A técnica de dissecção ilustra a evisceração do vítreo, retina, ea lente do olho do rato, a separação por centrifugação, e caracterização de proteínas com os ensaios.
Enquanto a retina do rato tem emergido como um importante modelo genético para a doença hereditária da retina, o vítreo do mouse continua a ser explorado. O vítreo é uma matriz extracelular altamente aquosa que recobre a retina, onde intra-ocular, bem como proteínas extraocular acumulam durante a doença. 1-3 interações anormais entre vítreo e retina subjazem diversas doenças, como descolamento de retina, retinopatia diabética proliferativa, uveíte e Vitreorretinopatia proliferativa 1. , 4 O volume vítreo relativa do mouse é significativamente menor do que o vítreo humano (Figura 1), uma vez que a lente do mouse ocupa quase 75% do seu olho. 5 Isso fez com que estudos bioquímicos do vítreo do mouse desafiador. Neste artigo de vídeo, apresentamos uma técnica para dissecar e isolar o vítreo da retina do rato, que vai permitir o uso de modelos de ratos transgênicos para definir mais claramente o papel dessa matriz extracelular no desenvolvimento de doenças vítreo-retinianas.
Camundongos transgênicos são um importante modelo para a investigação de doenças da retina e vítreo-retinianas. 6-10 O corpo vítreo mouse, no entanto, compreende uma proporção significativamente menor do olho em relação ao vítreo humano devido ao grande lente no olho do rato. 5 Isso faz com que difícil isolar e purificar o vítreo mouse. Compreensão das mudanças proteína associada com o vítreo durante doenças como a retinopatia diabética proliferativa, relacionadas com a idade degeneração macular, uveíte e descolamento de retina vai dar dicas sobre os mecanismos pelos quais o progresso. Este protocolo experimental visualizadas fornece um meio para obter e purificar o corpo vítreo do mouse e maximizar a produção de proteína para as análises enzimáticas e proteômica.
The authors have nothing to disclose.
O financiamento foi fornecido pelo Fight for Sight and Research para prevenir a cegueira.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
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15°, BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
Microcon Centrifugal Filter Ultracel YM-100 or YM-50 | Millipore | 42412, 42415 | |
SOD Activity Colorimetric Assay Kit | Abcam | Ab65354 | |
Weck-Cel surgical spears | Medtronic | 0008680 | |
Protease inhibitor cocktail | Roche | 11 836 170 001 | |
Flamingo fluorescent gel stain | Bio-Rad | 161-04910 |