植入前胚胎可冷冻保存,放置到一个高渗cryoprotective溶液后,引起细胞脱水。平衡后,冰晶体的形成是诱导胚胎周围的解决方案。进一步脱水发生胚胎慢慢冷却到零度以下的温度中,前陷入液氮存储。
短期或长期贮存,牛,绵羊和山羊的胚胎植入前胚胎可冷冻保存。植入前胚胎细胞主要由水组成,并避免在冷冻保存过程中细胞内冰晶的形成极为重要,以维持胚胎的可行性。胚胎放入一个高渗溶液(1.4 – 1.5米)一个cryoprotective剂,如乙二醇(EG)或甘油(甘油)创建一个渗透梯度,促进细胞脱水(注册会计师)。后胚胎在注册会计师行业的解决方案达到渗透平衡,它们分别加载在高渗注册会计师解决冻结到0.25毫升的塑料吸管。一个控制率冷冻胚胎放入温度-6 ° C。冰晶体的形成是诱发注册会计师围绕胚胎的解决方案,并结晶,导致胚胎以外的注册会计师的浓度增加,导致进一步的细胞脱水。胚胎在0.5 ° C /分钟的速度冷却,使进一步脱水,前暴跌到液氮(-196℃)温度为-34 ° C。必须冻存胚胎解冻前转移到一个收件人(代孕)的女性。秸秆含有胚胎从液氮杜瓦在3至5秒的高温空气室举行,并放置到37℃水浴25至30秒。胚胎冷冻保存在甘油放在取消注册会计师,然后才转移到收件人(代理)女性为10分钟到1米的蔗糖解决方案。 EG中冻存的胚胎,但是,可能会直接传送到收件人的子宫。
因为胚胎主要由水组成的,至关重要的是,植入前胚胎充分脱水,慢慢冷却按照协议本文所述,以避免细胞内冰晶的形成。一旦冷却过程已经开始,重要的是保持单向的温度变化,并避免温度波动。冰晶体的形成,在适宜的温度为注册会计师的具体解决方案(“播种”)的启动是至关重要的。
这种缓慢的冷却/快速解冻植入前胚胎冷冻保存的方法进行修改,包括一个步骤方法(其中的介质装入稻草的最后一列是蔗糖,而不是会计师事务所的解决方案)第19条和直接传输方法(乙二醇冷冻胚胎解冻,并直接传送到收件人的女性的子宫,而无需首先去除乙二醇的胚胎)20。为了减少乙二醇量沉积的直接转移(DT)收件人女性子宫,最好是6厘米,然后再继续如前所述介质填充的0.25毫升的稻草。应该指出的是一个自愿性标准范围内的商业,植入前胚胎冷冻保存为DT,应冻结黄色秸秆和储存在液态氮杜瓦黄色高脚杯中的胚胎移植产业存在。商业界也有具体的标签要求,对所有应遵循的冻存胚胎。
这种方法的一个替代 21玻璃化冷冻,冷冻保存的地方,更高度集中(6-8 M)会计师事务所的解决方案是超快速冷却,使注册会计师的解决方案,变更,恕不另行冰从液态到一个“玻璃”的状态非平衡的方法晶体的形成。玻璃化冷冻保存的胚胎发育比先进的紧凑桑椹由于其对温度的敏感性增加很可能更适合。
这种技术的应用程序保存独特的种质资源22,以及国际商业胚胎移植产业超过55%,约50万牛胚胎植入前胚胎转移在2008 日历年的23冻存。
The authors have nothing to disclose.
从美国农业部的多国研究项目的部分资金的W – 2171“生殖细胞和胚胎发育和家畜改良的操作”是表示感谢。瑞安卡拉汉,谁准备的这篇文章中的视频部分的技术插图,艺术人才也表示感谢。
Name of the reagent | Company | Catalog number | Comments (optional) |
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BioLife freeze medium | Agtech, Inc. | C18, C18A | 1.5 M ethylene glycol |
Emcare ethylene glycol freeze solution | ICPBio Reproduction | IC8, IC10 | 1.5 M ethylene glycol |
ViGro ethylene glycol freeze plus | Bioniche Animal Health | EVM835 | 1.5 M ethylene glycol |
Emcare 10% glycerol freeze solution | ICPBio Reproduction | IC12 | 1.34 M glycerol |
Emcare 1 M sucrose thaw | ICPBio Reproduction | IC16 | 1.0 M sucrose |
ViGro one-step thaw | Bioniche Animal Health | EVM247, EVM847 | 1.0 M sucrose |
ViGro thaw 1-2-3 plus | Bioniche Animal Health | EVM248, EVM848 | 5%, 2.5%, 0% glycerol with 0.5, 0.5, 0.6% sucrose |
Emcare CSU thawing kit | ICPBio Reproduction | IC20 | 6%, 3%, 0% glycerol with 10.3% sucrose |
BioLife holding and transfer medium | Agtech, Inc. | C15, C15A | modified PBS with 0.4% BSA (bovine serum albumin) |
Emcare holding solution | ICPBio Reproduction | IC2, IC4, IC6 | 0.4% BSA (bovine serum albumin), MOPS buffer (inert zwitterions) |
ViGro holding plus | Bioniche Animal Health | EVM024, EVM824 | |
SYNGRO Holding medium | Bioniche Animal Health | ESM024, ESM224, ESM828 | contains hyaluronan; no products of animal origin |
BioLife modified D- PBS | Agtech, Inc. | C06 | modified Dulbecco’s phosphate buffered saline |
BioLife BSA Fraction V | Agtech, Inc. | B09 | lyophilized bovine serum albumin, fraction V |
BioLife antibiotic-antimycotic | Agtech, Inc. | B01 | amphotericin-B, penicillin G, streptomycin sulfate |
BioLife trypsin kit | Agtech, Inc. | C22A | 25 g lyophilized trypsin, sterile water, sterile D-PBS |
Name of the equipment | Company | Catalog number | Comments (optional) |
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Biol-Cool controlled rate freezer | FTS Systems | BC-IV -40 | Methanol bath freezer |
Freeze Control controlled rate freezer | Cryologic | CL2200 | Liquid nitrogen freezer |