
| Cotton Applicators | |||
| 2x2 Gauze | |||
| Heating pad | |||
| Anesthetic machine | |||
| Glass bead instrument sterilizer | |||
| Micro surgical instruments | |||
| Abdominal Restrainers |
References
- Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study. J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).
- White, R. H., Keenan, C. R. Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism. Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).
- Heit, J. A. The epidemiology of venous thromboembolism in the community. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).
- Henke, P. K., Varga, A., De, S. Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).
- McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis. Thromb Res. 125, 72-78 (2010).
- Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
- Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
- Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin. J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).
